Рекомендациипо забору, хранению и транспортировке
УТВЕРЖДАЮ
Директор ДКГСЭН МЗ РК по ВКО
______________Ерубаев Т.К
СОГЛАСОВАНО СОГЛАСОВАНО
Начальник УЗ ВКО Директор РГКП ВКО ЦСЭЭ
___________Масалимов Е.Т ____________Омарбекова А.С
МЕТОДИЧЕСКОЕ ПИСЬМО
Алгоритм лабораторного обследования больных острыми
респираторно-вирусными инфекциями/гриппом
Условия выбора контингента обследуемых
Выбор контингента больных острыми респираторно-вирусными инфекциями, обследуемых лабораторными методами зависит:
- от периода распространения заболеваний (предэпидемический или эпидемический).
- от выявления факта циркуляции на территории типов вируса сезонного гриппа – (после определения 10 лабораторно подтвержденных случаев гриппа на территории области, работа лаборатории проводится в штатном режиме, за исключением неординарных случаев).
- от клинических особенностей конкретного заболевания.
· тяжесть течения (быстрота развития первичной вирусной пневмонии, миокардита, ДВС-синдром, другие угрожающие жизни состояния), летальные случаи.
- от выбора метода лабораторного исследования (люминесцентной микроскопии, вирусологический, серологический или метод ОТ-ПЦР)
Алгоритм определения необходимости направления
Материала на лабораторное исследование
2.1. В предэпидемический период и в начале эпидемического подъёма (до определения на территории состава циркулирующих типов вируса) на лабораторные исследования направляется материал от всех тяжёлых больных ОРВИ, от больных ОРВИ с атипичными сопутствующими клиническими проявлениями заболеваний, по всем летальным от ОРВИ случаям
2.2 В эпидемический период, когда выяснен состав циркулирующих на территории сезонных вирусов (10 лабораторно подтвержденных случаев гриппа на территории области) и определено их влияние на эпидпроцесс, отбирается только секционный материал по летальным случаям для исследований методом ОТ-ПЦР. Возможно проведение исследований от тяжёлых больных, исходя из имеющихся возможностей лаборатории. В данном случае проведение лабораторных исследований согласовывается с ДКГСЭН МЗ РК по ВКО.
Рекомендациипо забору, хранению и транспортировке
материала для вирусологических исследований на грипп/ОРВИ
Материалом для лабораторной диагностики гриппа служат мазки из носа или зева, назофарингиальные аспираты, кровь (парные сыворотки), а также секционный материал (ткани легкого, кусочки бронхов, и др.),
Результаты вирусологических и серологических исследований зависят от качества собранного материала, условий хранения и транспортировки в лабораторию.
При взятии материала для исследования на вирусные инфекции необходимо соблюдать следующие требования:
1. Материал от больного должен быть собран в первые дни от начала заболевания.
2. Для ограничения бактериального загрязнения все пробы, включая пробы крови на серологию, должны забираться асептично.
3. Правильно выбрать материал наиболее пригодный для вирусологического исследования, т.е. с наибольшей вероятностью содержащий вирус.
4. Правильно транспортировать материал в лабораторию: в специальных контейнерах с термоизоляцией и хладоэлементами.
При необходимости материал, приготовленный для вирусологического исследования, можно хранить в замороженном состоянии при минус 70оС., однако при этом не допускается многократное замораживание и оттаивание материала, что ведет к инактивации вирусов.
Пробы, взятые у больного, сопровождаются направлением, в котором должна содержаться максимальная информация о больном (дата начала заболевания, дата отбора материала, условия хранения и транспортировки). Пробирки с образцами также должны иметь маркировку с информацией о типе образца в пробирке и дате его забора. При заборе материала обязательно должны использоваться средства индивидуальной защиты.
4.Отбор и подготовка заразного материала(Приложение №2)
Мазок из носа и зева для ПЦР-диагностики гриппа
Важнейшим этапом исследования является получение полноценного материала, в котором содержалось бы достаточно много эпителиальных клеток, которые выстилают глубокие отделы нижних носовых ходов и служат местом репликации вирусов. Респираторные вирусы не размножаются в ближайших к входу носовых отделах.
Мазок из носа и зева берут впервые 3 дня от начала заболевания,в поздние сроки вирус спускается из носоглотки, и вероятность его выделения из мазка ничтожно мала.
Перед процедурой забора материала необходимо освободить носовую полость от слизи. Мазок берут стерильным тампоном с синтетической головкой, фиксированным на алюминиевой или пластиковой рукоятке. Не рекомендуется брать мазки хлопчатобумажными тампонами на деревянной рукоятке. Категорически запрещается использовать тампоны, сделанные из альгината кальция. Мазок из носа должен быть взят только из нижней носовой раковины осторожными движениями. Тампон вводят в нижнюю носовою раковину, почувствовав затруднение в передвижении тампон прижимают к внутренней перегородке носа, делается вращательное движение, чтобы снять эпителиальные клетки со слизистой оболочки носа. Тампон погружают во флакон с вирусной транспортной средой (р-р Хенкса, Среда 199 с добавлением антибиотиков) или физиологическим раствором с добавлением антибиотиков (например, пенициллин, канамицин, гентамицин) стержень обламывают (обрезают) на уровне горла флакона и плотно закрывают.
Мазок из зева берут с задней стенки глотки и с миндалин если они гиперемированы.
Информацию об образце наносят нестираемым маркером, устойчивым к спирту, на пробирке, а не на крышке, которую можно перепутать во время работы. Наклеивающиеся этикетки не должны использоваться, так как могут легко отклеиваться, особенно, если образцы замораживаются при очень низких температурах.
Кровь.
Кровь для серологического исследования берется из вены дважды, в количестве 5 мл для взрослых и 1 мл для грудных детей (маленьким детям серологические исследования не рекомендованы, из-за позднего получения результата и травматичности получения материала) в стерильные пробирки.
Первую пробу берут в острый период заболевания, с первых дней заболевания,
вторую пробу через 7-14 дней (кровь допускается оставить для свертываемости на ночь, а утром собрать сыворотку при помощи пипетки). Не следует оставлять сыворотку в контакте со свернутой кровью дольше, чем на 12 часов, так как может произойти лизис эритроцитов. Пробирки для сывороток должны быть оснащены внешними крышками с внутренним кольцом-уплотнителем.
Следует предотвращать попадание в сыворотку эритроцитов, так как при хранении они подвергаются гемолизу, что может повлиять на результаты серологических исследований. В лабораторию отправляются 2 пробы сывороток, а до забора второй пробы сыворотки, первая хранятся в замороженном состоянии (минус 16˚ С).
Секционный материал.
Исследования необходимо производить в случае смерти больного, при подозрении на гриппозное заболевание. Вскрытие производится в возможно ранние сроки после наступления смерти. Для исследования берутся 2-3 кусочка лёгкого величиной 3-6 см из поражённого участка, отрезок бронхов из области бифуркации и отрезок трахеи длиной 7-8 см. Кусочки секционного материала вырезаются стерильными инструментами. Взятый материал помещается в стерильную посуду без какого-либо консерванта. Ткань легкого освобождается от излишков крови фильтровальной бумагой, и далее делаются отпечатки на предметном стекле. Из трахеи делается соскоб слизистой, который тонким слоем наносится на стекло и высушивается при комнатной температуре.
Подготовленные образцы должны транспортироваться в лабораторию как можно быстрее с соблюдением «холодового» режима.