Общий клинический анализ крови.
Скорость оседания эритроцитов. Кровь, смешанная с каким-либо антикоагулянтом, постепенно разделяется на два слоя: нижний – состоящий из форменных элементов крови, главным образом эритроцитов и верхний – образованный плазмой. Скорость такого разделения не одинаковая у животных разных видов и значительно изменяется при некоторых заболеваниях. Эритроциты оседают под действием собственной силы тяжести. На скорость оседания влияют такие факторы как концентрация белков в крови, соотношение их фракций, количество эритроцитов и величина их отрицательного заряда, содержание минеральных веществ и некоторые другие.
Определяют СОЭ сразу же после взятия крови (не позднее 2-х часов). Наиболее часто используют микрометод Панченкова, для которого промышленностью выпускаются специальный штатив и градуированные капилляры. У здоровых животных СОЭ по Панченкову, при вертикальном расположении капилляра, составляет в мм за 1 ч: крупный рогатый скот - 0,5-1,5; овца - 0,5-1; коза - 0,3-1; лошадь - 40-70; свинья - 2-9; собака - 2-6.
СОЭ не является специфической для какого-либо заболевания, однако ускорение всегда указывает на наличие патологического процесса и наблюдается при различных формах анемии (особенно инфекционной анемии у лошадей), заразных заболеваниях, воспалительных процессах, злокачественных новообразованиях. Замедление СОЭ может быть результатом утомления, гипергидроза, длительной диареи, непроходимости кишечника, поражений печени и др.
Определение концентрации гемоглобина. Для определения гемоглобина крови предложено довольно большое количество различных методик. Наибольшее распространение получили колориметрические, такие как гемоглобинцианидный с применением ацетонангидрина (унифицирован в медицине) и гематиновый метод Сали. Последний чрезвычайно прост и быстро выполним, но недостаточно точен. При суммировании различных погрешностей этого метода ошибка составляет +30%. Поэтому в настоящее время он не может быть рекомендован для лабораторной практики.
Принцип гемоглобинцианидного метода основан на том, что гемоглобин окисляется в метгемоглобин (гемиглобин) железосинеродистым калием (красная кровяная соль). Интенсивность окраски образующегося с ацетонангидрином цианметгемоглобина (гемоглобинцианида) определяют на фотоэлектроколориметре. Она зависит от содержания в крови гемоглобина.
У взрослых здоровых животных концентрация гемоглобина составляет (г/л): крупный рогатый скот – 100-130; овца – 90-130; коза – 100-150; лошадь – 80-140; свинья – 90-110; собака – 110-170.
Увеличение концентрации гемоглобина наблюдается при диарее, рвоте, гипергидрозе, образовании экссудатов и транссудатов, миоглобинурии, эмфиземе легких. Уменьшение количества гемоглобина чаще регистрируется при анемии. При этом следует иметь в виду, этот симптом является типичным для дефицитных форм анемии (недостаточность железа, витамина В12, ферментов и др.).
Определение концентрации гемоглобина имеет также прогностическое значение. Прекращение снижения или постепенное повышение концентрации гемоглобина является благоприятным симптомом, уменьшение же его количества до 50 г/л – это неблагоприятный признак. Выявление показателя в 30 г/л является угрожающим для жизни животного симптомом.
Подсчет числа эритроцитов. Эритроциты – самые многочисленные форменные элементы крови, которые содержат гемоглобин. С помощью гемоглобина эритроциты переносят кислород и углекислоту. Кроме того, они доставляют клеткам аминокислоты и липиды, принимают участие в регуляции кислотно-щелочного равновесия, выполняют защитную и другие жизненно важные функции.
Содержание эритроцитов в крови здоровых животных довольно постоянное, поэтому установление изменения их количества имеет диагностическое значение. Вместе с тем, следует иметь в виду, что их число может изменяться в зависимости от времени суток исследования, возраста, пола, продуктивности, физической нагрузки животного. Так, например, количество эритроцитов днем несколько меньше чем вечером, у новорожденных их содержание выше, чем у взрослых, также как и у самцов по сравнению с самками. У высокопродуктивных коров показатели содержания эритроцитов выше, чем у малопродуктивных. Установлено также, что у лошадей после физической нагрузки (например 10-минутная прогонка рысью) число эритроцитов увеличивается на 20 и более процентов.
