Количественное определение каталазы
Порядок выполнения работы. Разведенную кровь (1:1000) взбалтывают, наливают по 1 мл в две колбы (или в два стаканчика), приливают 7 мл дистиллированной воды; в опытную пробу добавляют 2 мл 1% раствора перекиси водорода, в контрольную – 5 мл 10% раствора серной кислоты. Действие каталазы в кислой среде (контрольная проба) прекращается, так как она действует при рН=7,4. Колбы оставляют в комнатной температуре на 30 минут. Затем приливают в опытную пробу 5 мл 10% раствора серной кислоты, а в контрольную – 2 мл 1% раствора перекиси водорода. Содержимое каждой колбы титруют 0,1 н раствором перманганата калия до появления розовой окраски. Рассчитывают каталазное число (КЧ) по формуле: КЧ = (А-В) ´ 1,7, где А – количество 0,1 н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование контрольной пробы, мл; В – количество 0,1н раствора перманганата калия, пошедшее на титрование опытной пробы, мл. На титрование контрольной пробы, где каталаза разрушена, пойдет больше раствора перманганата калия, чем на титрование опытной пробы. Полученную разность умножают на 1,7 и получают каталазное число для исследуемой пробы.
В норме КЧ колеблется от 10 до 15 единиц.
Клинико-диагностическое значение. Определение активности каталазы имеет значение для диагностики рака, анемии, туберкулеза. При этих заболеваниях содержание каталазы в крови снижается.
Тема 3.3. ГЛЮКОНЕОГЕНЕЗ. ГЛИКОГЕНОЛИЗ.
ГЛИКОГЕНЕЗ.
Вопросы для самоподготовки
1. Назовите конечный продукт анаэробного гликолиза.
2. Судьба молочной кислоты, образующейся в мышцах.
3. Судьба молочной кислоты, образующейся в печени.
4. Дайте определение процессу глюконеогенеза.
5. Назовите метаболиты, используемые для синтеза глюкозы в процессе глюконеогенеза.
6. Назовите три необратимых этапа в процессе гликолиза.
7. Назовите ферменты, действующие на необратимых этапах гликолиза.
8. Назовите обходные пути, действующие на необратимых этапах гликолиза.
9. Назовите фермент, действующий на этапе превращения оксалоацетата в фосфоенолпируват.
10. Назовите фермент, осуществляющий превращение пирувата в оксалоацетат.
11. Назовите фермент, осуществляющий превращение фруктозо-1,6-дифосфата во фруктозо-6-фосфат.
12. Назовите фермент, осуществляющий превращение глюкозо-6-фосфата в глюкозу.
13. Назовите этапы в процессе глюконеогенеза, требующие затраты АТФ.
14. Сколько молей АТФ потребуется на синтез 1 моля глюкозы из 2 молей лактата?
15. Может ли идти синтез глюкозы в клетках печени при дефиците в них кислорода?
16. Биологическое значение глюконеогенеза.
17. Какая связь существует между гликолизом, протекающим в интенсивно работающей мышце, и глюконеогенезом в печени?
18. В каком направлении будет идти реакция, катализируемая лактатдегидрогеназой, при низком значении отношения НАДН/НАД+? Для какого органа это характерно?
19. Значение гликогена для организма.
20. В каких органах преимущественно откладывается гликоген?
21. Составьте схему превращения гликогена в глюкозу.
22. Назовите ферменты, катализирующие этапы превращения гликогена в глюкозу. К какому классу ферментов они относятся?
23. Почему резервной формой углеводов является гликоген, а не глюкоза?
24. Чем отличается гликогенолиз от гликолиза?
25. Сколько молей АТФ образуется при гликогенолизе в пересчете на каждую молекулу глюкозы? Сравните с аналогичной величиной при гликолизе.
26. Как называется процесс синтеза гликогена?
27. Назовите ферменты, участвующие в синтезе гликогена.
28. Напишите процесс синтеза гликогена.
29. В каких органах преимущественно откладывается гликоген после приема пищи?
30. При каких условиях происходит депонирование глюкозы в печени?
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля
1. Дайте определение процессу глюконеогенеза.
2. Перечислите метаболиты, используемые для синтеза глюкозы.
3. Нарисуйте схему глюкозо-лактатного цикла.
4. Нарисуйте схему глюкозо-аланинового цикла.
5. Какое биологическое значение имеют глюкозо-лактатный и глюкозо-аланиновый циклы?
6. Ферментами глюконеогенеза являются:
1. 6-фосфоглюконатдегидрогеназа;
2. фосфоенолпируваткарбоксилаза;
3. фосфоглюкомутаза;
4. глюкозо-6-фосфатаза.
7. Реакцию образования глюкозо-1-фосфата из гликогена ускоряет фермент:
1. глюкокиназа;
2. фосфоглюкомутаза;
3. фосфорилаза;
4. фосфатаза;
5. глюкозофосфатизомераза.
8. Укажите последовательность превращений метаболитов при синтезе гликогена:
1. глюкозо-1-фосфат;
2. глюкоза;
3. глюкозо-6-фосфат;
4. УДФ-глюкоза;
5. гликоген.
Литература
1. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1989. –
С. 243-245, 246-249.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1990. – С. 321-326, 341-345, 335.
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 255-259, 240-244, 251.
4. Задания на самоподготовку по биологической химии.
5. Задания для самостоятельной работы студентов лечебного и медико-профилактического факультетов.
6. Тестовые задания по биохимии.
7. Лекционный материал.
8. Лабораторная работа. Алейникова Т.В., Рубцова Г.В. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. – М.: Высшая школа, 1988. – Лабораторная работа № 68.
9. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 142-144, 150-154.