Определение концентрации белков сыворотки крови биуретовым методом
Принцип метода. Биуретовый метод относится к колориметрическим методам анализа и основан на цветной биуретовой реакции.
Ход определения. Взять в пробирку 0,2 мл исследуемой сыворотки, добавить 4,8 мл дистиллированной воды, перемешать. К 3 мл полученного раствора добавить 3 мл биуретового реактива, смешать. Через 30 минут определить экстинкцию полученного раствора против контроля (3 мл дистиллированной воды + 3 мл биуретового реактива). Данные для построения калибровочной кривой:
| Содержание белка | Оптическая плотность |
| 7,80 5,80 3,95 2,96 1,975 1,46 | 0,303 0,226 0,150 0,113 0,076 0,057 |
Нормальное содержание белка в сыворотке крови взрослых людей 65‑85 г/л (6,5 – 8,5%), у детей до 6 лет – 56-58 г/л (5,6 – 8,5 %).
Тема 7.2. СТРУКТУРА, СВОЙСТВА И ФУНКЦИИ
ИММУНОГЛОБУЛИНОВ.
Вопросы для самоподготовки
1. Назовите белки сыворотки крови, осуществляющие функции неспецифической и специфической защиты организма.
2. Назовите основные классы иммуноглобулинов.
3. Где синтезируются иммуноглобулины?
4. Назовите типы легких цепей иммуноглобулинов.
5. Охарактеризуйте первичную и вторичную структуры легких цепей иммуноглобулинов.
6. Назовите типы тяжелых цепей иммуноглобулинов.
7. Охарактеризуйте первичную и вторичную структуры тяжелых цепей иммуноглобулинов.
8. Охарактеризуйте третичную структуру тяжелых и легких цепей иммуноглобулинов.
9. Охарактеризуйте четвертичную структуру иммуноглобулинов.
10. Нарисуйте схему строения иммуноглобулина класса G.
11. Напишите молекулярные формулы иммуноглобулина класса G.
12. Нарисуйте схему строения иммуноглобулина класса М.
13. Напишите молекулярные формулы иммуноглобулина класса М.
14. Нарисуйте схему строения иммуноглобулина класса А.
15. Напишите молекулярные формулы иммуноглобулина класса А.
16. Напишите молекулярные формулы иммуноглобулина класса D.
17. Напишите молекулярные формулы иммуноглобулина класса Е.
18. Что такое секреторные иммуноглобулины? Какова их физиологическая роль?
19. Строение и функции вариабельных участков пептидных цепей иммуноглобулинов.
20. Строение и функции константных участков пептидных цепей иммуноглобулинов.
21. Формирование и функции активных центров иммуноглобулинов.
22. Строение и функции Fc- и Fab-фрагментов иммуноглобулинов.
23. Какие классы иммуноглобулинов содержатся в крови плода и новорожденного ребенка? Каково их происхождение?
24. С какого возраста начинается активный синтез каждого из классов иммуноглобулинов?
25. Назовите основные причины снижения и увеличения концентрации иммуноглобулинов в крови.
26. Какие последствия для организма имеет гипо- и гипериммуноглобулинемия?
27. В виде каких продуктов иммуноглобулины выводятся из организма?
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля
1. Иммуноглобулины, молекула которых содержит:
| 1. 4 полипептидных цепи; 2. 10 полипептидных цепей. | а) Ig M; б) Ig G; в) Ig A; г) Ig E; д) Ig D. |
2. Шарнирный участок иммуноглобулина объединяет:
1) легкую и тяжелую цепи в молекуле иммуноглобулина;
2) две легких цепи;
3) две тяжелых цепи;
4) N- и C-концевые половины тяжелой цепи.
3. Активный центр иммуноглобулина образован:
1) легкой цепью;
2) легкой и тяжелой цепями;
3) двумя легкими цепями.
4. К белкам неспецифической защиты относятся:
1) α-1-антитрипсин;
2) пропердин;
3) α-2-макроглобулин;
4) лизоцим;
5) интерферон;
6) комплемент.
5. Назовите типы иммуноглобулинов, содержащиеся в крови плода и новорожденного:
1) Ig D;
2) Ig E;
3) Ig M;
4) Ig G;
5) Ig A.
Литература
1. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1989. –
С. 130-135.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 93-94, 571-572.
3. Задания на самоподготовку по биологической химии.
4. Задания для самостоятельной работы студентов лечебного и медико-профилактического факультетов.
5. Тестовые задания по биохимии.
6. Лекционный материал.
Тема 7.3. СТРУКТУРА ГЕМОГЛОБИНОВ.
НАРУШЕНИЯ СИНТЕЗА ГЕМА, МЕТАБОЛИЗМА ПОРФИРИНОВ.
ЖЕЛТУХИ.
Вопросы для самоподготовки
1. Назовите соединения, содержащие гем в качестве небелковой части.
2. Назовите составные части гемоглобина. Какие функции выполняет каждая из составных частей?
3. Напишите схему синтеза гема.
4. Назовите ключевой этап синтеза гема. Какой фермент его катализирует? Как регулируется его активность?
5. В какой форме входит железо в состав гемоглобина?
6. В какой форме находится железо в составе метгемоглобина?
7. Перечислите типы гемоглобина, циркулирующего в крови плода.
8. Перечислите типы гемоглобина, циркулирующего в крови взрослого человека.
9. Назовите пептидные цепи, входящие в состав эмбрионального гемоглобина.
