Патогенез и иммунитет при гельминтозах
Хозяин и паразитирующие в его организме гельминты постоянно находятся в сложных антагонистических отношениях, оказывая один на другого определенное влияние. В результате их взаимодействия изменяются жизнедеятельность и биологические свойства каждого из них.
Влияние гельминтов на организм хозяина может~быть самым разнообразным в зависимости от биологических и физиологических процессов в период их развития и от защитных свойств и ответных реакций организма животного, а также от условий внешней среды.
Гельминты оказывают патогенное (болезнетворное) воздействие на животных, которое складывается из аллергического (антигенного), токсического и механическо* го действия, инокуляции микробов и поглощения пищевых веществ.
Антигенное действие, согласно современным воззрениям, играет ведущую роль в возникновении и развитии патологического процесса при трихинеллезе, ранней фазе (миграционной) аскаридатозов и других гельминтозах. Оно развивается у животных в результате сенсибилизации (повышения чувствительности) их организма продуктами обмена и распада паразитических червей. Наиболее ярко аллергия проявляется при ПОВТОРНОМ заражении животных гельминтозами (супер- и реинва-зии). Аллергические реакции могут носить как местный характер (чаще в форме воспаления), так и общий (вплоть до анафилактического шока), что отрицательно сказывается на развитии молодняка и продуктивности взрослых. Характер аллергических (иммунологических) реакций зависит от степени сенсибилизации организма хозяина антигенами гельминта и других причин.
В патогенезе (механизме развития) гельминтозов, вероятно, значительная роль принадлежит токсическо-м у действию ядовитых веществ — продуктов секреторных желез и др. Наиболее резко оно выражено при мо-ниезиозе ягнят, дрепанидотениозе гусей и других болезнях. Раньше преувеличивалась роль токсинов в патогенезе гельминтозов.
Часто паразитические черви оказывают механическое воздействие. В местах локализации взр.ослые гельминты повреждают разные ткани органами фиксации (присосками, зубами, кутикулярными шипами и др.). Hall пример, миграция личинок по лимфатической, кровеносной системам и внутренним органам животного сопровождается разрывом капилляров и патологическими изменениями в органах, тканях (слизистой кишечника, лимфоузлах, коже). При скоплении большого количества гельминтов (от десятков до тысяч паразитов) может произойти закупорка кишечника, бронхов, прободение, разрывы органов и атрофия тканей с~последующими осложнениями, летальным исходом.
Гельминты и их личинки инокулируют микробов, фильтрующихся вирусов и патогенных простейших в поврежденные ткани животных, в результате чего могут возникать или осложняться инфекционные и некоторые протозойные болезни. Аскаридоз свиней способствует появлению в хозяйствах рожи, геморрагической септицемии и чумы.
Связь гельминтов и возбудителей инфекционных болезней К. И. Скрябин образно выразил словами: «Гель-минтозная инвазия открывает ворота инфекции».
Следует также отметить, что некоторые инфекционные заболевания способствуют более тяжелому течению гельминтозов. Например, в птицеводческих хозяйствах, неблагополучных по паратифу, утки легко заражаются и тяжело переболевают дрепанидотениозом и другими не специфичными для них гельминтозами, а также с трудом поддаются излечению.
Поглощение паразитическими червями пищевых веществ и тканей хозяина снижает его защитные силы и упитанность. Гельминты-гематофаги выделяют особые вещества, которые препятствуют свертыванию крови, в результате чего кровотечения из ранок продолжаются длительное время. Потребляя из организма хозяина витамины (особенно витамин А), гельминты могут вызвать или усилить витаминную недостаточность. У инвазиро-ванных животных снижается аппетит.
Под влиянием отмеченных выше воздействий паразитических червей в организме животного могут развиться патологические процессы не только в местах обитания паразитов, но и в органах и тканях, свободных от гельминтов. Гельминтозы надо считать как заболевания всего организма.
Следует подчеркнуть, что степень болезнетворного влияния возбудителей гельминтозов на организм животного в значительной степени зависит от состояния иммунитета (невосприимчивости) к паразитическим червям и внешних условий.
Иммунитет при гельминтозах представляет собой изменчивый биологический процесс, развивающийся в результате взаимодействия организмов хозяина и паразита. Работами последних лет установлено, что он вырабатывается преимущественно в период пребывания паразитических червей в организме хозяина в личиночных стадиях (особенно во время линьки личинок).
В создании иммунитета.при гельминтозах принимают участие специфические защитные механизмы (антитела) и неспецифические (барьеры кишечной стенки, печени, лимфоузлов), тканевые реакции аллергического характера, которые сопровождаются обильной пролиферацией и образованием капсул вокруг паразитов, а также нервно-рефлекторные реакции организма.
Способность к выработке иммунитета при заболеваниях, вызываемых паразитическими червями, тесно связана с общим состоянием организма: хорошие условия содержания и полноценное кормление животных (достаточное количество белка и витаминов) усиливают у них защитные реакции. На этом основан принцип патогенетической терапии гельминтозов (назначение больным животным рыбьего жира и других препаратов).
Неодинаково проявляются гельминтозы у животных (от гельминтоносительства до резко выраженных клинических признаков болезни) при различной напряженности иммунитета.
В отличие от иммунитета при инфекционных и прото-зойных болезнях иммунитет при гельминтозах имеет ряд существенных особенностей, обусловленных своеобразием строения и развития паразитических червей. По действию он непродолжителен, не создает полной невосприимчивости, а его напряженность зависит от интенсивности инвазии, числа повторных заражений животных и других причин.
Гельминтозы патогенетически следует рассматривать как аллергические заболевания, а аллергические реакции — как один из механизмов иммунитета (В. С. Ершов).
Различают естественный (абсолютный или относительный), приобретенный и возрастной иммунитет.