Подсчет эритроцитов проводят чаще в счетной камере с применением микроскопа. Принцип метода заключается в том, что точное количество крови равномерно смешивают с определенным количеством жидкости. Разведенную кровь помещают в камеру с известным объемом. На дно камеры нанесена сетка, благодаря которой возможен точный подсчет клеток посредством микроскопии. Погрешность этого метода подсчета эритроцитов составляет + 2-5%.
В лабораторной практике все более широкое применение находит подсчет эритроцитов и других клеток крови посредством гематологических анализаторов. Благодаря автоматизации исследования и исключения субъективного фактора погрешность этого метода сведена до + 2%. По принципу работы анализаторы делятся на два основных типа – кондуктометрические и оптические.
Кондуктометрический принцип определения заключается в изменении сопротивления клетки в постоянном электрическом поле. Технология определения состоит в том, что фиксируется момент прохода через отверстие малого диаметра (апертуру) клеток крови. Для этого по обе стороны отверстия располагаются электроды с поданным на них напряжением. При протекании через отверстие чистого раствора электролита сопротивление в цепи мало, но в момент прохождения через апертуру клетки оно резко возрастает, что приводит к увеличению напряжения в цепи. Импульсы изменения напряжения фиксируются и подсчитываются специальным датчиком. Специальный прибор (дискриминатор) пропускает импульсы заранее заданной амплитуды, что позволяет регистрировать клетки в зависимости от их размера.
Оптический принцип определения в своей основе имеет измерение величины светопоглощение или светорассеивания. В анализаторах этого типа регистрируются электрооптические импульсы, возникающие при прохождении клеток крови в луче светового потока. Интенсивность импульса прямо пропорциональна размеру исследуемых частиц. Световой луч фокусируется на капилляр, через который проходят клетки, в результате чего происходит либо светопоглощение, либо светорассеяние светового потока. Величина светопоглощения или светорассеяния обусловлена размером, формой и структурой клеток крови.
Количество эритроцитов (1012/л) у взрослых здоровых животных следующее: крупный рогатый скот – 5,0-7,5; лошадь – 6,0-9,0; свинья – 6,0-7,5; овца – 7,0-12,0; коза – 12,0-18,0; собака – 5,2-8,4; кошка – 6,6-9,4; кролик – 4,5-7,5; курица – 3,0-4,0.
Уменьшение числа эритроцитов (эритроцитопения, олигоцитемия) отмечается наиболее часто при анемиях различного происхождения (постгеморрагических, гемолитических, железо- и витаминодефицитных, гипо- и апластических, которые связаны с нарушением кроветворения). Эритроцитопения развивается также при инфекционной анемии лошадей, гематурии крупного рогатого скота, при многих острых и хронических интоксикациях.
Увеличенное содержание эритроцитов в крови – эритроцитоз (полицитемия) наблюдается чаще при заболеваниях, связанных с потерей организмом жидкости, в частности при диспептическом неонатальном и диарейном синдромах. Она бывает в начальную стадию инфекционных и лихорадочных заболеваний, при болевом абдоминальном синдроме, при пороках сердца в стадию декомпенсации, при отравлении фосфором, ртутью, окисью углерода, альвеолярной эмфиземе легких.
При ряде заболеваний у животных может происходить изменение насыщенности эритроцитов гемоглобином, что устанавливают посредством расчета индексов красной крови – цветового показателя (ЦП) и среднего содержания гемоглобина в эритроците (СГЭ). ЦП дает представление об отношении концентрации гемоглобина к количеству эритроцитов. Метод определения основан на сравнении полученных результатов с нормативными показателями здоровых животных.
