Микробиологическая диагностика натуральной оспы
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из высыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование. Впрепаратах из исследуемого материала (мазки, соскобы, биоптаты) в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие базофиль-ных включений (телец Гварниери), имеющих округлую или серповидную форму и располагающихся в околоядерной зоне цитоплазмы.
Вирусоскопическое исследование.Вирусы в исследуемом материале (отделяемом высыпных элементов, мазках, соскобах, биоптатах) могут быть обнаружены методом электронной микроскопии. Методом негативного контрастирования в препаратах выявляют крупные (до 300 нм) вирионы овальной или прямоугольной формы, покрытые внешней оболочкой. На поверхности вирусной частицы отчетливо видны непараллельно расположенные микротубулы. Необходимо помнить, что метод не позволяет дифференцировать вирус натуральной оспы от других представителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.).
Вирусологическое исследование.Для выделения чистой культуры вируса натуральной оспы из исследуемого материала при-
меняют различные типы однослойных клеточных культур приматов (Vero, эмбриональные диплоидные клетки человека, первичные культуры клеток почки обезьян и др.), а также куриные эмбрионы. Индикацию вируса производят по ЦПД, которое обычно развивается на 2—3-й день. Характерно появление очагов избыточного роста клеток, приводящего к образованию бляшек диаметром 1—3 мм, изменение формы (округление) клеток с последующей дегенерацией и слущиванием монослоя. В зараженных клетках выявляются характерные включения (см. выше). Для индикации применяют также реакцию гемад-сорбции. При заражении куриных эмбрионов материал наносят на поверхность хорион-аллантоисной оболочки. В положительном случае через 72 ч наблюдается появление характерных беловатых непрозрачных выпуклых бляшек (оспин), имеющих диаметр 1 мм, правильную округлую форму, ровные края и гладкую поверхность, без кровоизлияний. Для идентификации используют методы ИФ, РТГА, ИФА, РИА, РН и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в зараженной культуре.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические имолеку-лярно-биологические исследования. Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Обнаружение специфических противовирусных антител в крови используется для подтверждения диагноза натуральной оспы. Наличие антител в крови определяют с помощью различных серологических реакций, включая РТГА, РН, ИФА, РИА и др. Необходимо иметь в виду, что методы серодиагностики не позволяют дифференцировать вирус натуральной оспы от других представителей рода (вирус коровьей оспы, оспы обезьян и др.) по причине их антигенного сходства.
• Микробиологическая диагностика оспы обезьян МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: отделяемое из высыпных элементов (везикул, пустул), мазки, соскобы, биоптаты из пораженных участков кожи и слизистых оболочек полости рта, кровь.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Лабораторная диагностика оспы обезьян проводится аналогично диагностике натуральной оспы (см. выше). Главным методом, позволяющим дифференцировать возбудителей, яв-
ляется вирусологическое исследование. Основой является характер ЦПД: типично образование бляшек более крупных размеров (2—6 мм), наличие цитоплазматических мостиков между зараженными клетками, присутствие особых эозинофильных включений в цитоплазме, представляющих собой скопления вирусных белков, быстрая дегенерация клеточного пласта. • Микробиологическая диагностика контагиозногомоллюска
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: биоптаты из пораженных участков кожи.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Гистологическое исследование. Вгистологических препаратах из исследуемого материала в положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД вируса: наличие характерных эозинофильных включений (телец моллюска) в цитоплазме эпителиальных клеток.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Вирусные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
• Микробиологическая диагностика инфекций, вызванных вирусами простого герпеса 1-го и 2-го типов(HSV-\, HSV-2)
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высыпных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы, отделяемое с пораженных слизистых оболочек, конъюнктивы; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС); кровь, моча (при висцеральной игенерализованной формах).
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого материала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпителиальных клетках — наличие гигантских многоядерных клеток, вакуолизация цитоплазмы, изменения ядра — увеличение и слияние ядер между собой, фрагментация и агрегация хроматина, уплотнение кариолеммы, часто присутствуют внутриядерные включения (тельца Каудри). Метод обладает сравнительно низкой специфичностью и используется как ориентировочный.
Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики герпетической инфекции. Вирусы простого герпеса легко удается культивировать в клеточных культурах приматов {HeLa, эмбриональные фибробласты человека, клетки почек кролика и др.), а также в куриных эмбрионах. Индика-
цию вируса производят по характерному ЦПД (см. выше), которое обычно развивается на 1—3-й день и впоследствии приводит к дегенерации и слущиванию монослоя. Для идентификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в клетках зараженной культуры. Основным методом, дающим возможность дифференцировать вирусы простого герпеса 1-го и 2-го типа между собой, является рестрикционный анализ ДНК-фрагментов генома, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические и биохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др. Присутствие вирусспецифических ферментов (тимидин-кина-зы и др.) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью соответствующих биохимических реакций.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные НК в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Является информативной только при первичной герпетической инфекции, поскольку даже существенное нарастание титра антител в крови не всегда сопровождается развитием рецидива заболевания. Метод применяют преимущественно для эпидемиологического анализа. Исключение составляют случаи герпетического энцефалита, когда высокие титры противовирусных антител в спинномозговой жидкости являются косвенным признаком инфекции ЦНС. Наличие антител в крови испинномозговой жидкости (при поражениях ЦНС) определяют с помощью различных серологических реакций, включая РСК, РН, ИФА, РИА, непрямой ИФ идр.
