Количественное определение холестерина в сыворотке крови
Холестерин (холестерол) – высший, полициклический, ненасыщенный одноатомный, вторичный спирт.
Большая часть холестерина в крови находится в виде холестеридов – сложных эфиров с высшими жирными кислотами: пальмитиновой, стеариновой или олеиновой. Холестерин и его эфиры нерастворимы в воде и образуют комплексные соединения со специфическими белками, которые являются обязательными компонентами ЛП сыворотки крови и клеточных мембран, влияют на физико-химические свойства плазматической мембраны, регулируют ее проницаемость и влияют на активность интегрированных в нее ферментов. Из холестерина образуются физиологически активные вещества: желчные кислоты, стероидные гормоны и провитамины группы D. Холестерин поступает в организм с пищей, но в основном синтезируется из ацетил-КоА в печени и, частично, в кишечнике. Из печени в ткани он попадает в составе ЛПНП. Избыток холестерина из тканей удаляется ЛПВП в печень. Холестерин – это основной компонент ЛПНП и минорный ЛПОНП и ЛПВП.
На содержание холестерина в сыворотке крови влияют различные факторы: наследственность, питание, состояние эндокринных желез и внутренних органов (печень, почки). Так например, повышение уровня холестерина в сыворотке крови наблюдается при атеросклерозе, семейной гиперхолестеринемии, декомпенсированном сахарном диабете, нефротическом синдроме, хроническом гепатите, гипопротеинемии. Понижение концентрации холестерина происходит при остром гепатите, болезни Гоше, острых инфекциях, кахексии, анемии, остром панкреатите. Исследуется роль холестерина в процессах нейродегенерации и развитии болезни Альцгеймера.
Цель работы
Определить содержание холестерина в сыворотке крови. Сравнить полученное значение с нормой.
Принцип метода
Холестеринэстераза гидролитическим путем расщепляет сложноэфирную связь в эфирах холестерина (холестеридах). Образовавшийся свободный холестерин как спирт окисляется холестериноксидазой до кето-формы холестерина (холестенона) и пероксида водорода. Последний под действием пероксидазы способен окислять фенол при участии 4-аминоантипирина до окрашенного соединения - хинонимина. Оптическую плотность окрашенного раствора хинонимина определяют фотометрически. Расчёт концентрации холестерина проводят по сравнению со стандартным раствором.
Выполнение работы (см. приложение)
| Реактивы и этапы | Пробы | |||
| Опыт | Контроль | Стандарт | ||
| 1. Реагент, мл (хромогенная смесь*) | ||||
| 2. Сыворотка крови, мл ** | 0,05 | — | — | |
| 3. Н2О, мл | — | 0,05 | — | |
| 4. Стандартный раствор холестерина (4,65 ммоль/л), мл | — | — | 0,05 | |
| Инкубируют 10 мин при 25°С | ||||
| Фотометрируют против Н2О (l = 500 нм, толщина кюветы 3 мм) D500 | ||||
| Dоп - Dк | ||||
| Dст - Dк | ||||
*в состав реагента входят: холестеринэстераза, холестериноксидаза, пероксидаза, 4-аминоантипирин, фенол, фосфатный буфер – рН 6.5.
** При проведении анализа лошадиной сыворотки следует помнить, что содержание холестерина в ней значительно ниже, чем в сыворотке крови человека.
Расчет результатов
С = 
• 4,65 ммоль/л
где 4,65 ммоль/л – концентрация холестерина в стандартном растворе.
Норма: 4,4 – 5,5 ммоль/л.
Выводы
Тестовые задания по теме: «β-Окисление высших жирных кислот и их биосинтез»
1) Ответить на каждый вопрос однозначно: «да» или «нет»
1. В β-окислении жирных кислот участвуют ФАД- и НАД-зависимые дегидрогеназы.
2. Полное окисление одной молекулы пальмитиновой кислоты до СО2 и Н2О сопровождается образованием 130 молекул АТФ.
3. Линоленовая кислота является незаменимой для человека.
4. Для образования мевалоновой кислоты необходим НАДФН (Н+).
5. Простагландины образуются из полиненасыщенных жирных кислот.
6. Холестерин в сыворотке крови находится только в свободном состоянии.
7. Можно ли заменить НАДФН (Н+) на НАДН(Н+).в биосинтезе высших жирных кислот?
8. Участвует ли биотин в биосинтезе жирных кислот?
9. Возможно ли полное превращение нейтральных жиров в углеводы в животном организме?
10. Обратимы ли все стадии β-окисления жирных кислот в митохондриях?
11. Нужны ли витамины В2 и РР для нормального протекания -окисления жирных кислот?
12. Повышается ли с возрастом концентрация холестерина в сыворотке крови человека?
2) Выбрать один правильный ответ
| Кофермент, участвующий в биосинтезе жирных кислот, но неучаствующий в их окислении: ФАД НАД НАДФН (Н+) КоА ТПФ | НАДФН (Н+) для биосинтеза жирных кислот и холестерина поставляется за счет: гликолиза ЦТК β-окисления жирных кислот биологического окисления пентозофосфатного пути |
3) Установить последовательность образования метаболитов β-окисления жирных кислот
| А. Еноил-КоА Б. Кетоацил-КоА В. Оксиацил-КоА Г. Ацил-КоА Д. Ацетил-КоА |