ЦП рассчитывается по формуле:
Hb2 . Е1
ЦП =
Hb1 . Е2
где Hb1 и Е1 – это средние показатели соответственно концентрации гемоглобина и числа эритроцитов у здорового животного данного вида и возраста, а Hb2 и Е2 – это показатели у исследуемого животного.
У здоровых животных ЦП равен 1,0+0,15, т.е. пределы колебаний составляют от 0,85 до 1,15.
Для определения средней насыщенности эритроцитов гемоглобином рассчитывают СГЭ по формуле:
СГЭ (пг) = Hb (г/л):Е (1012/л)
где Hb и Е – это соответственно показатели гемоглобина и эритроцитов у исследуемого животного.
СГЭ у крупного рогатого скота равно 15-20; свиней - 16-19; лошадей 17-20 пг (1 пг=10-12 г).
Определение индексов красной крови имеет важное значение в дифференциальной диагностике анемий, практически все формы которой проявляются бледностью слизистых оболочек и кожи, одышкой, тахикардией со стучащим сердечным толчком, увеличением СОЭ. При подострой постгеморрагической анемии, когда одновременно уменьшается содержание гемоглобина и количество эритроцитов, ЦП приближается к 1, а СГЭ такое же, как и у здоровых животных. ЦП меньше единицы и отмечается снижение СГЭ при алиментарной, а также при хронической постгеморрагической анемии. Для этих форм анемии данный симптом является типичным. ЦП больше единицы и увеличивается СГЭ при гемолитической анемии, поскольку значительно уменьшается количество эритроцитов.
Подсчет числа лейкоцитов. Лейкоциты, или белые кровяные тельца, в организме выполняют, прежде всего, защитную функцию. В зависимости от вида они участвуют в фагоцитозе, выработке интерферона, лизоцима, пропердина, гистамина и других биологически активных веществ. Лимфоциты играют основную роль в специфических защитных реакциях – формировании клеточного и гуморального иммунитета.
Подсчет лейкоцитов, также как и эритроцитов производят в счетной камере (ошибка метода +5-7%). Количество лейкоцитов (109/л) у взрослых здоровых животных следующее: крупный рогатый скот – 4,5-12,0; лошадь – 7,0-12,0; свинья – 8,0-16,0; овца – 6,0-14,0; коза – 8,0-17,0; собака – 8,5-10,5; кошка – 10,0-20,0; кролик – 6,5-9,5; курица – 20,0-40,0.
Увеличение количества лейкоцитов в крови (лейкоцитоз) может быть физиологическим, медикаментозным и патологическим. Физиологический лейкоцитоз устанавливают при беременности, после физических нагрузок, приема корма плотоядными животными, при стрессе. Медикаментозный лейкоцитоз наблюдается после парентерального введения животным белковых препаратов, вакцин, сывороток, алкалоидов и т.д. Патологический лейкоцитоз отмечается при гнойно-воспалительных процессах, сопровождающих целый ряд внутренних болезней: бронхопневмонию, пневмонию, плеврит, перикардит, ретикулоперитонит и др. Выраженный лейкоцитоз наблюдается при многих острых и хронических инфекционных заболеваниях, хирургической инфекции. Возникает он и при отравлении животных ртутью, мышьяком, передозировке камфары.
Снижение числа лейкоцитов (лейкоцитопения) является результатом угнетения органов кроветворения, их истощения, пониженной реактивности организма. Лейкоцитопения развивается в результате тяжелых инфекционных заболеваний (классическая чума свиней, инфекционный энцефаломиелит лошадей, сальмонеллез, стахиботриотоксикоз и др.), радиационных поражений, передозировки препаратов (сульфаниламидов, левомецитина, синтомицина и др.). Выявление лейкоцитопении при заболеваниях, для которых характерен лейкоцитоз, указывает на сниженную естественную резистентность организма и тяжелое течение болезни.