По степени напряженности приобретенного иммунитета болезни, вызываемые паразитическими червями, можно условно разделить на три группы: 1) гельминтозы со стойким иммунитетом — при супер- и реинвазии (повторном заражении), животные, как правило, клинически не заболевают (ценуроз овец, диктиокаулез телят, аскаридоз и метастронгилез свиней и др.); 2) гельминтозы с кратковременным иммунитетом, при котором защитные механизмы выражены слабее, поэтому нередко бывает повторное заражение (мониезиоз, аскаридиоз, фасциолез и др.); 3) гельминтозы со слабо развитыми защитными реакциями (стронгилидозы, оксиуратозы и др.), поэтому почти все животные способны повторно заболевать.
В последние годы в СССР проводятся научные исследования по изготовлению вакцин и сывороток против дик-тйокаулеза крупного рогатого скота, а также других гельминтозов (искусственная иммунизация, как разновидность приобретенного иммунитета).
Диагностика гельминтозов
Прежде чем проводить лечебно-профилактические мероприятия при определенных гельминтозах сельскохо-- зяйственных и промысловых животных, необходимо своевременно поставить точный диагноз болезни. Существуют две группы методов диагностики гельминтозов — прижизненные и посмертные. Кроме того, надо уметь дифференцировать гельминтозы и другие инвазионные, а также инфекционные заболевания.
ПРИЖИЗНЕННАЯ ДИАГНОСТИКА ГЕЛЬМИНТОЗОВ
Диагноз на гельминтозы при жизни животных ставят на ,основании результатов лабораторных методов иссле-' дований и диагностических дегельминтизаций (прямых методов), а также иммунобиологических реакций (косвенных методов). Подсобную роль в диагностике гельминтозов играют данные исследований промежуточных хозяев (при биогельминтозах), клинические и эпизоото-логические наблюдения.
Основные методы диагностики — лабораторные исследования, позволяющие часто обнаруживать возбудителей гельминтозов или их яйца и личинки в экскретах (фекалиях, моче, мокроте), секретах (желчи), тканях (крови, мышцах), органах( кусочках кожи), в со-держим,ом пунктатов и абсцессов.
Лабораторные методы диагностики гельминтозов животных легко выполнимы и достаточно точны, поэтому их широко применяют в производственных условиях (в ветеринарных лабораториях и в других ветеринарных учреждениях).
В зависимости от целевого назначения лабораторные исследования подразделяют на гельминтоовоскопические, гельминтоларвоскопические и гельминтоскопические ме* тоды исследований.
Гельминтоовоскопические методы исследований позволяют выявлять в экскретах, секретах и со-скоб/зх яйца многих паразитических червей. Широко применяется в ветеринарной практике исследование фекалий по методам Фюллеборна, Дарлинга и др.
Гельминтоларвоскопические методы исследований используют для обнаружения личинок гельминтов (диктиокаул, мюллерий и др.). Из этой группы нередко применяют исследование фекалий по методам Бер-мана — Орлова и Вайда.
Гельминтоскопические, или макротел ь-минтоскопические, исследования применяют с диагностической целью для обнаружения выделяемых нару-жугельминтов или их фрагментов (члеников цестод). В практических условиях этим способом устанавливают диагноз на аскаридоз свиней, мониезиоз жвачных, дре-панидотениоз гусей и другие гельминтозы.
Из лабораторных методов диагностики гельминтозов животных большое практическое значение имеют: а) гель-минтокопрологические исследования (исследование фекалий): б) исследование выделений других органов; в) исследование тканей.
Гельминтокопрологпческие исследования
Большинство гельминтов, паразитирующих у животных, выделяют яйца, личинок и фрагменты тела (членики) во внешнюю среду через желудочно-кишечный тракт. Поэтому гельминтокопрологические исследования являются основными методами прижизненной диагностики гельминтозов. Плановые гельминтокопрологические обследования животных в хозяйствах проводят два раза в год: первый раз в марте—апреле и второй в ноябре — декабре. Для плановых исследований фекалии берут от трех возрастных групп. Например, на свиноферме обследуют копрологически 3—4-месячных поросят, 5—7-месячных подсвинков и взрослых свиноматок. Берут по 20— 25 проб фекалий от каждой группы. Результаты гельмин-токопрологических исследований во многом зависят от правильности отбора и упаковки проб фекалий и своевременной доставки их в ветеринарные учреждения. Для упаковки фекалий используют кульки и пакетики из плотной бумаги. Жидкие фекалии можно пересылать в небольших баночках (бактериологические пробирки непригодны) Для исследований пригодны пробы только свежих фекалий. Их берут у крупных животных из прямой кишки рукой в резиновой перчатке: от свиней, телят, овец и коз фекалии следует брать средним и указательным пальцами в напальчниках.
Для этих же целей предложен специальный прибор, состоящий из стальных браншей, переходных ветвей и двух прикрепленных к ветвям полусферических поверхностей. Взятие фекалий из прямой кишки животных при помощи этого прибора облегчает труд ветеринарных работников и повышает производственную культуру этой манипуляции.
У кроликов фекалии в количестве нескольких шариков извлекают путем надавливания на брюшную стенку в области прямой кишки.
Иногда допускается взятие проб фекалий с пола, если они свежие неизвестно, от какого животного. От одного животного берут не менее 10—20 г фекалий. От птиц, пушных зверей, собак, кошек и диких хищников (в зоопарках) фекалии собирают с чистого пола клеток (групповые пробы).
Все пробы фекалий этикетируют: по краю пакета или листа бумаги (где он не будет соприкасаться с экскрементами) простым карандашом пишут номер пробы (иногда и кличку коров). К пробам фекалий прилагают опись, в которой указывают наименование хозяйства, бригады, вид, пол и возраст животных (для взрослых — кличку или инвентарный номер) и дату взятия проб.
В сопроводительной желательно указать цель исследований фекалий (например, для контроля проведенной дегельминтизации).
Необходимо стараться быстрее доставить пробы фекалий в ветеринарную лабораторию и исследовать их без задержки, потому что при комнатной температуре че» рез 16—20 часов из яиц кишечных стронгилят выходят
Рис. 1. Часть предметов набора для гельминтологических исследований:
/ — воронки с пробирками для метода Бермана—Орлова; 2 —спринцовки для отсасывания жидкости из стаканчиков; 3 —, ситечки в стаканчики и воронки; 4 — стаканы для метода последовательного промывания (175 мл); 5 — полуконические стаканчики для упрощенного метода гельминтоларвоскопических исследований (50 мл); 6 — цилиндр для промывания стеклянных палочек и спринцовок; 7 —стаканчики для метода Фюллеборна (75 мл); 8 —штатив для пробирок и спринцовок.
