Методика исследования смывов
5.1. Объем исследования
5.2.1. Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек
5.2.2. Методика посева на общую бактериальную обсемененность
5.2.3. Методика посева на St.aureus
5.2.4. Оценка результатов
Объем исследования
При текущем санитарном надзоре за предприятиями общественного питания и торговли, детскими и лечебными учреждениями исследование смывов проводят на присутствие бактерий группы кишечных палочек.
Исследование на наличие St.aureus, бактерий рода Рroteus, определение общей бактериальной обсемененности производится по показаниям. Например:
а) Исследование смывов на стафилококки проводят при обследовании кремово-кондитерских цехов, столовых и ресторанов, молочных кухонь и других пищеблоков, обращая особое внимание на контроль рук персонала;
б) общую микробную обсемененность можно определять для установления эффективности санитарной обработки посуды в посудомоечных машинах, а также при оценке новых моющих и дезинфицирующих средств.
В случае повторного обнаружения бактерий группы кишечных палочек в значительном проценте смывов на объекте рекомендуется провести исследование смывов с инвентаря, оборудования и рук персонала на наличие энтеробактерий*(11).
Методика посева смывов на бактерии группы кишечных палочек
При плановых санитарно-гигиенических обследованиях для выявления БГКП производят посевы смывов на среды Кесслер с лактозой или КОДА, при этом в пробирку со средой опускают тампон и переносят оставшуюся смывную жидкость.
Посевы на средах Кесслер или КОДА инкубируют при 37°С, через 18 - 24 часа со среды Кесслер производят высев на плотную дифференциальную среду Эндо, со среды КОДА высев производят только в случае изменения окраски среды или ее помутнения. Дальнейший ход исследования см. в п.4.4.1.
Методика посева на общую бактериальную обсемененность
Для определения общей обсемененности поверхностей контролируемых предметов взятие смывов производят по методике, описанной выше (п.4.3.), перед посевом в пробирку с тампоном добавляют 5 мл 0,1% пептонной воды или изотонического раствора хлорида натрия. Тампон тщательно отмывают, после чего 1,0 мл смывной жидкости помещают в чашку Петри и заливают расплавленным МПА. Чашки помещают в термостат при 30°С. Предварительный подсчет выросших колоний производят через 48 часов, окончательный - через 72 часа. Количество колоний, выросших на чашке, умножают на 10 для определения общего количества бактерий, содержащихся на поверхности исследуемого предмета.
Методика посева на St.aureus
Для выявления St.aureus посев смывов производят на чашки с МСА или ЖСА, непосредственно втирая посевной материал тампоном, затем последний погружают в пробирку с 6,5% солевым бульоном. Если необходимо определить и бактерии группы кишечных палочек, то остатки смывной жидкости переносят пипеткой в среды Кесслер или КОДА (п.4.4.1.).
Оценка результатов
Обнаружение санитарно-показательных и условно-патогенных бактерий в смывах с поверхностей чистых, подготовленных к работе предметов, инвентаря и оборудования, а также рук персонала свидетельствует о нарушении санитарного режима и дает основание для проведения административных мер.
Рецепты питательных сред
6.1. Изотонический раствор - 0,85% раствор хлористого натрия
6.2. 0,1%-й водный раствор пептона (пептонная вода)
6.3. Среда для определения общего количества мезофильных аэробных и
факультативно анаэробных микроорганизмов
6.4. Среда Кесслер с лактозой
6.5. Среда КОДА
6.6. Бульон с лактозой, бычьей желчью и бриллиантовым зеленым - ЖЛБ
6.7. ЕС-бульон (для подтверждающего посева на Е.coli по методу
НВЧ)
6.8. Среда Гисса с глюкозой
6.9. Среды Эндо, Левина
6.10. Среда для определения индолообразования
6.11. Бульон на переваре Хоттингера для определения индолообразования
6.12. Среда Кларка
6.13. Раствор метилового красного для теста с метил-рот
6.14. Реактивы для реакции Фогеса-Проскауэра
6.15. Цитратная среда Козера
6.16. Среда Симмонса
6.17. Среда Ресселя с мочевиной из сухих питательных сред
6.18. Тресахарный агар с мочевиной по Олькеницкому
6.19. Солевой бульон
6.20. Сахарный бульон
6.21. Стерильное молоко
6.22. Молочно-солевой агар
6.23. Желточно-солевой агар
6.24. Молочный агар
6.25. Цитратная плазма кролика
6.26. Среда для определения реакции окисления маннита в анаэробных
условиях
6.27. Среда Плоскирева из сухих питательных сред
6.28. Висмут-сульфит агар (среда Вильсон-Блера)
6.29. Среда для определения ферментации мальтозы
6.1. Изотонический раствор - 0,85% раствор хлористого натрия
Для приготовления изотонического раствора с рН 6,9 - 7,0 используют дистиллированную воду, рН которой проверяют индикатором бромтимолблау, при его добавлении цвет воды должен быть бутылочно-зеленым. В иных случаях воду не используют. Изотонический раствор разливают в пробирки или флаконы в необходимых количествах, стерилизуют при 1 атм. 20 мин.