МЕТОДЫ ВЫЯВЛЕНИЯ СПИРОХЕТ И ЛЕПТОСПИР
1. МЕТОД ИЗУЧЕНИЯ В НАТИВНОМ ПРЕПАРАТЕ
Для исследования живых спирохет и лептоспир используется метод тёмного поля и прямая люминесцентная микроскопия.
Препараты для них готовят одинаково с небольшими различиями:
- берут 1 каплю биосубстрата (кровь, вода, соскоб из язвы и пр.), наносят на стекло;
- осторожно закрепляют покровным стеклом и устанавливают на столик темнопольного, либо люминесцентного микроскопа;
- микроскопируют с иммерсионной системой.
МИКРОСКОПИЯ В ТЕМНОМ ПОЛЕ
1. Конденсор Аббе в обычном световом микроскопе заменяют на специальный тёмнопольный. При его отсутствии модернизируют обычный. Для этого:
- из чёрной фотографической бумаги вырезают круг размером с 50 копеечную монету;
- наклеивают на середину верхней линзы конденсора строго посередине с круговым зазором для света;
- фиксируют конденсор в микроскопе.
2. Перед микроскопией на конденсор наносят каплю дистиллированной воды для предотвращения рассеивания света, но можно не наносить.
3. На покровное стекло препарата наносят каплю иммерсионного масла и микроскопируют.
4. При работе с большим объектом в биоматериале можно вместо ОИ-90 использовать один из сухих объективов (*7, * 10, *20, *40), а масло заменить дистиллированной водой.
Учёт результатов. При микроскопии на тёмном фоне видны серебристые движущиеся спирохеты.
ЛЮМИНЕСЦЕНТНАЯ ПРЯМАЯ МИКРОСКОПИЯ
Особенности:
При приготовлении препарата к биоматериалу для прижизненной окраски добавляют флюорохром акридин оранжевый в рабочем разведении 1:1000 и только после этого накрывают покровным стеклом. Микроскопируют в люминесцентном микроскопе МЛ-1 или МЛ-2 с набором пропускающих и запирающих фильтров для УФ-лучей.
Вместо обычного иммерсионного масла используют нелюминисцирующее иммерсионное или его заменители (репелленты - дибутилфталат, диметилфталат). Микроскопируют в затемнённом помещении.
Учёт результатов. При микроскопии жизнеспособные клетки двигаются, имеют чаще зелёное свечение, нежизнеспособные и умирающие - оранжевые и обездвижены. Оба метода особенно удобны при обнаружении лептоспир, которые невозможно окрасить.
Приложение 2
ОКРАСКА СПИРОХЕТ В ЧИСТОМ ВИДЕ И В БИОМАТЕРИАЛЕ
1. ОКРАСКА ПО РОМАНОВСКОМУ - ГИМЗЕ
Техника окраски:
1) Мазки, фиксированные в метиловом спирте, окрашивают раствором красителя, который готовят непосредственно перед использованием (к 10 мл дистиллированной воды прибавляют 10 капель красителя Романовского – Гимзы, коммерческого).
2) Через час краситель сливают, препарат промывают водой и высушивают на воздухе, исследуют при иммерсии.
Оценка результата. Бактерии окрашиваются в фиолетово-красный цвет, цитоплазма клеток – в голубовато-синий, ядра – в фиолетовый красный.
При окрашивании простейших их цитоплазма приобретает голубой цвет, а ядра — красно-фиолетовый.
Примечание: если краситель спиртовой, то мазок не фиксируется.
2.Серебрение по Морозову.
3. Окраска по Граму.
4. Обработка по Бурри.
Таблица 1
Выбор методов индикации различных структурных элементов и определение некоторых микроорганизмов