личинки, что затрудняет диагностику диктиокаулеза и протостронгилидозов, а также других гельминтозов.
Если пробы фекалий в день взятия не исследуют, то их помещают в холодильник или подвал при температуре не выше 10°. Дезинфицирующие средства не приостанавливают развитие личинок внутри яиц гельминтов.
Результаты исследования фекалий регистрируют в специальном журнале:
Оборудование для гельминтокопрологических исследований. Достоверность гельминтокопрологических исследований в значительной степени зависит от качества лабораторного оборудования.
В 1968 г. на Украине разработан набор стандартного оборудования для массового исследования фекалий на гельминтозы. Он состоит из предметов, изготовленных преимущественно из ударопрочного полистерола двух цветов, которые легко моются и обезвреживаются (выдерживают кипячение), а также удобны при транспортировке.
В состав набора входят стаканчики различной емкости, воронки, конические пробирки, ситечки разных размеров, штатив с пятью планками (каждая на шесть воронок), кювет (по размерам штатива), коробки для хранения посуды, а также резиновые груши, стеклянные палочки и металлические петли (рис. 1).
В отличие от ранее применявшегося разнородного оборудования новый набор повышает эффективность лабораторных исследований фекалий и производительность труда ветеринарных работников, позволяет шире проводить количественные гельминтокопрологические исследования стандартизированными методами (контроль дегельминтизаций), а также улучшает эстетическую сторону этой работы.
Различают качественные и количественные методы исследований фекалий.
Качественные гельминтокопрологические исследования
Качественные методы исследований позволяют установить, какими гельминтами 'заражены животные.
Гельминтоовоскопические методы. Для прижизненной диагностики гельминтозов предложено большое количество методов гельминтоовоскопии, из которых рассмотрим только те, которыми чаще пользуются в ветеринарной практике.'
Метод нативного мазка — простой, но наименее , эффективный, позволяющий обнаружить яйца паразитических червей только при высокой и средней интенсивности инвазии. На предметное стекло наносят каплю равных частей воды и глицерина и небольшой кусочек фекалий (с булавочную головку), тщательно перемешивают стеклянной или деревянной палочкой; после удаления твердых -частиц на эту смесь кладут покровное стекло и исследуют под микроскопом. Глицерин просветляет препарат и препятствует-быстрому высыханию его. Рекомендуют исследовать 5—10 препаратов (капель). Этот метод используют в качестве дополнительного к другим методам.
Большинство гельминтокопрологических методов диагностики основано на разнице удельного веса яиц, личинок гельминтов или их фрагментов, с одной стороны, и жидкости, в которой взвешены исследуемые фекалии, — с другой. В зависимоеш от соотношения удельного веса этих компонентов различают методы флотации, осаждения и комошшрованные.
Методы флотации. При методах флотации (всплыва* ния) используют жидкости (насыщенные растворы солей), удельный вес которых больше веса яиц гельминтов. В лабораторной практике наиболее широко применяют насыщенный раствор поваренной соли (удельный вес 1,18). Для приготовления такого раствора в кастрюлю с кипящей водой постепенно добавляют при - помешива» нии хлорид натрия до образования на дне небольшого осадка (на 1 л воды берут около 400 г поьаренной соли). Горячий раствор фильтруют в бутыль через несколько слоев марли или вату и применяют после остывания (на дне бутыли должен образоваться кристаллический осадок).
Реже в ветеринарных лабораториях используют насыщенные растворы сульфата Mai ния с удельным весом 1,35 (920 г на 1 л горячей воды), гипосульфита натрия с удельным весом от 1,37 до 1,41, в зависимости от температуры окружающей среды (1750 г на 1 л горячей во^ ды) и азотнокислого натрия с удельным весом 1,4 (соотношение селитры и горячей воды 1:1).
М е т о д Фюллеборна характеризуется простотой .выполнения и высокой эффективностью при большинстве нематодозов и цестодозов животных, поэтому он зани^ мает первое место среди других гельминтокопрологических методов диагностики.
В стеклянный, полистероловый или пластмассовый стаканчик емкостью 50—100 мл помещают 3—5 г фекалий и при помешивании стеклянной палочкой постелен» но добавляют насыщенный раствор поваренной соли (хлорида натрия) из расчета на одну часть фекалий 15—20 частей флотационной жидкости. Плотные фекалии овец предварительно можно растереть с небольшим количеством раствора соли в фарфоровой ступке, после чего суспензию переливают в стаканчик, добавив' необходимое количество раствора хлорида натрия. Всплывшие крупные частицы сразу удаляют палочкой, а взвесь фекалий целесообразно профильтровать в другой стакан-
Шк. через сито (иногда употребляют молочные ситечки). После отстаивания заряженной пробы в течение 45— 60 минут металлической петлей снимают три капли поверхностной пленки, помещают их на предметное стекло и микроскопируют без покровного стекла. После каждой пробы петли промывают в стакане с водой (вместо рекомендуемых в некоторых руководствах прожиганий их на спиртовке).
Метод Калантарян — видоизмененный метод Фюллеборна. В качестве флотационной жидкости используют насыщенный раствор азотнокислого натрия. Время отстаивания взвеси 15—30 минут. Применяют для диагностики трихоцефалеза и акантоцефалезов.
Методы осаждения. При методах осаждения используют жидкости с меньшим удельным весом, чем удельный вес яиц.
Метод последовательного промывания. Небольшое количество фекалий (5 г) размешивают в стаканчике с 10-кратным количеством воды. Смесь фильтруют в большой стакан и доливают воду, после чего фильтрат отстаивают 5 минут. Затем сливают или отсасывают спринцовкой верхний слой жидкости до осадка; к осадку добавляют такое же количество воды, перемешивают и отстаивают снова 5 минут. Эти манипуляции повторяют до просветления верхнего слоя жидкости в стакане. Жидкость последний раз сливают, а осадок наносят на стекло или в бактериологическую чашку и исследуют под микроскопом. Этот метод часто применяют для диагностики большинства трематодозов и акантоцефалезов.
