Санитарная оценка туш и органов при цистицеркозах
При обнаружении на 40 см2 разреза мышц головы или сердца и хотя бы на одном из разрезов мышц туши более трех живых или погибших финн - тушу, голову и внутренние органы (кроме кишечника) направляют на утилизацию.
Внутренний и наружный жир (шпик) - снимают и направляют на вытапливание для пищевых целей. Шпик разрешается так же обеззараживать - замораживанием или посолом.
При обнаружении на 40 см2 разреза мышц головы или сердца более трех живых или погибших финн и при отсутствии или наличии не более трех финн на остальных разрезах вышеуказанных мышц туши – голову и сердце направляют на утилизацию, а тушу и остальные органы (кроме кишечника) подвергают обеззараживанию – посолкой, проваркой или замораживанием. Внутренний жир и шпик обеззараживают вытапливанием.
Обеззараженные посолкой или заморозкой туши крупного рогатого скота и свиней направляют на изготовление фаршевых консервов. Обеззараженные субпродукты направляют на промпереработку.
Кишки и шкуры независимо от степени поражения цистицеркозом – после обычной обработки выпускают без ограничения.
9.Контрольные вопросы:
1. Как выяснить природу обызвествленных включений обнаруживаемых внутри мышечных волокон?
2. Если при трихинеллоскопии в мышечных срезах внутри мышечных волокон обнаружены включения неправильной формы, то какие паразитарные заболевания надо исключить?
3. Каким методом исследования можно воспользоваться для получения достоверных результатов если на большую партию мороженой свинины в ветеринарном свидетельстве нет отметки о проведении трихинеллоскопии ?
4. Как определить безвредность колбасных изделий выработанных из свинины неисследованной предварительно на трихинеллез?
5. Мясо каких животных подлежит исследованию на трихинеллез?
6. Назвать места локализации инвазионных личинок трихинелл.
7. Биологический цикл нематоды Trichinella spiralis.
8. При отсутствии ножек диафрагмы из каких мышц берутся пробы для трихинеллоскопии?
9. Как дифференцировать личинки трихинелл от пузырьков воздуха, недоразвитых финн, саркоцист, известковых конкрементов и мышечной двуустки?
10.Зачем необходима дополнительная обработка мышечных срезов?
11.При обнаружении трихинеллеза как используются продукты убоя?
12.Порядок послеубойного ветсаносмотра туш при финнозе крупного рогатого скота, свиней, овец, оленей и кроликов?
13.Способы микроскопического исследования и определения жизнеспособности финн?
14.Чем отличается бычий цепень от свиного?
15.Локализация в организме финн тонкошейного цистицерка?
16.Санитарная оценка продуктов убоя при финнозах домашних животных.
17.Каккими методами обеззараживается финнозное мясо домашних животных?
Лабораторная работа №11
Тема: Бактериологического исследования мяса
Цель занятия: научить студентов правилам отбора проб мяса и органов от туш при вынужденном убое животных, общей схеме бактериологического исследования, санитарной оценке мяса по данным бактериологического анализа.
Время: 160 минут.
Место проведения: практикум кафедры ветеринарно-санитарной экспертизы продуктов животноводства и гигиены с.-х. животных.
Рекомендуемая Литература:
1. Ветеринарное законодательство, М., "Агропромиздат", 1988, т.4, с. 190.
2. Макаров В.А. Пищевые токсикоинфекции и токсикозы и их профилактика по линии ветеринарной службы.- М., УВА. 1981г.
3. Лабораторная диагностика сальмонеллезов человека и животных в кормах, продуктах питания и объектах внешней среды, М., «Агропромиздат» 1990г
4. Сенченко Б.С. «Ветеринарно-санитарная экспертиза сырья животного и растительного происхождения» Ростов-на-Дону, 2001
5. ГОСТ 21237-75 «Мясо. Методы бактериологического анализа»
6. Антипов Л.В. и др. «Методы исследования мяса и мясных продуктов»- М.: Колос, 2004.
План:Введение.
1. Методы отбора образцов.
2. Окраска препаратов.
