Проба на толерантность к глюкозе
У практически здоровых людей уровень глюкозы в пределах 3,3-5,5 ммоль/л натощак не всегда свидетельство мощных резервных механизмов поджелудочной железы. Если в анамнезе жизни таких лиц выявляется, что при рождении масса тела превышала 4 кг, или же они страдают ожирением, или когда один или оба родителя болеют сахарным диабетом, то у них велика опасность возникновения сахарного диабета (СД), что можно подтвердить с помощью пробы с сахарной нагрузкой.
Принцип метода: Для этой цели натощак производят забор крови, после чего дают выпить 200 мл теплой воды, в которой растворено 100 г сахарозы (50 г глюкозы), затем через каждые 15 минут берут кровь в течение 2-3 часов. У лиц, потенциально больных, натощак уровень глюкозы в пределах нормы, но на 30-45-й минутах регистрируется подъём, превышающий исходные величины в 2 или более раза; затем начинается медленное снижение, не достигающее цифр, определяемых натощак, даже к концу 3-го часа. Если мощность поджелудочной железы велика, то рост концентрации глюкозы на 30-й минуте не превышает 75-80 % от исходных цифр, к концу 2-го часа содержание моносахарида возвращается к начальным значениям, а к 3-му часу может наблюдаться даже ещё большее уменьшение, обусловленное усиленной секрецией инсулина (подробнее см. «Методические рекомендации». Чита. 1999г., с. 34).
3. Количественное определение холестерина в сыворотке крови
Уровни нормы холестерола (ХС), выявленные при обследовании «в целом здорового населения» относительно высоки. С точки зрения риска развития ИБС, выделяют три уровня:
— рекомендуемый — менее 5,00 ммоль/л;
— умеренный риск — 5,00 – 6,20 ммоль/л;
— высокий риск — более 6,20 ммоль/л.
Увеличение концентрации ХС наблюдается при различных наследственных гиперлипопротеинемиях, приобретённой гиперлипопротеинемии, заболеваниях печени, холестазе, ИБС, диабете, алкоголизме, гипотирозе, гиперкортицизме, желчнокаменной болезни, атеросклерозе, гипертонической болезни и некоторых других патологических состояниях. Гипохолестеролемия обнаружена при гиполипопротеинемиях, некрозе печёночных клеток, злокачественных опухолях печени, гипертиреозе, нарушении питания и т.д. Отмечены сезонные колебания уровня ХС: более высокие показатели осенью и зимой, более низкие — весной и летом. В настоящее время используется ферментативный метод определения холестерина, с использованием стандартных коммерческих наборов реактивов.
а)Определение содержания общего ХС в сыворотке крови проводят с помощью холестеролоксидазной реакции.
Принцип метода: Метод колориметрический, энзиматический с эстеразой и оксидазой холестерина.
Холестерол и его эфиры выделяются из липопротеинов с помощью детергентов. Холестеролэстераза, содержащаяся в наборе реактивов, гидролизует эфиры. В результате последующего окисления ХС холестеролоксидазой образуется пероксид водорода, количество которого определяется по цветной реакции.
Эфиры ХС + НОН -------------- ХС + ВЖК;
ХС + О2 ---------------- продукт окисления ХС + Н2О2;
Н2О2 + n-хлорфенол + 4-аминоантипирин -------- хинониминовый краситель (розовая окраска) + НОН.
Интенсивность окраски, развивающейся в ходе реакции, пропорциональна содержанию ХС в плазме крови.
Параллельно исследуемой сыворотки крови (образец исследуемый ОИ) проводят обработку стандартной пробы (образец стандартный ОС), в которую вместо сыворотки вносят такой же объем калибровочного раствора ХС (концентрация которого указана на этикетке бутылька, входящего в состав набора). Интенсивность развившегося окрашивания измеряют, фотометрируя при 550 нм против холостой пробы, которую ставят также, как и опытную, но вместо исследуемого материала берут воду. Расчёт результатов проводят по формуле:
Концентрация = оптическая плотность (ОИ) * концентрация
холестерина оприческая плотность (ОС) стандарта
б)Определение содержания ХС ЛПВП
Исследование уровня общего ХС не даёт диагностической информации об определённом заболевании, а характеризует только наличие патологии обмена липидов и ЛП. Эпидемиологические исследования показали обратную зависимость между содержанием ХС ЛПВП и распространённостью ИБС. Для оценки состояния липидного обмена и прогнозирования риска ИБС определяют величины ХС ЛПВП.
Принцип метода: ХМ, ЛПОНП и ЛПНП, содержащиеся в исследуемой пробе осаждают добавлением фофорно-вольфрамовой кислоты и хлорида магния. Осадок отделяют центрифугированием. ЛПВП остаются в растворе. ХС, содержащийся в этой фракции, определяют ферментативно (см выше). Нормальное содержание ХС ЛПВП в сыворотке крови составляет 0,9-1,9 ммоль/л.
в)Определение содержания ХС ЛПОНП и ХС ЛПНП
Для определения ХС ЛПОНП и ХС ЛПНП используют расчёты.
ХС ЛПОНП = ТАГ(ммоль/л) : 2,18;
ХС ЛПНП = ОХ – (ХС ЛПВП+ ХС ЛПОНП).
Определение этих величин позволяет рассчитать индекс атерогенности (ИА):
ИА = (ХС ЛПНП + ХС ЛПОНП) : ХС ЛПВП.
Индекс атерогенности выше 2,5 характеризует вероятность развития атеросклероза.
Чаще наблюдается гиперхолестеринемия (атеросклероз, обострение желчнокаменной болезни, ишемическая болезнь сердца, микседема и др.), реже регистрируется гипохолестеринемия(у тяжёлых алкоголиков, при тиреотоксикозе).