Метод Горшкова основан на принципе осаждения с последующей концентрацией яиц гельминтов. 150—300 г фекалий лошади помещают на металлическое сито или марлю в большую стеклянную воронку диаметром в верхней части 15—20 см. На нижний конец воронки надевают резиновую трубку длиной 10—15 см с зажимом на конце. Фекалии разрыхляют и заливают доверху теплой водой. Фекалии в воронке выдерживают от 4 часов до одних суток, после чего зажим осторожно открывают, часть жидкости выпускают в центрифужные пробирки и центрифугируют 3 минуты. Затем жидкость сливают, а осадок исследуют под микроскопом. Этим методом диагностируют драшейоз и габронематоз лошадей.
Комбинированные методы. Основаны на принципе рсаждения и флотации яиц гельминтов, поэтому более эффективны в сравнении с предыдущими методами исследований. Ввиду сложности эти методы имеют сравнительно ограниченное применение в производственных условиях.
Метод Дарлинга. Небольшое количество фекалий (3—5 г) размешивают в стаканчике с 20—30 мл воды, смесь процеживают в центрифужные пробирки и центрифугируют 1—2 минуты, после чего верхний слой жидкости сливают, а к осадку доливают смесь равных частей глицерина и поваренной соли. Смесь в пробирках взбалтывают и вторично центрифугируют. Всплывшие на поверхность яйца снимают вместе с пленкой взвеси проволочной петлей, стряхивают на предметное стекло и микроскопируют. При отсутствии глицерина фекалии можно смешивать перед вторичным центрифугированием с насыщенным раствором поваренной соли.
Метод Щербовича. Техника исследования фекалий напоминает предыдущий метод. Отличается от него тем, что перед вторичным центрифугированием к осадку добавляют насыщенный раствор гипосульфита натрия (при макраканторинхозе свиней) или сернокислой магнезии (при метастронгилезе свиней). По сравнению с методом Дарлинга этот; метод более эффективен.
Флотационн о-с едиментационный метод Демидова рекомендуют для диагностики фасциолеза, а также других трематодозов жвачных. Пробу фекалий (3 г от овец и 5 г от крупного рогатого скота) помещают в стакан емкостью 200 мл и наливают в него доверху насыщенный раствор поваренной соли и тщательно размешивают стеклянной палочкой, после чего взвесь отстаивают 15—20 минут. Всплывшие на поверхность грубые частицы удаляют бумажным совочком, а надосадочную жидкость отсасывают спринцовкой (при исследовании большого количества проб жидкость можно сливать), оставляя на дне 20—30 мл осадка. К осадку доливают воду до полного объема стакана и тщательно размешивают. Смесь фильтруют в обычный стакан через марлю или металлическое сито и отстаивают 5 минут. Надосадочную жидкость отсасывают, оставляя на дне 15—20 мл осадка, который переносят в конический стаканчик, пропаласки-вают обычный стакан и выливают смыв в маленький. Взвесь отстаивают в коническом стаканчике 3—5 минут, а жидкость в последующем отсасывают (эту процедуру повторяют). Просветленный осадок переносят на предметное стекло и микроскопируют. йтот метод эффективнее метода последовательного промывания.
Гельминтоларвоскопические методы. Метод Бермана — Орлова. Для исследования фекалий используют аппарат, состоящий из средней воронки (пластмассовой, полистероловой или стеклянной), резиновой трубки (10—15 см длиной), соединенной верхним концом с воронкой, зажима, укрепленного на нижнем конце резиновой трубки, металлического сита или куска марли и штатива (для одного или нескольких аппаратов). Смонтированный аппарат заполняют теплой водой (35—38°). 10—15 г свежих фекалий кладут на сито или завертывают в марлю и осторожно опускают в воронку. Фекалии от овец выдерживают в аппарате 2—4 часа, а от телят — не менее 6—7 часов. Затем зажим на трубке ослабляют, а вытекающую жидкость собирают в пробирку и центрифугируют в течение 2—3 минут. После этот верхний слой жидкости сливают быстрым опрокидыванием пробирки, а оставшуюся на дне жидкость переносят на предметное стекло и исследуют под микроскопом.
Применение зажимов на резиновую трубку в аппарате Бермана связано с неудобствами, поэтому во многих ветеринарных лабораториях нижние концы резиновых трубок непосредственно соединяют с маленькими пробирками. Перед исследованием осадка под микроскопом жидкость не центрифугируют.
Фекалии жвачных можно исследовать на легочные нематодозы (особенно в экспедиционных условиях) упрощенным методом гельминтоларвоскопии (без использования воронок). Для этой цели применяют небольшие полуконические стаканчики (50 мл). Пробы фекалий помещают на ситечки или завертывают в марлю и опускают в стаканчики с водой. Через несколько часов фекалии удаляют, жидкость из стаканчика отсасывают или сливают, а осадок микроскопируют.
Метод Вайда. Несколько шариков фекалий от мелких жвачных помещают в бактериологическую чашку или на часовое стекло и овлажняют их небольшим количеством теплой воды. Через 10—20 минут фекалии удаляют, а оставшуюся жидкость исследуют под малым увеличением микроскопа. Эффективность этоТо метода значительно ниже в сравнении с предыдущим методом, поэтому его реже применяют для диагностики диктиокаулеза и про-тостронгилидозов овец.
Метод дифференциальной диагностики стронгилято-зов по инвазионным личинкам.-Возбудители большинства кишечных стронгилятозов имеют почти одинаковое строение яиц, поэтому при гельминтоовоскопии можно поставить только групповой диагноз (например, стронгиля-тозы).
Для установления более точного диагноза (родового) в ветлабораториях иногда получают культуру инвазионных личинок стронгилят. Около 5 г фекалий помещают в бактериологическую чашку, закрывают крышкой и ставят ее в термостат при температуре 25—30° на одну неделю. Затем фекалии с личинками исследуют по методу Бермана — Орлова (для выделения инвазионных личинок из фекалий).