2.1. Окраска по Грамму.
2.2 Окраска капсул методом Ольта.
2.3. Окраска капсул методом Ребигера..
3. Бактериологические исследования.
3.1. Бактериоскопические исследования.
3.2. Методы выявления аэробных бактерий.
3.2.1. Выявление бацилл сибирской язвы.
3.2.2.Выявление бактерий рода сальмонелл.
3.2.3. Выявление бактерий из рода кишечной палочки.
3.2.4. Выявление бактерий из рода протея.
4. УИРС - оформить сопроводительный документ – направление в ветеринарную лабораторию. По результатам исследований дать санитарную оценку мяса.
Введение
Бактериологические исследования мяса проводят по ГОСТ 21237-75 «Методы бактериологического анализа».
Настоящий стандарт распространяется на мясо и субпродукты от всех видов убойного скота и устанавливает методы бактериологического исследования для выявления в них аэробных бактерий (бацилл сибирской язвы, бактерий из рода сальмонелл, бактерий из рода кишечной палочки, бактерий пастереллеза, бактерии из группы кокков) и анаэробных бактерий (патогенных и токсигенных клостридий).
Бактериологическое исследование мяса и субпродуктов производят во всех случаях, предусмотренных действующей нормативно-технической документацией, правилами ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясопродуктов и другими нормативными актами, а также по требованию органов, осуществляющих ветеринарный или санитарный надзор.
1. МЕТОДЫ ОТБОРА ОБРАЗЦОВ
В зависимости от характера заболевания на бактериологическое исследование направляют от туши
- часть мышцы сгибателя или разгибателя передней и задней конечностей туши длиной не менее 8см или кусок другой мышцы размером не менее 8x6x6 см;
- лимфатические узлы — поверхностный шейный или собственно подкрыльцовый и наружный подвздошный вместе с окружающей их соединительной и жировой тканью, а от свиней — поверхностный шейный дорзальный (при отсутствии патологических изменений в области головы и шеи) или подкрыльцовый первого ребра и надколенный;
- долю печени с печеночным лимфатическим узлом или желчным пузырем, освобожденным от желчи, почку и селезенку.
Для бактериологического исследования на листериоз направляют: головной мозг, долю печени и почку.
Для бактериологического исследования на возбудителя сибирской язвы направляют лимфатический узел пораженного органа или лимфатический узел, собирающий лимфу с места локализации подозрительного фокуса, отечную ткань, ухо, а у свиней, кроме того, нижнечелюстной лимфатический узел.
При исследовании полутуш или четвертин туш берут кусок мышцы, лимфатические узлы и трубчатую кость.
При исследовании соленого мяса, находящегося в бочечной таре, берут образцы мяса и имеющиеся лимфатические узлы сверху, из середины и со дна бочки, а также, при наличии, трубчатую кость и рассол.
Примечание. Если берут часть печени, почки, селезенки, то поверхность разреза прижигают.
.Образцы завертывают каждый в отдельности в полиэтиленовую пленку по ГОСТ 10354 или пергамент по ГОСТ 1341, помещают в бумажный пакет, на котором ставят дату отбора образца, номер туши и направляют в лабораторию в общей таре (ящике).
При необходимости пересылки образцов в лабораторию, расположенную за npeделами
предприятия или хозяйства, где отбирают образцы, тару с образцами опечатывают или пломбируют.
В сопроводительном документе указывают:
- наименование продукта с указанием вида мяса, от которого взят образец, и его количество
- наименование предприятия или хозяйства, где отобран образец, и его адрес,
- номера образцов;
- причину направления образцов на исследование;
- краткие патологоанатомические данные и предполагаемый диагноз,
- дату взятия образцов и подпись лица, направившего их на исследование.
2. ОКРАСКА ПРЕПАРАТОВ
2.1.Окраска мазков по Грамму.
