Опыт 1. Извлечение нуклеопротеидов из дрожжей
· В фарфоровую ступку поместите 1 г дрожжей, добавьте 1 каплю эфира, 2 капли дистиллированной воды, около 0,1 г стеклянного песка.
· Дрожжевую массу расзотрите пестиком 1-2 минуты для разрушения клеток.
· В ступку добавьте 4 мл 0,4 % раствора гидроксида натрия и растирайте еще 5 минут.
· Содержимое ступки пипеткой перенесите в центрифужную пробирку и центрифугируйте 10 минут при 2000 об/мин.
· Надосадочную жидкость перенесите пипеткой в стакан с 80-90 мл воды, подкисленной до рН=4,5 уксусной кислотой.
· Выпавший осадок РНК-протеина отделите центрифугированием 10 минут при 2000 об/мин..
Опыт 2. Изучение химического состава рибонуклеинов дрожжей.
· 200 мг дрожжей поместите в широкую пробирку и добавьте 5 мл 10 % раствора серной кислоты и 5 мл дистиллированной воды.
· Смесь перемешайте и закройте пробкой с обратным холодильником.
· Пробирку поместите на кипящую водяную баню и кипятите при слабом нагревании 1 час.
· Пробирку охладите.
· Отфильтруйте содержимое пробирки.
· Фильтрат (гидролизат) используйте в опытах 3 – 6.
Опыт 3. Биуретовая реакция на белок.
· К 5-6 каплям гидролизата прибавьте 10 капель 10 % раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1 % раствора сульфата меди. При наличии белка жидкость окрашивается в розово-фиолетовый цвет.
Опыт 4. Серебреная проба на пуриновые основания.
· К 0,5 мл гидролизата добавьте раствор аммиака до щелочной реакции на лакмус и 0,5 мл аммиачного раствора оксида серебра.
· Через 5 минут при стоянии выпадает небольшой хлопьевидный осадок серебряных соединений пуриновых оснований.
Опыт 5. Реакция на пентозы.
· К 0,5 мл гидролизата добавьте 0,5 мл 10 % раствора гидроксида натрия и по каплям раствор сульфата меди до образования осадка.
· Смесь нагрейте до кипения. В случае присутствия моносахаридов (петноз) образуется красный осадок закиси меди.
Опыт 6.Молибденовая проба на фосфорную кислоту.
· К 0,5 мл гидролизата прибавьте равный объем молибденового реактива и кипятите несколько минут. Жидкость окрашивается в лимонно-желтый цвет.
· Смесь охладите. При охлаждении образуется желтый осадок фосфорно-молибденово-кислого аммония.
Опыт 7. Качественная реакция на рибозу.
· К 0,5 мл 0,1 % раствора РНК добавьте равный объем орцинового реактива (1г орцина в 500 мл 30 % раствора НCI + 5 мл 10 % раствора хлорида железа(III).
· Кипятите 10 минут на кипящей водяной бане. В присутствии рибозы развивается зеленое окрашивание (под влиянием концентрированной соляной кислоты от рибозы отщепляется 3 молекулы воды и образуется метилфурфурол, который с орцином дает зеленое окрашивание).
Ответьте на вопросы:
1. Какие ферменты расщепляют нуклеиновые кислоты в ЖКТ?
2. Напишите параллельную цепь ДНК для участка: ААТЦЦГТТАТГГ. Укажите триплеты.
3. Перечислите основные этапы биосинтеза белка.
4. *Напишите последовательность цепи РНК для участка ДНК: ЦЦТГАТАЦЦТГА.
5. *Напишите уравнение реакции гидролиза мононуклеотида, образованного рибозой, аденином и остатком фосфорной кислоты.
Практическая работа
«Качественные реакции на витамины».
Цели практической работы:
· закрепить знания о строении, классификации и функциях витаминов;
· научиться проводить качественные реакции на витамины.
Задания для самостоятельной работы:
1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.
2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.
3. Выполните практическую работу.
4. Оформите результаты работы оформить в виде таблицы:
| № п/п | Ход работы. Рисунки. | Наблюдения | Выводы |
5. Сделайте вывод по работе.
6. Ответьте на дополнительные вопросы.