Инвазионные личинки разных родов кишечных стронгилят отличаются по величине тела, строению хвостового конца чехлика и по количеству кишечных клеток. Например, личинки эзофагостом более крупные (до 1 мм длины), нитевидный хвостовой конец чехлика длинный, а кишечник имеет 20—32 клетки; личинки гемонхов средней длины (около 0,8 мм), с нитевидным хвостовым концом чехлика, кишечник имеет 16 клеток.
Гельминтоскопический метод. При гель-минтоскопии (осмотре) фекалий животных можно 'обнаружить гельминты или их фрагменты, которые выделяются под воздействием медикаментарных средств или самопроизвольно ( мониезий и тизаниезий у жвачных, дре-панидотений у гусей и др.). Чтобы обнаружить более мелких паразитических червей у мелких и средних животных, исследуют методом последовательного промывания всю единовременную порцию фекалий, а у крупных животных — часть фекалий. Собранные фекалии после предварительного осмотра помещают в стеклянный цилиндр или большую банку, разбавляют 10-кратным количеством воды и тщательно размешивают. После 10—15-минутного отстаивания верхний слой жидкости сливают, 4 а осадок снова смешивают с водой и отстаивают.
Периодическое промывание и отстаивание фекалий повторяют до просветления верхнего слоя. Верхний слой жидкости последний раз сливают, а осадок "малыми порциями просматривают в кюветках с черным и белым дном. Обнаруженных гельминтов собирают при помощи пинцетов, препаровальных игл и кисточек, просматривают под микроскопом, после чего переносят в консерййрую'щую Жидкость. Чтобы выявить мелких немётбд, осадок дополнительно исследуют по частям при помощи бинокулярной или штативной лупы с 10—20-кратным увеличением.
Количественные гельминтокопрологические исследования
Количественные методы исследований фекалий позволяют приближенно судить об интенсивности инвазии и об эффективности проводимых дегельминтизаций.
Для учета числа яиц паразитических червей в фекалиях применяют стандартизированный метод Фюлле-борна, а также другие методы.
Стандартизированный метод Фюллеборна менее точен в сравнении с методом Столла, но в виду простоты выполнения его широко применяют в ветеринарной практике для контроля эффективности дегельминтизаций животных. По технике выполнения стандартизированный метод напоминает другие методы качественных гельминто-овоскопических исследований. Однако у него-имеется ряд особенностей, основными из которых являются следующие: 1) навески фекалий должны быть равными; 2) посуда „одного обьема, 3) время отстаивания водных взвесей фекалий одно и то же; 4) петли одинакового диаметра, исследование равного количества капель.
Для ориентировочного учета интенсивности диктио-каулезной и протостронгилидозной инвазии у жвачных можно применить стандартизированный метод Бермана— Орлова. Достоверность результатов повышается при увеличении количества и кратности исследований.
Исследование выделений других органов
Исследование содержимого конъюнкт й-зальных полостей применяют для диагностики телязиоза крупного рогатого скота (возбудитель — The-iazia rhodesi). Из спринцовки орошают конъюнктиваль-ные полости водным раствором йода; вытекающую жидкость собирают в кюветку или почковидный тазик и осматривают на наличие телязий. В данном случае водный раствор йода оказывает и лечебное действие.
Исследование истечений из клоаки проводят для прижизненной диагностики простогонимоза птиц. Вытекающую слизь помещают на предметное стек-
4» 61
Лб и исследуют под микроскопом с целью обнаружения яиц возбудителя болезни.
Исследование соскоба с перианальных ^складок— основной метод диагностики оксиуроза ло-'шадей. Лопатковидной палочкой или спичкой, смоченной смесью равных частей глицерина и воды, делают соскоб с перианальных складок промежности и внутренней поверхности корня хвоста. Соскоб переносят на предметное стекло в каплю глицерина с водой, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Обнаружение яиц оксиур подтверждает клинический диагноз.
И с ел е д о в а н и ее о с к о б о в кожи из «летних язв» рекомендуется для диагностики кожной формы драшейоза и габронематоза. Соскоб берут со свежеизъязвленной поверхности кожи и помещают в каплю разведенной соляной кислоты (1 : 1000). Затем препарат расщепляют препаровальными иглами, накрывают покровным стеклом и исследуют под микроскопом для обнаружения личинок драшей или габронем.
Исследование тканей
Исследование кожи крупного рогатого скота (по Гнединой) применяют для диагностики онхо-церкоза. На нижней брюшной стенке у животного после подготовки операционного поля вырезают небольшой кусочек кожи толщиной 2 мм (с небольшое овсяное зерно), а ранку смазывают настойкой йода. В ветеринарной лаборатории этот кусочек кож« помещают на предметное стекло в физиологический раствор, расщепляют препаровальными иголками, а затем все сливают в центрифужную пробирку и ставят ее на несколько часов в термостат при температуре 37—38°. Затем волокна кожи удаляют, жидкость центрифугируют, а осадок микроскопируют с целью обнаружения подвижных микроонхоцерков.
Исследование кусочков мышц на трихинеллез часто проводят посмертно. Иногда' для прижизненной диагностики трихинеллеза используют метод биопсии.
Путем оперативного вмешательства вырезают кусочек мышцы (например, из наружных мышц уха), из которых готовят мелкие срезы (с овсяное зерно). Последние помещают на нижнее стекло компрессория, покрывают верхним стеклом и сближают их винтами до полного расплющивания. Просматривают срезы под трихинеллоскопом, малым увеличением микроскопа, с помощью проекционного трихинеллоскопа или проекционной камеры К.Т-3.
Диагностические дегельминтизации
Под диагностической дегельминтизацией понимают такое вмешательство, при котором достигается выделение из желудочно-кишечного тракта сельскохозяйственных животных хотя бы части паразитических червей для точного установления гельминтологического диагноза. Диагностическую дегельминтизацию проводят в тех случаях, когда клинические признаки дают основание заподозрить наличие болезни у животных, вызванной неполовозрелыми гельминтами. Лабораторнвш методы диагностики в таких случаях оказываются неэффективными, потому что паразиты в молодом возрасте (преимагинальном состоянии) не выделяют во внешнюю среду яиц или личинок.