На фиксированный мазок помешают полоску фильтровальной бумаги и наливают карболовый генцианвиолет. Выдерживают 1 —2 мин, после чего снимают бумажку, сливают краску, и наливают на него раствор Люголя (мазок чернеет). Через 1—2 мин раствор сливают и приливают этиловый спирт на 0.5— 1 мин. Затем мазок промывают водой и дополнительно окрашивают фуксином Пфейффера в течение 1—2 мин. Затем промывают водой и высушивают мазок фильтровальной бумагой.
Окраску по Грамму можно применять в водоизменении Синева, согласно которому вместо карболового генцианвиолета применяют окрашенные полоски фильтровальной бумаги. Для окрашивания мазков на фиксированный мазок накладывают полоску фильтровальной маги, пропитанной спиртовым раствором кристаллвиолета, и наносят две-три капли воды, которые полностью впитываются бумагой, последняя плотно прилегает к стеклу. Выдерживают 2 мин, затем бумагу удаляют пинцетом и дальнейшую окраску производят по Грамму.
.2.2. Окраска капсул методом Ольта
Мазки окрашивают 2 %-ным водным раствором сафранина в течение 1—3 мин (лучше при подогревании) и быстро смывают водой. Раствор сафранина готовят перед употреблением: сафранин растворяют в воде, доведенной до кипения и фильтруют через бумажный фильтр.
.2..3. Окраска капсул методом Ребигера
Мазки окрашивают и фиксируют одновременно. Готовят раствор: 15—20 г генцианвиолета растворяют в 100 см3 40 %-ного формалина. Раствор оставляют на 8—10 ч при температуре 20 °С, фильтруют, после чего он готов к употреблению. Окрашивают нефиксированные мазки в течение —20 с, быстро промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.
3.Бактериологические исследования.
Каждый представленный к исследованию образец (мышцы, лимфатические узлы, паренхиматозные органы) перед посевом освобождают от видимой жировой и соединительной ткани, погружают на 2—3 мин в спирт и два раза обжигают с поверхности. Затем стерильными ножницами из глубины различных мест каждого образца вырезают кусочки размером не менее 2,О х 1,5 x 2,5 см; лимфатические узлы разрезают пополам. Затем все вырезанные кусочки измельчают стерильными ножницами.
Для посева составляют две пробы по 15г каждая; Одна проба состоит из кусочков мышц и лимфатических узлов, а вторая — из кусочков паренхиматозных органов (печени, почки и селезенки).
Каждую пробу в отдельности помешают в стерильный стакан (колбу) гомогенизатора для приготовления взвеси. Для этого в стакан (колбу) добавляют по 15см3 физиологического раствора, количество которого равно массе каждой пробы, и гомогенизируют пробы в электрическом гомогенизаторе. Вначале измельчают материал замедленной частотой оборотов, затем с большей частотой оборотов не более 2,5мин (в зависимости от числа оборотов).
Полученные взвеси отстаивают 10 мин. Из верхней части надосадочной жидкости пипеткой Пастера или петлей вносят на чашку с мясо-петонным агаром и элективной средой (Эндо, Левина) одну-две капли или одну петлю и тщательно втирают материал в поверхность предварительно подсушенных сред.
Одновременно с посевом на плотные среды производят посев материала для накопления сальмонелл в одну из сред обогащения (селенитовый Ф-бульон, Мюллера, Кауфмана, Киллиана, ахлористомагниевую среду «М»). Для этого 20 см3 взвеси из мышц или лимфатических узлов вносят в один флакон (колбу), а 20 см3 взвеси из паренхиматозных органов — в другой. В каждый флакон наливают по 50 см3 среды обогащения.
При отсутствии гомогенизатора допускается посев кусочка пробы размером не менее 2,0x1,5x2,5 см (путем нанесения отпечатков разными сторонами пробы на поверхность питательной среды в чашках с предварительно подсушенным мясо-пептонным агаром и элективной средой Эндо, Левина) При этом необходимо произвести также посев на элективные среды из лимфатического узла печени или соскоба с внутренней стенки желчного пузыря. Посев в среду обогащения производят во флаконы Сокслета (колбы), в которые предварительно налито по 50 см3 среды обогащения (селенитевой Ф-бульон, Мюллера, Кауфмана, Киллиана, хлористомагниевая среда «М») В один флакон вносится измельченная проба из мышц и лимфатических узлов массой 10г, а в другой — 10г из паренхиматозньгх органов.
