Тема: Микробиологическая диагностика хеликобактерной инфекции.
Цель: На основе знаний биологии хеликобактера, особенностей его взаимодействия с макроорганизмом уметь обосновать тактику микробиологической диагностики, профилактику и терапию, вызываемых им заболеваний.
Знать:
1. Классификацию, морфо-биологические особенности хеликобактера.
3. Особенности экологии, эпидемиологии, патогенеза и иммунитета хеликобактерной инфекции.
4. Материал и методы микробиологической диагностики хеликобактерной инфекции.
5. Профилактику хеликобактерной инфекции.
6. Этиотропную терапию хеликобактерной инфекции.
Уметь:
1.Провести микробиологическое исследование биоптатов слизистой оболочки желудка (СОЖ) с целью диагностики хеликобактерной инфекции.
Контрольные вопросы:
1. Классификация и морфо-биологические особенности хеликобактера.
2. Экология, источники, пути распространения, особенности патогенеза и иммунитета при заболеваниях, вызываемых хеликобактером.
3. Материал и методы микробиологической диагностики заболеваний, вызываемых хеликобактером.
4. Профилактика, основы патогенетической терапии заболеваний, вызываемых хеликобактером.
Задания, выполняемые в ходе занятия (УИРС):
1. Провести исследование биоптатов СОЖ больных с язвенной болезнью желудка, для чего:
1.1. Промикроскопировать мазки-отпечатки, окрашенные по Граму.
1.2. Учесть результаты определения уреазной активности.
Дать заключение на основании полученных результатов.
2. Ознакомиться с газогенераторными пакетами, используемыми для культивирования возбудителя хеликобактерной инфекции.
Методические указания к выполнению исследовательского задания:
1. Проведите микроскопическое исследование и определение уреазной активности биоптатов СОЖ с целью диагностики хеликобактерной инфекции.
Для исследования используют мазки-отпечатки биоптатов антрального отдела СОЖ, взятые при гастроскопии. Биоптат берется из мест с максимально выраженной гиперемией и отеком. Мазки окрашиваются по Граму. Бактерии располагаются в слизи, имеют характерную морфологию - спиралевидную или S-образную форму, напоминающую «крылья чайки».
Выделяют 3 степени обсемененности H. pylori:
- слабую (+) – до 20 микробных тел в поле зрения;
- среднюю (++) – до 50 микробных тел в поле зрения;
- высокую (+++) – более 50 микробных тел в поле зрения.
Уреазный тест основан на способности H. pylori продуцировать уреазу в условиях желудка в таких количествах, что она накапливается в его слизистой оболочке (СО). Набор для определения уреазы содержит: мочевину, бактериостатический агент и индикатор рН фенол-рот, меняющий цвет с желтого на малиновый при сдвиге рН в щелочную сторону. Биоптат СОЖ помещают в среду набора и учитывают результаты через 1-2-3 часа и окончательно через 24 часа по изменению цвета индикатора. Время появления малинового цвета косвенно указывает на количество микроорганизмов:
- + - незначительная инфицированность (малиновое окрашивание к концу суток);
- ++ - умеренная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 2-х часов);
- +++ - значительная инфицированность (малиновое окрашивание в течение 1-го часа);
- - отрицательный результат (малинового окрашивания нет).
Положительные результаты микроскопического исследования биоптатов и определения их уреазной активности позволяют сделать заключение о наличии хеликобактерной инфекции.
Хеликобактер является микроаэрофилом и капнофилом, требовательным к питательным средам, культивирование которых осуществляется на специальных средах (кровяном агаре на основе колумбийского агара, шоколадном агаре, Pylori-агаре и др.) в атмосфере, содержащей 80-85% N2, 5-6% O2, 8-10% CO2 при влажности 95%. Для получения газовой смеси указанного состава используются газогенераторные пакеты, в частности, фирмы bio Merieux.
Время инкубации: первичное обследование – 7 дней, при контроле лечения – 14 дней. При получении характерных колоний для идентификации H. pylori используют:
- мазок, окрашенный по Граму (H. pylori-грамотрицательные извитые палочки);
- фазово-контрастную микроскопию (H. pylori активно подвижен);
- биохимические тесты: уреазный, оксидазный, каталазный (все 3 теста положительные).
Для идентификации полученных культур с учетом биохимических свойств используются АРI-системы (bio Merieux, Франция).
Условиями эффективности бактериологического метода диагностики являются:
- соблюдение правил забора исследуемого материала;
- соблюдение правил транспортировки исследуемого материала;
- соблюдение правил культивирования H. pylori.
Бактериологический метод в силу своей высокой стоимости не используется сегодня в большинстве лечебных учреждений.
2. Ознакомьтесь с газогенераторными пакетами, используемыми для культивирования возбудителя хеликобактерной инфекции.
Вопросы для самоконтроля:
1. Назовите свойства H. pylori, позволяющиеему колонизировать СОЖ и охарактеризуйте механизм их действия.
2. Обоснуйте выбор питательных сред, используемых при исследовании на хеликобактерную инфекцию.
3. Назовите исследуемый материал при микробиологической диагностике заболеваний, вызываемых хеликобактером.
4. Назовите заболевания, вызываемые H. pylori.
5. Назовите особенности бактериологической диагностики хеликобактерной инфекции и с какими свойствами возбудителя это связано.
6. Назовите инвазивные и неинвазивные методы микробиологической диагностики хеликобактерной инфекции; их суть.
7. Обоснуйте тактику неспецифической профилактики хеликобактерной инфекции.
8. Обоснуйте тактику терапии хеликобактерной инфекции.
Литература:
Учебники:
1. Борисов Л. Б Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. - М.: ООО «МИА», 2002.- С. 412-414.
2. Медицинская микробиология /Гл. ред. В.И. Покровский, О.К. Поздеев. - М.: ГЭОТАР Медицина, 1998. – С. 459-462.
3. Поздеев О.К Медицинская микробиология /Под. ред. акад. РАМН В.И. Покровского. –М.: ГЭОТАР Медицина, 2001. – С. 387-391.
Лекции по микробиологии.
Тесты программированного контроля 2004г.