Для диагностической дегельминтизации отбирают несколько животных, изолируют от остального поголовья и задают им антгельминтик в терапевтической дозе. Выделенные в течение одних-двух суток фекалии от этих животных собирают и подвергают гельминтоскопическо-му исследованию на предмет обнаружения возбудителя болезни.
В производственных условиях диагностические дегельминтизации нередко проводят для прижизненной диагностики мониезиоза жвачных, дрепанидотениоза гусей, це-стодозов плотоядных, аскаридоза свиней и аскаридиоза кур.
Иммунологические реакции
Гельминтологические методы исследований часто оказываются неэффективными при гельминтозах сельскохозяйственных животных, вызванных неполовозрелыми паразитами и личиночными стадиями паразитических червей (эхинококками, альвеококками, цистицерками, мышечными трихинеллами, микроонхоцерками). Поэтому все большее практическое значение начинают приобретать иммунологические методы диагностики гельминто-зов, базирующиеся на явлениях иммунитета. Иммунологические реакции проявляются при взаимодействии антигена е антителами. Они включают аллергические и серологические методы (реакции преципитации, сколексо-преципитации, агглютинации и связывания'комплемента). В настоящее время наиболее приемлемы аллергические методы диагностики. Для проведения их необходимы антигены, обладающие не только иммунизирующим (антигенным), но и сенсибилизирующим действием на орга* низм хозяина (при повторных поступлениях антигенов возможно развитие аллергических реакций). Это свойство гельминтов является основанием для использования с диагностической целью внутрикожной и кожной проб.
Аллергические кожные реакции предложены для прижизненной диагностики фасциолеза овец, описторхоза плотоядных, цистицеркоза свиней и крупного рогатого скота, ценуроза овец, эхинококкоза жвачных, мониезиоза овец, аскаридоза свиней, гемонхоза и диктиокаулеза овец, онхоцеркоза крупного рогатого скота и лошадей и трихинеллеза свиней.
Из серологических методов следует указать на реакцию сколексопреципитации, позволяющую диагностировать ранние стадии эхинококкоза. и реакцию преципитации с использованием живых личинок аскарид и трихинелл для выявления соответствующих гельминтозов.
Исследование промежуточных хозяев гельминтов
Гельминтологическое обследование животных позволяет только частично выяснить гельминтологическую обстановку в хозяйствах. Оно не вскрывает всех связей животных с внешней средой, часто не позволяет выявить пути циркуляции гельминтозного начала. Поэтому наряду с обследованием животных (дефинитивных хозяев паразитических червей) на гельминтозы большое практическое значение имеет исследование промежуточных хозяев с целью обнаружения в их теле личиночных стадий гельминтов Это необходимо проводить и потому, что возбудителями большинства гельминтозов сельскохозяйственных животных являются биогельминты, то есть такие паразитические черви, которые развиваются при обязательном участии промежуточных (иногда дополнительных) хозяев. Простота, доступность и высокая эффективность исследования промежуточных хозяев на зараженность их личинками гельминтов позволяют выявлять в хозяйстве наличие определенного гельминтоза и степень его распространения, устанавливать места, где происходит заражение животных, и длительность сохранения инвазионного начала в теле промежуточных хозяев.
Результаты гельминтологического обследования жи-во'тных всегда должны дополняться данными исследований на гельминтозы промежуточных хозяев. Они позволяют выяснять гельминтологическую ситуацию, прогнозировать появление гельминтозов.
Промежуточными хозяевами гельминтов могут быть моллюски (пресноводные и сухопутные), ракообразные (циклопы, дафнии, бокоплавы, водяные ослики), дождевые черви, насекомые (мухи, мошки, мокрецы, стрекозы, мурявьи. жуки), почвенные клещи.
Эпизоотологическое значение имеет плотность (количественный состав) отдельных видов промежуточных хозяев. Чем она выше, тем больше имеется возможностей для заряжения животных гельминтозями. Наземные промежуточные хозяева находятся в разных местах (в навозных кучах, на выгУлах. пастбищных участках и др.). Вотные промежуточные хозяева в ОГРОМНОМ количестве об'итатот у берегов стоячих мелких водоемов, в зарослях растений. В этих местах .животные (особенно гуси и утки) часто заражаются гельминтозами.
Промежуточных хозяев на наличие личинок гельминтов нялго исследовать в свежем (лучше живом) состоянии пол бинокулярной лупой или малым увеличением микроскопа. Личиночные стадии гельминтов в теле промежуточных хозяев находятся на разных стадиях развития, но наиболее заметными являются инвазионные личинки.
В итоге исследований определяется экстенсивность (процент) и интенсивность (количество) инвазирован-ности промежуточных хозяев личинками определенных видов гельминтов.
В производственных условиях исследуют на наличие личинок паразитических червей жуков-носорогов, ори-батплных клещей, дождевых червей, моллюсков, боко-плавов, водяных осликов, дафний и циклопов.
Исследование жуко в-н осорогов. Основные места обитания этих насекомых — навоз животных всех видов. ЖУКИ-НОСОРОГИ являются промежуточными хозяевами скребня-великана, паразитирующего у свиней. Личинки (акантелльт) крупные (до 5 мм длины), белого цвета, хорошо заметны макроскопически при вскрытии личинок, куколок и взрослых стадии этих жуков.
Орибатидные, или панцирные, 'клещи (до 1 мм длины). Обитают в верхних слоях почвы. Это промежуточные хозяева мониезий жвачных и других гельминтов. Для обнаружения личинок ленточных червей (цистицеркоидов) предварительно в капле воды на предметном стекле (под контролем лупы) расщепляют на части панцирь орибатидного клеща, затем препарат покрывают покровным стеклом и микроскопируют. Ци-стицеркоиды мониезий округлой формы (0,15—0,19 мм в диаметре), снабжены четырьмя присосками и хвостовым придатком. Они очень нежные, поэтому не следует применять метод компрессорного исследования клещей.