Подсчет числа тромбоцитов. Тромбоциты (кровяные пластинки) участвуют, главным образом, в свертывании крови и защитных реакциях организма. Показаниями для их подсчета являются нарушения свертывающей системы крови, а также воздействие ионизирующих излучений на организм животных. Определяют количество тромбоцитов в счетной камере, посредством гематологического анализатора или в мазке крови. Количество тромбоцитов (109/л) у взрослых здоровых животных следующее: крупный рогатый скот – 260-700; лошадь – 200-500; свинья – 180-300; овца – 270-500; коза – 300-900; собака – 250-550; кошка – 100-500; кролик – 125-250; курица – 32-100.
Уменьшение числа тромбоцитов (тромбоцитопения) выявляется при геморрагических диатезах. Геморрагические диатезы – это группа заболеваний и патологических состояний, в основе которых лежат нарушения различных звеньев системы гемостаза. При этом отмечаются: кровоизлияния различного характера и величины в кожу, подкожную клетчатку, слизистые оболочки, ткани и полости организма; гематомы и кровотечения при незначительных травмах и хирургических вмешательствах; понижение свертываемости крови (удлинение времени кровотечения). Геморрагический диатез, обусловленный недостаточностью аскорбиновой кислоты проявляется кровоточивостью десен, образованием на них язв, расшатыванием зубов, опуханием суставов.
Тромбоцитоз, или увеличение числа тромбоцитов, наблюдается реже и может быть при пневмонии, плеврите, в стадию выздоровления при инфекционных заболеваниях и после хирургических операций.
Выведение лейкограммы крови. Лейкограмма – это процентное соотношение различных видов лейкоцитов, записанное в определенном порядке. Для ее выведения необходимо изготовить, зафиксировать и окрасить мазок крови. При микроскопии учитывают только целые неразрушенные клетки. В крови животных находят следующие виды лейкоцитов: содержащие в цитоплазме гранулы – это базофилы, эозинофилы, нейтрофилы (миелоциты, юные, палочкоядерные и сегментоядерные); без гранул в цитоплазме – лимфоциты и моноциты.
При выведении лейкограммы крови у животных при различных патологических состояниях можно установить увеличение или уменьшение содержания отдельных видов лейкоцитов (видовые лейкоцитозы и лейкопении), наличие молодых, незрелых форм клеток, а также патологические изменения в ядере и цитоплазме лейкоцитов. Это имеет большое диагностическое и прогностическое значение.
Базофилы имеют округлую форму, их величина порядка 10-14 мкм. У зрелых клеток ядро полиморфное, плохо заметное, с неясными очертаниями, окрашено в слабо-фиолетовый цвет с бордовым оттенком. Цитоплазма окрашена слабо в розовый или бледно-фиолетовый цвет. Гранулы круглой или расплывчатой формы, темно-фиолетовые или даже черные. Они могут быть разрушены и на их месте видны вакуоли.
Увеличение содержания базофилов у животных наблюдают относительно редко. Она типична в основном при миелоидном лейкозе, аллергии, диабете, гипотиреозе, после парентерального введения сывороток. Базофилия может сопровождать эозинофилию при гельминтозах. Уменьшение количества базофилов учесть трудно из-за малого содержания в крови. Считается, что их число снижается параллельно с уменьшением количества эозинофилов.
Эозинофилы обычно округлой формы, величиной от 10 до 25 мкм. Цитоплазма светло-голубая, содержит розово-красную круглую или слегка овальную зернистость, которая особенно крупная у лошади и собаки. Форма ядра зависит от степени зрелости клеток. У зрелых эозинофилов оно сегментированное, а у молодых – округлое, окрашено в фиолетовый цвет.
Увеличение содержания эозинофилов в крови (эозинофилия) наблюдается в основном при паразитарных заболеваниях (фасциолез, эймериоз, аскаридоз, трихинеллез, поражениях кожи, в т.ч. и грибами). Также типична эозинофилия при аллергических состояниях у животных, при хронической альвеолярной эмфиземе у лошадей. При роже свиней количество эозинофилов может достигать 45%, а при эозинофильном миозите у собак – до 60%. Эозинофилия появляется при переходе острого процесса в хронический, кетозах, суставном ревматизме, заболеваниях печени, иногда после применения антибиотиков, введения сыворотки.