• Микробиологическая диагностика ветряной оспы и опоясывающего лишая
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: материал из высыпных элементов (соскоб со дна везикулы или язвы, отделяемое), мазки, смывы из носоглотки; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого материала окрашивают по методу Романовского—Гимзы. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД в эпителиальных клетках, аналогичные ЦПД вирусов простого гер-
песа (см. выше). Метод обладает сравнительно низкой специфичностью и используется как ориентировочный.
Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры вируса из исследуемого материала применяется редко, что определяется его нестабильностью (легко инактивируется при транспортировке) и низкой скоростью репродукции in vitro. Вирус удается культивировать в культурах эмбриональных фиб-робластов человека. Признаки ЦПД появляются не ранее чем через 10 дней и сходны с ЦПД вирусов простого герпеса (см. выше). Для идентификации используют реакции ИФ, ИФА и др., позволяющие обнаружить вирусные антигены в зараженной культуре, а также ПЦР и метод ДНК-зондов.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках мазков, соскобов, биоптатов может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Антитела в крови обычно присутствуют в низком титре. Для их выявления применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Диагноз ставят на основании выявления специфических противовирусных иммуноглобулинов класса М (IgM), свидетельствующих об активной инфекции. Присутствие последних в крови новорожденных является показателем внутриутробного заражения. Четырехкратное нарастание титра специфических антител, выявляемое методом парных сывороток, свидетельствует о рецидиве (опоясывающем лишае).
• Микробиологическая диагностика цитомегаловирусной инфекции
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, моча, слюна и другие секреты, испражнения, мокрота, биоптат пораженного органа; спинномозговая жидкость (при поражениях ЦНС).
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование.Мазки из исследуемого материала окрашивают по методу Романовского—Гимзы, Папани-колау или гематоксилин-эозином. В положительном случае удается обнаружить признаки ЦПД — присутствие увеличенных "цитомегалических клеток", имеющих гигантские размеры (до 30 мм), содержащих плотное базофильное внутриядерное включение ("совиный глаз").
Вирусологическое исследование.Выделение чистой культуры
вируса из исследуемого материала является ведущим методом диагностики цитомегаловирусной инфекции. Вирус удается культивировать в культурах диплоидных эмбриональных фиб-робластов человека. При низком содержании возбудителя в материале признаки ЦПД (см. выше) могут появляться только через 4—6 нед. Поэтому для заражения обычно применяют метод "амплификации в культуре": исследуемый материал центрифугируют совместно с клетками культуры. При этом вирусные частицы оседают на поверхность клеточных мембран, и заражение происходит более эффективно. На 3-й день после заражения в клетках культуры определяют присутствие сверхранних и ранних вирусных антигенов методом ИФ. Для идентификации используют также ПЦР и метод ДНК-зондов.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса в клетках исследуемого материала может быть выявлено методом ИФ. Присутствие вирусных белков (антигенов) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА идр.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Является информативной только при первичной цитомегаловирусной инфекции, поскольку даже существенное нарастание титра антител в крови не всегда сопровождается развитием рецидива заболевания.
• Микробиологическая диагностика внезапной экзантемы
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.
МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ:
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молекулярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие белков (антигенов) вирусов-возбудителей (HHV-6, HHV-1) в исследуемом материале может быть выявлено с помощью чувствительных серологических реакций: ИФА, РИА и др.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Наличие специфических противовирусных IgM, выявляемых методом ИФА, свидетельствует об активной инфекции.
• Микробиологическая диагностика инфекционного мононук-
леоза
МАТЕРИАЛ ДЛЯ ИССЛЕДОВАНИЯ: кровь, слюна.
МЕТОДЫДИАГНОСТИКИ:
Цитологическое исследование. Вмазках крови при инфекционном мононуклеозе обнаруживают атипичные лимфоциты (не менее 10 %), которые являются наиболее ранними маркерами этой инфекции. Атипичные лимфоциты могут присутствовать в крови ипри других заболеваниях, но в значительно меньшем количестве.
Вирусологическое исследование.Применяют редко в связи со сложностью культивирования. Чистую культуру вируса Эпш-тейна—Барр выделяют из исследуемого материала путем заражения первичных культур В-лимфоцитов, полученных из пупочного канатика. С целью идентификации в клетках культуры определяют присутствие вирусспецифических антигенов методом ИФ. Для идентификации используют также рестрикцион-ный анализ, ПЦР и метод ДНК-зондов.
Экспресс-методы диагностики: иммунохимические и молеку-лярно-биологические исследования.Иммунохимические исследования. Присутствие антигенов вируса Эпштейна— Барр в клетках крови может быть выявлено методом ИФ.
Молекулярно-биологические исследования. Вирусные нуклеиновые кислоты в исследуемом материале обнаруживают с помощью ПЦР или метода ДНК-зондов.
Серодиагностика.Для инфекционного мононуклеоза характерно появление "гетерофильных" антител. Наиболее часто с диагностической целью определяют наличие антител к антигенам бычьих и бараньих эритроцитов (диагностический титр в РА 1:64). Для выявления противовирусных антител к антигенам капсида (УСА) и неструктурным раннему (ЕА) иядерному (EBNA) антигенам применяют чувствительные серологические реакции, в первую очередь ИФА. Для острой инфекции характерно наличие антител к УСА (IgM). Антитела к EBNA свидетельствуют о перенесенной и хронической латентной инфекции. В период реактивации вируса в крови присутствуют антитела всех трех типов.