Иссследование дождевых (малошетин-к о в ы х) червей. Дождевых червей по морфологии и условиям обитания разделяют на две группы. Представители одних родов (Lumbricus, Eisenia) живут под кучами навоза, во влажной почве. Они являются промежуточными хозяевами метастронгилов свиней. В их теле спиралевидные личинки паразита локализуются в тканях пищевода и в кровеносных сосудах. Для обнаружения личинок метастронгилов проводят компрессорное исследование передней четверти тела дождевых червей под микроскопом.
Дождевые черви других родов (Criodrilus, Eophila) обитают в водоемах с топкими, илистыми берегами. Они зарегистрированы в качестве промежуточных хозяев возбудителей гистрихоза и порррцекоза уток. Личинка гист-рихиса очень крупная (до 3 см длины), беловатого Цвета, просвечивает сквозь кожные покровы червя в виде волнистой полосы. Личинки порроцекумов в десять раз меньше предыдущей личинки (2,5—3 мм); они обнаруживаются в кровеносных сосудах при компрессорном исследовании дождевых червей под микроскопом.
Исследование моллюсков. В естественных условиях моллюски часто бывают заражены личинками разных трематод. Излюбленное место паразитирования личинок гельминтов — печень, расположенная в верхушке раковины. Крупных моллюсков (прудовики, живородки) предварительно освобождают от раковины, а мелких берут с раковиной и исследуют компрессорным методом под микроскопом. Церкарии напоминают по форме головастиков лягушек.
Некоторые виды пресноводных моллюсков, являясь резервуарными хозяевами для гименолепидид птиц, же могут содержать в пищеварительном тракте личинок (цистицеркоиды) этих паразитических червей, которых можно обнаружить под микроскопом.
Исследование боко п л а в о в. Бокоплавы достигают длины до 2 см, обитают в морских и пресноводных водоемах. Зарегистрированы они в качестве промежуточных хозяев возбудителей полиморфоза, стрептока-роза и тетрамероза птиц. Личинок обнаруживают при компрессорном исследовании этих рачков: Личинки (акантеллы) полиморфуса овальной формы, оранжевого цвета, до 1 мм длины, заметны макроскопически.
Исследование водяных осликов. Водяные ослики от 1 до 1,5 см длины, живут в пресноводных водоемах, являются промежуточными хозяевами возбудителя филиколлеза птиц. При компрессорном исследова,-нии можно выявить личинку (акантеллу) белого цвета, овальной формы, 0,7 мм длины.
Исследование дафний. Дафнии в несколько раз мельче бокоплавов. Обитают они чаще в прудах. Зарегистрированы промежуточными хозяевами возбудителей эхинуриоза, а также тетрамероза птиц. Личинки этих паразитов червеобразной формы. Они могут быть выявлены под микроскопом при компрессорном исследовании дафний.
Исследование циклопов. В сравнении с рассмотренными выше ракообразными циклопы значительно меньше их по величине. Они являются промежуточными хозяевами возбудителей цестодозов водоплавающих птиц. Личинки (цистицеркоиды) ленточных червей округлой формы, с хвостовым придатком, локализуются в полости тела' над кишечником рачка. Для обнаружения личинок цестод несколько циклопов помещают на предметное стекло, накрывают покровным стеклом и микроскопируют. Под средним увеличением микроскопа у личинок паразита можно увидеть присоски и корону крючьев, соответствующие определенным видам взрослых цестод.
Можно также исследовать и других промежуточных хозяев (мошек, мокрецов, мух, стрекоз, жуков, муравьев).
Люминесцентная микроскопия
Метод люминесцентной микроскопии (по В. Г. Эвра-новой) —новый метод диагностики гельминтозов. Он позволяет дифференцировать однотипные яйца разных видов гельминтов, а также отличать жизнеспособные яйца и личинки от мертвых. Предварительно яйца трематод, цестод и нематод обрабатывают растворами акридина оранжевого и другими флуорохромами. Жизнеспособные яйца и личинки нематод не люминесиируют или слабо лкь минесиируют. в то время как мертвые ярко светятся и окрашены в оранжевый, желто-зеленый или желтый цвет. При люминесцентной микроскопии можно дигЬФерен-цировать яйца главнейших пестод плотоядных, яйца возбудителей аскаридиоза и гетеракилоза KVP. имеющих, как известно, сходное строение по величине, Форме и окраске, а также различать жизнеспособные и мертвые ооцисты
Кокттидий.
П^рпяпаты просматривают под микроскопом МУФ-З или МЛ-2.
Методика люминесцентной МИКРОСКОПИИ сравнительно ПРОГТЯ и может быть испольчовяня в производственных УСЛОВИЯХ (ветеринапных лабораториях).
Из ДРУГИХ исследований, имеющих подсобное значение в установлении диагноза на гельминточьт. можно указать на такие, как выяснение морфологического состава КРОВИ' (учет эозинофилии), метод определения фракции белков.
Краткая характеристика яиц гельминтов
Яйпа паразитических червей надо дифференцировать от органических включений (спор, крахмальных зерен, грибов, пьтльтты растений и ДР.). яиц клетей и ДРУГИХ включений. Основные отличительные признаки яиц гельминтов: .СТРУКТУРНОСТЬ оболочек (чяпте сложного строения, нередко наличие крышечки, пробочек) и внутренняя органи^яния яйпа (зародыш на разных стадиях развития). Яйпа клетей в большинстве случаев значительно крупнее яиц гельминтов.
Размер яиц у папазитических , червей разных видов сильно колеблется. Например, самые крупные яйпа возбудителя нематодироза жвачных превышают по длине яйття возбудителей простогонимоча птиц в десять раз.
Чтобы отнести яйття ГРЛМ'ИНТОВ к определенным группам по величине, целесообразно исходить из следующих ориентировочных разделов их длины- очень крупные — от 0.1 К мм и ботьттте (Npmatorlirus spathisjer): кпупные — 0,1—0,14 мм (Fasciola hepatica); средние — 0,06—0,09 мм 58
(Ascaris suum); мелкие — 0.03—0,05 мм (Dicrocoelium laneeatum): очень мелкие — 0,02 и меньше (Prosthogoni-ITius ovatus) (цв. табл. Т—VI).