Следует иметь в виду, что на селенитовом Ф-бульоне S. typhi suis и S. cholerae suis, как правило, не растут. Наилучший рост S. cholerae suis наблюдается на среде Киллиана.
Посевы помещают в термостат при температуре 37 °С. Через 18 ч чашки с первичными посевами на плотных средах извлекают из термостата и просматривают визуально, при необходимости— через лупу или под малым увеличением микроскопа.
При отсутствии роста через 18ч посевы выдерживают в термостате дополнительно до 24 ч.
На мясо-пептонном агаре отыскивают колонии, характерные для сибирской язвы, рожи, пастереллеза, листериоза, кокковых инфекций и др.
На чашках с элективными средами (Эндо, Левина) отыскивают колонии, характерные для бактерии семейства кишечных.
При обнаружении в мазках микробов, подозрительных на сибирскую язву, посевы на элективную среду и среду обогащения не производят.
.3 1. Бактериоскопическое исследование.
Из паренхиматозных органов (печени, почек, селезенки) лимфатических узлов туши или из пораженных участков органа и ткани приготовляют 2—10 мазков-отпечатков (в зависимости от характера патологических изменений и предполагаемого диагноза).
Препараты высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают одновременно и по Грамму и 2 %-ным раствором сафранина или раствором Ребигера.
При бактериоскопии мазков прежде всего обращают внимание на наличие возбудителя сибирской язвы.
При окраске сафранином сибиреязвенные бациллы окрашиваются в кирпично-красный цвет, капсулы, тени (следы распада бактерий) — в светло-желтый.
При окраске раствором Ребигера сибиреязвенные бациллы окрашиваются в темнофиолетовый цвет, а капсулы — в красно-фиолетовый.
В мазках из лимфатических узлов или других тканей свиней, крупного рогатого скота при очаговом поражении, наряду с типичными капсульными палочками, могут обнаруживаться атипичные бациллы сибирской язвы в виде сильно изогнутых или перекрученных длинных нитей, разбухших и потерявших правильные контуры, или распавшихся на отдельные, как бы осколки бацилл или теней различной величины, отрицательно окрашивающихся по Грамму или в виде конгломерата капсул, наполненных мельчайшими включениями
Наличие в мазках грамположительных палочек с обрубленными концами, а при окраске сафранином или раствором Регибера — палочек или цепочек с капсулами или теней в мазках из лимфатических узлов свиней со специфической для сибирской язвы патологической картиной, дает предварительное заключение об обнаружении (бактериоскопически) микробов, характерных для возбудителя сибирской язвы.
При наличии в мазках атипичных бацилл одновременно с бактериоскопией ставят реакцию преципитации.
В зависимости от результатов бактериоскопии и характера роста на питательных средах проводят исследования на наличие определенных микробов.
3.2. Методы выявления аэробных бактерий
3.2.1. Выявление бацилл сибирской язвы.
Сущность метода выявления бацилл сибирской язвы заключается в определении их характерной морфологии, в определении характера роста на питательных средах и выявлении патогенности путем заражения лабораторных животных.
Бациллы сибирской язвы обнаруживают в три последовательных этапа: бактериоскопия мазков из патологического материала; получение и изучение свойств чистой культуры на питательных средах; биологическая проба на лабораторных животных и, при необходимости, серологическое исследование.
При бактериоскопии мазков из патологического материала обращают внимание на форму и расположение отдельных микробов и наличие капсул. Характерный вид сибиреязвенных палочек и обилие их в мазке нередко позволяет поставить диагноз уже по результатам бактериоскопического исследования.
Бациллы сибирской язвы на чашках с мясо-пептонным агаром через 16—24 ч растут в виде серо-белых шероховатых с бахромчатыми краями колоний, напоминающих под лупой или при малом увеличении микроскопа «головку медузы», «львиную гриву». Из подозрительной колонии делают посев в пробирку с мясо-пептонным бульоном.