10. Назовите пептидные цепи, входящие в состав фетального гемоглобина.
11. Перечислите типы гемоглобина, циркулирующего в крови новорожденных.
12. Назовите пептидные цепи, входящие в состав гемоглобина взрослого человека.
13. Назовите функциональные различия нормальных гемоглобинов.
14. Что такое «геминовый карман» гемоглобина? Радикалы каких аминокислот его образуют? Биологическое значение «геминового кармана» гемоглобина.
15. Нарисуйте график зависимости диссоциации оксигемоглобина от парциального давления в альвеолах.
16. Какая причина возникновения гипоксии тканей вследствие отравления монооксидом углерода (СО, угарный газ)?
17. Какие клинические расстройства называются порфириями?
18. Назовите разновидности порфирий.
19. Что такое аномальные гемоглобины?
20. Какими свойствами отличаются аномальные гемоглобины от обычных?
21. В чем причина развития метгемоглобинемии? Последствия данной патологии.
22. Почему не во всех случаях появление аномального гемоглобина приводит к развитию анемии?
23. Механизм развития серповидно-клеточной анемии.
24. Механизм развития талассемии.
25. Какие разновидности талассемий Вы знаете? Какая из них протекает тяжелее и почему?
26. Какова продолжительность жизни эритроцитов?
27. В каких тканях и органах происходит физиологическое разрушение эритроцитов?
28. Нарисуйте схему образования непрямого (свободного) билирубина из небелковой части гемоглобина.
29. В виде чего, куда и с какой целью транспортируется непрямой билирубин после его образования?
30. Каков механизм образования непрямого билирубина?
31. В виде чего и в каком количестве (мкмоль/л) присутствует в плазме крови билирубин?
32. Где и из чего образуется мезобилирубиноген (уробилиноген)?
33. Где и из чего образуется стеркобилиноген?
34. Назовите конечные продукты превращения билирубина.
35. Где определяются и в каком количестве (мг в сутки) выводятся конечные продукты обмена билирубина?
36. Составьте схему метаболизма гема.
37. Что такое желтуха? Перечислите основные формы желтух.
38. Какие биохимические исследования проводят при подозрении на желтуху?
39. Назовите основные причины возникновения гемолитической желтухи. Каков механизм ее развития?
40. Какие результаты можно ожидать при биохимических исследованиях крови, мочи и кала при подозрении на гемолитическую желтуху?
41. Назовите основные причины возникновения обтурационной желтухи. Каков механизм ее развития?
42. Какие результаты можно ожидать при биохимических исследованиях крови, мочи и кала при подозрении на обтурационную желтуху?
43. Назовите основные причины возникновения паренхиматозной желтухи. Каков механизм ее развития?
44. Какие результаты можно ожидать при биохимических исследованиях крови, мочи и кала при подозрении на паренхиматозную желтуху?
45. Что такое желтуха новорожденных?
Вопросы, задачи и упражнения для самоконтроля
1. При серповидно-клеточной анемии в b-цепи гемоглобина остаток глутаминовой кислоты замещен на:
1) лизин;
2) тирозин;
3) валин;
4) лейцин;
5) глутамин.
2. Назовите исходные вещества в синтезе гема:
1) тирозин;
2) сукцинил-КоА;
3) ацетил-КоА;
4) глицин;
5) валин.
3. Степень насыщения гемоглобина кислородом зависит от:
1) присутствия в эритроцитах 2,3-бисфосфоглицерата;
2) присутствия 3-фосфоглицерата;
3) парциального давления кислорода;
4) четвертичной структуры гемоглобина;
5) концентрации ионов водорода и СО2;
6) концентрации альбумина в крови.
4. Первый желчный пигмент в катаболизме гема:
1) холевая кислота;
2) билирубин;
3) литохолевая кислота;
4) биливердин;
5) дезоксихолевая кислота;
6) вердоглобин.
5. Билирубин транспортируется в печень в комбинации с:
1) трансферрином;
2) альбумином;
3) глобулином;
4) гаптоглобином;
5) церулоплазмином.
6. В печени церулоплазмин связывается с:
1) глюкозой;
2) холевой кислотой;
3) глицином;
4) глюкуроновой кислотой;
5) гиалуроновой кислотой.
7. Распад гемоглобина протекает в:
1) макрофагах;
2) лимфоцитах;
3) гистиоцитах соединительной ткани;
4) эритроцитах;
5) тромбоцитах.
8. Генетически обусловленное нарушение синтеза одной из нормальных цепей гемоглобина – это:
1) серповидноклеточная анемия;
2) талассемия;
3) порфирия;
4) мутация.
Литература
1. Николаев А.Я. Биологическая химия. – М.: Высшая школа, 1989. –
С. 45-46, 144, 146, 415-418, 428-436.
2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1990. – С. 65-71, 434-437.
3. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. – М.: Медицина, 1998. – С. 78-85, 561-565.
4. Северин Е.С., Николаев А.Я. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2001. – С. 310-312, 435-436.
5. Задания для самостоятельной работы студентов лечебного и медико-профилактического факультетов.
6. Тестовые задания по биохимии.
7. Лекционный материал.
8. Лабораторная работа. Алейникова Т.В., Рубцова Г.В. Руководство к практическим занятиям по биологической химии. – М.: Высшая школа, 1988. – Лабораторная работа № 104. Определение общего билирубина в сыворотке крови.