Уменьшение числа эозинофилов типично для сильных интоксикаций, острых инфекционных, протозойных, гнойных заболеваний. Когда эозинопения отмечается на фоне лейкоцитоза с нейтрофильным ядерным сдвигом, то это свидетельствует о прогрессировании процесса. Если же после исчезновения эозинофилов при интоксикации или инфекционном заболевании отмечается увеличение их количества, то это указывает на начавшийся период выздоровления и является благоприятным симптомом.
Нейтрофилы имеют круглую форму, размер от 10 до 15 мкм. По степени зрелости различают миелоциты, юные (метамиелоциты), палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы. Ядро миелоцитов неравномерно окрашено в фиолетовый цвет, может быть круглым или овальным. Цитоплазма бледно-фиолетовая, в ней содержится мелкая зернистость розово-фиолетового цвета. Юные нейтрофилы имеют бобовидные или колбасовидное ядро, также неравномерно окрашенное в фиолетовый цвет. У взрослых здоровых животных в периферической крови миелоциты и юные нейтрофилы обычно не обнаруживаются.
Палочкоядерные нейтрофилы относятся к зрелым клеткам. Ядро у них вытянуто в виде палочки, которая может быть изогнута в виде подковы, дужки, буквы S, на концах булавовидно вздуто, в отдельных местах наблюдаются перехваты, окрашивается неравномерно в темно-фиолетовый цвет. Сегментоядерные нейтрофилы отличаются от палочкоядерных лишь формой ядра, которое состоит из 2-5 сегментов, между которыми имеются перемычки.
Группа нейтрофилов у птиц представлена специальными гранулоцитами – псевдоэозинофилами, которые преобладают среди зернистых лейкоцитов. Размер их 4-9 мкм в диаметре. Ядро у псевдоэозинофилов такое же, как у эозинофилов. Зерна представляют собой продолговатые, веретеноподобные, с заостренными концами гранулы красного цвета. Цитоплазма обычно бесцветная.
Наиболее часто при заболеваниях у животных изменения в лейкограмме происходят среди нейтрофилов в сторону повышения незрелых форм клеток (сдвиг ядра влево) или увеличения количества сегментоядерных нейтрофилов с одновременном уменьшении палочкоядерных клеток (сдвиг ядра вправо). Индекс сдвига (ИС) ядер нейтрофилов рассчитывается по формуле:
М+Ю+П
ИС=
С
ИС имеет диагностическое значение при нейтрофилии (увеличение содержания нейтрофилов), которая встречается наиболее часто и условно делится на несколько типов: 1) нейтрофилия с простым регенеративным (гипорегенеративным) сдвигом ядра влево. Характеризуется увеличением количества палочкоядерных нейтрофилов на 10-13% при нормальном или несколько уменьшенном содержании сегментоядерных клеток. Его наблюдают при хронических, скрыто протекающих инфекциях (туберкулез, и др.), легком течении острых инфекций, протозойных заболеваниях, гнойных местных процессах (нагноение ран, артрит, ограниченный тендовагинит и др.); 2) нейтрофилия с регенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением палочкоядерных с одновременным появлением юных нейтрофилов в небольшом количестве. При этом лейкоцитоз умеренный. Его наблюдают при острых инфекционных заболеваниях, эндокардите, септических процессах, у лошадей – после продолжительной и тяжелой работы; 3) нейтрофилия с резким гиперрегенеративным сдвигом ядра характеризуется увеличением числа палочкоядерных, юных нейтрофилов и появлением миелоцитов. Этот сдвиг указывает на резкое раздражение кроветворных органов. Если одновременно с этим отмечается лейкопения, то это результат угнетения функции костного мозга и является неблагоприятным признаком. Такой сдвиг в картине крови наблюдают при тяжелом течении инфекционных и протозойных заболеваний, септических процессах, острых желудочно-кишечных заболеваниях у молодняка, начальной стадии миелолейкоза, отравлениях солями ртути и свинца, лизолом и др.; 4) нейтрофилия с гипопластическим (дегенеративным) сдвигом ядра вправо характеризуется увеличением содержания сегментоядерных нейтрофилов без увеличения процента незрелых клеток. При этом появляются измененные формы нейтрофилов с сильной сегментацией ядра, оно может быть представлено даже отдельными округлыми частями без связи между собой. В цитоплазме появляются вакуоли, изменяется размер клеток (чаще увеличение). Вакуолизация цитоплазмы и ядра, наличие патологической (токсической) зернистости отмечается при тяжело протекающих инфекционных и незаразных заболеваниях с ярко выраженной интоксикацией организма, отравлениях, заболеваниях органов кроветворения, лучевой болезни.