На мясо-пептонном бульоне сибиреязвенные бациллы растут в виде крупных хлопьев, оседающих на дно пробирки к концу первых суток, с образованием осадка, напоминающего комок ваты, бульон остается прозрачным.
Из бульонной культуры готовят препарат «раздавленная» или «висячая капля». При микроскопии препарата обнаруживаются неподвижные сибиреязвенные палочки,
При необходимости дифференциации сибиреязвенных бацилл от сапрофитных бацилл, которые морфологически очень сходны, выделенную чистую культуру на мясо-пептонном агаре или мясо-пептонном бульоне исследуют: на тест «жемчужное ожерелье», чувствительность к сибиреязвенному фагу, свертываемость желтка куриного яйца, гемолитическую активность, капсулообразование.
Постановка биологической пробы. Для постановки биологической пробы на животных часть исходного материала растирают в ступке со стерильным песком и небольшим количеством физиологического раствора 0,5 см3 взвеси впрыскивают двум белым мышам под кожу в области спины.
При исследовании материала от свиней (подчелюстные лимфатические узлы) опытных животных заражают только полученной чистой культурой.
В случае гибели мышей, что обычно наблюдается через 24—72 ч, их вскрывают: из крови сердца, печени, селезенки и места заражения приготовляют мазки, а из органов делают посевы.
В материале из свиней на мясо-пептон ном агаре колонии сибиреязвенныех бацилл могут быть атипичными, ослабленной вирулентности или невируленчными, но обладающими всеми другими характерными признаками сибиреязвенных возбудителей.
Основанием для постановки диагноза на сибирскую язву являются: наличие в мазках из патологического материала капсулообразующих палочек, а из колоний грамположительных — неподвижных бацилл; характерный рост на питательных средах; положительная реакция преципитации и положительный результат биологической пробы.
3.2.2. Выявление бактерий рода сальмонелл.
Сущность метода выявления сальмонелл заключается в определении их характерного роста на элективных средах и установлении ферментативных и серологических свойств сальмонелл.
Выявление сальмонелл проводится в четыре последовательных этапа" первичный (прямой) посев, обогащение, посев со среды обогащения и подтверждение.
Первичный посев производится путем посева взвеси исследуемого материала на плотные элективные среды. Эти среды выдерживают в термостате при температуре 37 ºС и исследуют на присутствие колоний, которые являются типичными или подозрительными на сальмонеллы
На элективных средах сальмонеллы растут, образуя характерные колонии:
- на фуксин-сульфитном агаре (агаре Эндо) сальмонеллы растут в виде круглых, бесцветных или слегка розоватых прозрачных, или полупрозрачных колоний;
- на эозин-метиленовом синем агаре (агаре Левина) сальмонеллы растут в виде прозрачных, бледных, нежно-розовых или розовато-фиолетовых колоний.
Обогащение проводят путем посева на жидкие селективные среды. Эти среды выдерживают в термостате при температуре 37°С. На селенитовом Ф-бульоне лучшей температурой для накопления сальмонелл является 43ºС. Пересев производят после обогащения из жидких сред на плотные селективные диагностические среды, которые после термостатирования при температуре 37°С исследуют на присутствие колоний типичных или подозрительных на сальмонеллы.
На селективных средах сальмонеллы растут, образуя характерные колонии
- на бактоагаре Плоскирева сальмонеллы растут в виде бесцветных колоний, но колонии более плотные и несколько меньшего размера, чем на среде Эндо;
- на висмут-сульфитном агаре сальмонеллы, как правило, растут в виде черных или коричневых колоний с характерным металлическим блеском. При этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией. Исключение составляют некоторые серологические типы из группы С, которые на этой среде растут в виде нежных светло-зеленых или крупных серовато-зеленых колоний.
Подтверждение наличия бактерий из рода сальмонелл проводят путем определения соответствующих биохимических и серологических свойств колоний.
