МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Основной задачей клинико-диагностических микробиологических исследований является установление этиологического агента инфекционного заболевания — микроорганизма-возбудителя. Для решения этой задачи используют различные диагностические методы, которые можно подразделить на две группы в зависимости от подхода к определению возбудителя. Первая группа включает методы, направленные на обнаружение присутствия в материале от больного самого возбудителя, а также его антигенов, нуклеиновых кислот (НК), характерных продуктов его жизнедеятельности или органических соединений, входящих в его состав.

Для обнаружения возбудителя применяют традиционные методы: микроскопические, микробиологические и биологические. Для выявления микробных антигенов используют им-мунохимические методы. Обнаружение НК и других биомолекул возбудителя осуществляют с помощью биохимических и молекулярно-биологических методов. Иммунологические, биохимические и молекулярно-биологические методы относятся к числу экспресс-методов диагностики инфекционных заболеваний, поскольку позволяют получить результат в течение нескольких часов.

Вторая группа диагностических методов основана на выявлении специфической иммунной реакции на данного возбудителя со стороны макроорганизма: гуморальной — антител против возбудителя (серодиагностика) или клеточной — ГЗТ (ал-лергодиагностика).

Существующие методы диагностики отличаются друг от Друга трудоемкостью, сроками проведения исследований, чувствительностью и специфичностью, а также информативностью полученных данных. Выбор методов исследования зависит от предварительного клинического диагноза заболевания, его сроков и определяется биологическими свойствами микроор-

ганизма-возбудителя и особенностями его взаимодействия с макроорганизмом в ходе инфекционного процесса.

Тема 11.1. МЕТОДЫ КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКИХ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОЦЕНКА ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

▲ План

▲ Программа

1. Выбор, взятие и транспортировка исследуемого материала.

2. Оформление документации.

3. Анализ результатов лабораторных исследований.

А Демонстрация

1. Образцы исследуемого материала (гной, экссудат, кровь, спинномозговая жидкость, моча и др.).

▲ Задание студентам

1. Заполнить типовые бланки для направления материала в лабораторию.

2. Изучить схемы и методы микробиологической диагностики основных групп микроорганизмов. При оценке результатов лабораторных исследований определить патогенные и условно-патогенные микроорганизмы.

▲ Методические указания ^ч

■ ОСНОВНЫЕ ПРАВИЛА ВЗЯТИЯ И НАПРАВЛЕНИЯ МАТЕРИАЛА В КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКУЮ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКУЮ ЛАБОРАТОРИЮ

Результаты микробиологических исследований во многом зависят от правильного выбора материала для исследования, соблюдения всех правил его получения и направления в лабораторию. Выбор материала определяется клинической картиной заболевания, предполагаемой локализацией возбудителя в организме на данном этапе инфекционного процесса и путями его выделения в окружающую среду.

1. Материал берут в ранние сроки заболевания, до начала антимикробной терапии. Это повышает вероятность выделения возбудителя. Следует исключить попадание в образец антибиотиков, антисептиков, дезинфектантов, а также частиц ваты, содержащей свободные жирные кислоты. Важным условием является достаточное количество материала для исследования (например, не менее 5—10 мл крови, 3—5 мл мочи и т.д.).

2. Любой клинический материал для микробиологических исследований рассматривается как потенциально опасный для человека. Поэтому при получении, хранении и транспортиров-

ке материала в лабораторию строго соблюдают правила техники бактериологической безопасности.

3. Материал собирают, соблюдая правила асептики, для предупреждения его возможной контаминации нормальной микрофлорой организма больного и микроорганизмами окружающей среды. Используют стерильные инструменты и стерильную посуду, закрывающуюся пробками. После взятия материала его в максимально короткие сроки доставляют в лабораторию. При отсутствии такой возможности материал сохраняют непродолжительное время, соблюдая определенные правила.

Способ сохранения материала определяется свойствами предполагаемого возбудителя и самого материала. В большинстве случаев возможно непродолжительное хранение в холодильнике при температуре 4 °С. Низкая температура препятствует размножению микробов нормальной микрофлоры, присутствующих в нестерильном материале (раневое отделяемое, мазки и смывы со слизистых оболочек, мокрота, моча, испражнения), а также способствует снижению активности микроби-цидных факторов организма (лизоцима, дефенсинов, комплемента, клеток иммунной системы). При необходимости длительного хранения материал можно подвергнуть глубокому замораживанию при температуре —20 °С и ниже.

Если предполагаемый микроб-возбудитель чувствителен к действию низких температур, материал необходимо сохранять в термостате при 37 "С. Для подавления размножения сопутствующей микрофлоры можно использовать антимикробные препараты.

Для предохранения микробов от высыхания материал рекомендуется помещать в специальные транспортные среды, не содержащие питательных веществ, но обеспечивающие оптимальные условия влажности, рН, осмолярности, ионной силы и т.д., необходимые для сохранения жизнеспособности возбудителя.

При подозрении на анаэробную инфекцию необходимо создать бескислородные условия: поместить материал в элективные транспортные среды для анаэробов или в емкость, заполненную газовой смесью, не содержащей 0₂.

4. Материал транспортируют в специальных биксах, пеналах или металлических контейнерах, которые после использования подвергают дезинфекции.

5. Для серологического исследования у больного натощак берут кровь в количестве 5—6 мл из локтевой вены при соблюдении правил асептики. Кровь ставят в термостат на 30—60 мин; образовавшийся кровяной сгусток отделяют от стенки стерильной стеклянной палочкой и оставляют материал в холодильнике на 18—20 ч. Отстоявшуюся сыворотку осторожно сливают в стерильную пробирку; в случае примеси эритроцитов ее

центрифугируют. Сыворотка может храниться в стерильных условиях в холодильнике до 1 мес. Для более длительного хранения ее замораживают при температуре от —20 до -70 "С.

6. В микробиологической лаборатории все остатки патологического материала подлежат уничтожению (путем автоклави-рования).

7. Все материалы, направленные в лабораторию, должны иметь сопроводительный документ — направление на специальном бланке, где указаны фамилия, имя, отчество больного, возраст, вид материала, дата взятия, предполагаемый клинический диагноз и другие сведения.