Яйца представителей разных классов различаются по величине, цвету, форме, строению оболочек и внутреннего содержимого.
Яйца трематод. Чаще овальной формы с крышечкой на одном полюсе. Оболочка гладкая. У некоторых видов оболочка снабжена филаментами (отростками), бугорками. Окраска яиц от светло-серой до коричневой (чаше желтая).
Яйца цестод. Бывают двух типов: лентетюв и цепней. У лентетюв они напоминают яйпа трематод (овальные с крышечкой). Яйпа цепней резко отличаются по строению от яиц гельминтов других классов: они чаще средней величины, округлой формы, серого цвета.-зрелые (внутри зародыш — онкосфера с тремя парами эмбриональных крючьев).
Яйца нематод. Отличаются от яиц трематод отсутствием крышечки; от яиц цестод — отсутствием онко-сферы.
Размеры, форма, строение и цвет ободочек яиц нематод очень разнообразны. Наружная оболочка бывает гладкой, бугристой, ячеистой; толшиня оболочек варьирует от тонкой (у стронгилят) до толстой (у трихоие-фал). У большинства нематод яйпа овальной формы, симметричные, у некоторых — полуцилиндрические (у драшей). Большинство нематод выделяют наружу незрелые яйца на предсегментационной стадии или нескольких шаров дробления, меньшинство — зрелые (внутри яйпа сформирована личинка).
Яйца скребней. Они имеют овальную, эллипсоидную и веретенообразную формы; размер их от среднего до крупного. Выделяемые во внешнюю среду яйца содержат внутри личинку — акантор с десятью эмбриональными крючьями (зрелые).
Клинические наблюдения
Клиническая картина гельминтозов сельскохозяйственных животных изучена слабо, а симптомокомплекс заболеваний, вызываемых паразитическими червями, довольно однообразен (угнетение, поносы, исхудание и др.); поэтому она играет подсобную роль при диагностике этой группы заболеваний. При ряде гельминтозов животных наблюдаются характерные симптомы: резкое расстройство центральной нервной системы (при ценурозе овец), нагнеты.холки (при онхоцеркозе лошадей), конъюнктивиты и кератиты (при телязиозе крупного рогатого скота), кожные кровотечения (при парафиляриозе лошадей). Эти заболевания можно диагностировать с известной долей достоверности на основании клинических наблюдений. При большинстве других гельминтозов такие нехарактерные симптомы, как низкая упитанность и продуктивность взрослых животных, отставание в росте и развитии молодняка, должны служить поводом для проведения гельминтокопрологических и других специальных обследований животных, подозреваемых в заболевании гельминтозами.
Эпизоотологические данные
При диагностике многих гельминтозов сельскохозяйственных животных значительную помощь оказывают эпизоотологические данные (неблагополучие хозяйства по конкретным болезням, сезон года, возраст больных животных, характер пастбищ и водоисточников, метеорологические условия и др.). Например, массовое заболевание с признаками брюшных водянок и падеж овец осенью после дождливого лета и использование под выпасы заболоченных участков пастбищ дает основание заподозрить острую форму фасциолеза. Заболевание гусят летом с признаками расстройства пищеварения (поносы) и нервной системы (парезы) после выпаса их на мелком стоячем водоеме, обильно заселенном циклопами, является основанием для установления предположительного диагноза на дрепанидотениоз. Падеж ягнят весной (через 3—4 недели после начала пастбищного содержания) должен вызвать подозрение о заболевании молодняка овец мониезиозом. Необходимо также учитывать зональные особенности гельминтозов домашних животных, желательно в комплексе с клиническими наблюдениями.
Лабораторно-практшеское занятие 1
МЕТОДЫ ГЕЛЬМИНТОКОПРОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИИ
Задание: 1) освоить методику взятия проб фекалий от животных разных видов;
2) ознакомиться с оборудованием и реактивами, употребляемыми для лабораторных методов диагностики гельминтозов;
3) провести исследование фекалий гельминтоовоско-пическими, гельминтоларвоскопическими и гельминто-скопическими методами;
4) научиться отличать яйца гельминтов от посторонних примесей, пузырьков воздуха и т. п.
Оборудование и материалы. Микроскопы, предметные и покровные стекла, металлические петли, стеклянные палочки, пинцеты, стаканчики, бактериологические чашки, кюветы, стеклянные цилиндры или банки, металлические сита, пробирки, смонтированные аппараты Бермана (см. стр. 44); насыщенные растворы поваренной соли, сернокислой магнезии, азотнокислого натрия, гипосульфита натрия, вода; упаковочный материал для фекалий (пакетики из плотной бумаги, спичечные коробки, небольшие баночки и др.); пробы фекалий от овец, свиней, крупного рогатого скота, лошадей, кроликов, кур, гусей и уток.
Место занятия. Лаборатория эпизоотологии и паразитологии.
Методика проведения занятия. Преподаватель кратко объясняет методику взятия фекалий от животных разных видов. Учащиеся по два человека под руководством преподавателя берут пробы фекалий от животных в клинике или учебном хозяйстве техникума. В отдельных случаях накануне занятий лаборанту можно поручать взять фекалии на ферме колхоза или совхоза, неблагополучного по гельминтозам.
В аудитории техникума преподаватель знакомит учащихся с оборудованием и материалами, приготовленными для проведения лабораторных исследований фекалий, кратко излагает методику работы. Объяснения сопровождаются показом наиболее сложных манипуляций, а также демонстрацией таблиц яиц и личинок гельминтов. Затем учащиеся самостоятельно исследуют фекалии наиболее распространенными в гельминтологической практике методами, знакомятся со строением обнаруженных яиц, личинок и фрагментов гельминтов. В тетрадях по лабораторно-практическим занятиям они обязаны вести краткие записи и делать зарисовки наиболее характерных яиц паразитических червей. Схематические рисунки яиц должны быть масштабными.