В случае отсутствия роста бактерий сальмонелл при первичном (прямом) посеве на элективных средах, через 12—24ч проводят высев на селективные среды со сред обогащения: из сред Мюллера, Кауфмана и Киллиана через 12—16ч, из селенитового Ф-бульона и хлористо-магниевой среды «М» через 18—24ч.
Содержимое флаконов перед пересевом тщательно перемешивают и высевают штрихом петлей диаметром 2,5—3 мм на чашку с висмут-сульфитным агаром, бактоагаром Плоскирева или агаром Эндо.
Посевы помещают в термостат на 18—24ч при температуре 37ºС, а посевы на висмут-сульфитном агаре — на 48 ч.
При обнаружении на чашках роста подозрительных колоний исследуют три—пять колоний с каждой чашки.
Подозрительные колонии бактерий сальмонелл исследуют в следующем порядке: из части колоний приготовляют мазок и окрашивают по Грамму, затем проводят исследование на подвижность.
Бактерии сальмонеллы, как и все бактерии семейства кишечных, представляют собой палочки с закругленными концами, неспорообразующие, в большинстве подвижные (S. pullorum и S. gallinarum неподвижные), окрашивающиеся по Грамму отрицательно.
Оставшуюся часть колонии растирают в конденсационной воде скошенного агара или в одной-двух каплях добавленного к агару стерильного бульона. Полученная взвесь служит исходным материалом для дальнейшего исследования.
Часть взвеси испытывают в реакции агглютинации на предметном стекле. Реакцию ставят с поливалентной адсорбированной агглютирующеи О-сывороткой групп А, В, С, D и Е. В качестве контроля применяют каплю физиологического раствора.
Для проведения реакции агглютинации на предметное стекло наносят каплю поливалентной адсорбированной сыворотки и рядом каплю физиологического раствора. Затем бактериологической петлей захватывают часть взвеси и растирают ее в капле сыворотки, начиная с края капли, постепенно захватывая всю каплю. Петлю обжигают, захватывают петлей еще взвеси и вносят в каплю физиологического раствора (контрольного), также растирая до получения равномерной взвеси.
При положительной реакции через 1—2 мин в капле сыворотки образуются хлопья или комочки, а сама жидкость просветляется, что особенно заметно при покачивании стекла.
В физиологическом растворе (контрольном) наблюдается равномерная муть.
При получении положительной реакции агглютинации с адсорбированной поливалентной сывороткой проводят реакцию агглютинации на стекле с адсорбированными монорецепторными О-сыворотками. Следует начинать с более распространенных групп В, С, D и Е, в частности, в группе В с IV, в группе D с IX, в группе С с VII, в группе Е с III, X.
При отрицательной реакции агглютинации с одной колонией дополнительно исследуют еще не менее трех-четырех колоний.
При характерном росте на дифференциальной среде, избирательной положительной реакции агглютинации с монорецепторной О-сывороткой и при наличии подвижных грамотрицательных палочек дается предварительное заключение о том, что выделенная культура относится к сальмонеллам.
Одновременно с реакцией агглютинации материал засевают на трехсахарный агар Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука.
Посев на трехсахарный агар делают сначала штрихом по скошенной поверхности, а затем уколом в глубину столбика. Среду инкубируют в термостат в течение 16—18ч. При наличии сальмонелл янтарный цвет среды изменяется следующим образом: столбик — желто-бурый, скошенная поверхность цвет не изменяет. По наличию трещин и разрыву столбика агара устанавливают образование газа, по изменению окраски столбика (почернение) — наличие сероводорода.
Сальмонеллы, не образующие сероводорода, изменяют цвет столбика агара в желтый цвет. Бактерии, не относящиеся к сальмонеллам, расщепляющие мочевину, окрашивают столбик и скошенную поверхность в ярко-красный цвет, а бактерии, сбраживающие лактозу и сахарозу, изменяют цвет среды в синий.
Если культуры ферментируют лактозу и глюкозу с образованием газа и расщепляют мочевину, они не принадлежат к бактериям рода сальмонелл.