Уменьшение количества нейтрофилов свидетельствует об угнетении и истощении функции гранулопоэза, что может быть результатом алиментарной дистрофии, инфекционных заболеваний, радиационных поражений. Нейтропения также может отмечаться при длительном и бесконтрольном применении антибиотиков, сульфаниламидов, препаратов преднизолонового ряда в завышенных дозах. Смена нейтропении нейтрофилией, а лейкопении лейкоцитозом свидетельствует о возникновении осложнения болезни.
Лимфоциты по размеру могут быть малые (до 10 мкм), средние (10-14 мкм) и большие (15-25 мкм). Они имеют круглое ядро темно-фиолетового цвета. Цитоплазма обычно слабо-голубого цвета, вокруг ядра имеет зону просветления (перинуклеарная зона). У здоровых животных в периферической крови преобладают малые лимфоциты, а средние и большие составляют не более 5-6%.
Лимфоцитоз может быть физиологический (физическая нагрузка, ультрафиолетовое облучение, после приема корма моногастричными животными и др.) и патологический. Последний отмечается при скрытых, латентно протекающих заболеваниях без лихорадки, энцефаломиелите, классической чуме свиней, пироплазмозе, алиментарной дистрофии, анемии. Лимфоцитоз на фоне уменьшения количества эритроцитов отмечается при усилении интоксикации организма. Лимфоцитоз же с одновременным возрастанием количества эозинофилов и моноцитов при снижении числа нейтрофилов, считается благоприятным признаком.
При лейкозе, особенно лимфолейкозе, в крови появляются незрелые лимфоциты (лимфобласты, пролимфоциты). Тяжелые патологические процессы сопровождаются появлением патологических форм лимфоцитов. Они имеют большие размеры, цитоплазму серого цвета, ядро разнообразной формы, рыхлой структуры, часто в стадии деления.
Лимфопения нередко сопровождается значительной нейтрофилией, что характерно для ряда инфекционных, гнойных и септических процессов в организме. Резкая лимфопения с абсолютной нейтропенией возникает при значительном воздействии на животное ионизирующей радиации (лучевая болезнь). Прогрессирующая лимфопения с лейкопенией является неблагоприятным, даже угрожающим признаком. Смена лимфопении на лимфоцитоз указывает на наступление выздоровления.
Моноциты являются самыми крупными клетками периферической крови (15-25 мкм), округлой или нередко неправильной формы. Ядро разнообразной формы – в виде подковы, бабочки, трилистника, бобовидное, неравномерно окрашивается в слабо-фиолетовый цвет с темно-фиолетовыми пятнами. Цитоплазма серо-дымчатого или голубовато-серого цвета.
Увеличение содержания моноцитов (моноцитоз) часто свидетельствует о развитии иммунных процессов в организме. Наблюдается при инфекционных и инвазионных заболеваниях у животных в стадию выздоровления (затухание инфекционного процесса – моноцитарная защитная фаза). Резкий моноцитоз отмечается при лучевой болезни, лучевых ожогах, при моноцитарном лейкозе. Моноцитопения вплоть до отсутствия в периферической крови моноцитов в сочетании с нейтрофилией бывает при острых и тяжелых септических заболеваниях в разгар болезни, является неблагоприятным симптомом.