Культуры, не ферментирующие лактозу и сахарозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием газа) подвергают дальнейшему исследованию, для чего культуру со среды Крумвиде-Олькеницкого в модификации Ковальчука исследуют с монорецепторной О-сывороткой (материал берут с верхней части скошенной поверхности). Затем эту культуру агглютинируют с монорецепторными Н-сыворотками, сначала с первой фазой, затем со второй фазой Н-антигена, входящего в данную группу (для агглютинации с Н-сыворотками культуру берут ближе к конденсационной жидкости в пробирке, где особи более подвижны) и устанавливают серологический тип сальмонелл.
Если культуры дают отрицательные результаты агглютинации с монорецепторными О-сыворотками, но при характерном росте на элективной среде и соответствующих морфологических признаках (грамотрицательные подвижные палочки) делают посев на среды с углеводами:
в короткий пестрый ряд (включая среды с глюкозой, лактозой, сахарозой, маннитом). В бульон Хоттингера для определения образования индола и сероводорода под пробку в пробирку с бульоном помещают индикаторные бумажки, приготовленные по пп. 3.1.25 и 3.1.26.
Посевы выдерживают в термостате при температуре 37 °С в течение 18—20 ч, после чего их просматривают под микроскопом. К бактериям из рода сальмонелл относятся бактерии, не ферментирующие лактозу и сахарозу и ферментирующие глюкозу и маннит (S. typhi suis не ферментирует маннит), образующие сероводород (S. cholerae suis и S. typhi suis сероводород не образуют) и не образующие индол.
В случае выявления культур сальмонелл с отклонением от типичных свойств, для их окончательной идентификации при необходимости проводят дополнительные исследования.
Если культура обладает ферментативными свойствами, типичными для сальмонелл, но не агглю-тинируется сальмонеллезными О- и Н-сыворотками, следует испытать ее способность лизироваться сальмонеллезным О-фагом.
Положительный результат реакции является дополнительным признаком, указывающим на принадлежность культуры к роду сальмонелл.
Для испытания культур на чувствительность к О-бактериофагу на пластинке хорошо подсушенного щелочного агара (рН 7,2—7,4) стерильной пробиркой с ровными краями делают 5—6 насечек. На каждую насечку наносят по две капли 4- или 18-часовой бульонной культуры испытуемого штамма с помощью тонкой оттянутой пастеровской пипетки или петли. Взамен бульонной культуры можно использовать взвесь суточной агаровой культуры на физиологическом растворе.
После подсыхания культуры на нанесенные капли петлей или пастеровской пипеткой меньшего диаметра наносят каплю О-бактериофага, на другую в качестве контроля наносят каплю бульона. Фаг наносят в разведении 10-кратном и 100-кратном (в зависимости от указанного на этикетке). На одной чашке можно испытывать одновременно 5—6 культур.
Чашки с нанесенными культурами и О-бактериофагом помещают в термостат при температуре 37°С на 18—20 ч, после чего учитывают результаты. Положительный результат реакции определяется по появлению на месте нанесения фага четко очерченной зоны лизиса (сливного или отдельных негативных колоний), которая отчетливо видна невооруженным глазом. Отрицательный результат реакции определяют отсутствием лизиса, в местах нанесения фага имеет место рост культуры, как в контрольном месте.
О-фаг может быть использован также для предварительного испытания культуры. Для этого подозрительные колонии, выросшие на чашках с дифференциальной средой (Эндо, Плоскирева, висмут-сульфитным агаром и др.), снимают и пересевают на один из секторов чашки Петри со слабощелочным агаром. В центр каждого засеянного сектора тонкой пастеровской пипеткой или петлей наносят каплю 0-фага, чашки помещают в термостат и на следующий день учитывают результаты.
Обработка результатов
Обнаружение подвижных (кроме S. pullorum и S. gallinarum) палочек, отрицательных по Грамму, не ферментирующих лактозу и сахарозу, ферментирующих глюкозу и маннит с образованием кислоты и газа (S. typhi suis не ферментирует маннит), дающих положительную реакцию агглютинации с монорецепторными О- и Н-сальмонеллезными сыворотками, указывает на присутствие в мясе бактерий из рода сальмонелл.