Студентті зіндік жмысы
Талсырма 1 Агглютинация реакциясын ою (ингредиенттерді тексеру)
| Зер ттеу кн і | Масаты | олданылган ингредиенттер | Зерттеу барысы | орытынды |
| Ингреди нттерді манызын зерттеу | N1 антисары су (гомологиялы) N2 антисары су (гетерологиялы) 3.физ.ертінді 4. физ. ертіндісін -дегі бактериялар оспасы | Сабакты басында ш пробиркада тжірибе ою, келесі схема бойынша: | ||
| Ингредиенттер | Пробиркалар | |||
| Антисары су N1. | 1мл | |||
| Антисары су N2. | 1мл | |||
| Физ.ертінді | 1 мл | |||
| Бактер. оспасы | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Пробиркаларды термостатта 2 саата 37°С сактайды, орытындысын сабаты аяында тексереді.
Тапсырма 2. Бліп алан микроба идентификациясын жасау шін шыныда агглютинация реакциясын кою тжірибиесі.
| Зертгеу кн | Масаты | Ингредиент | Зерттеу барысы | орытынды |
| Бліп алынган дакылда микробты турін анытау | Бліп алынан даыл | Шыныга агглютинацияланатын диагностикалы сары суын жне физ. ерітідісін бір тамшыдан тамызады (баыла-контроль). р бір тамшыа бактериялы іл-мекпен зерттейтін даылды егізу, 2-3 мин кейін ай оспада агглютинация болды екенін баылайды. Баылау - контроль оспада тек ана жеіл гомогенді лайлану байалады. Тжірибеде тйіршіктер круге болады. |
Ескерту: Иммунды сары су тамшысы бар бактериялы ілмекті физ.ертіндісіне осуа болмайды. Микробтарды жабысуы тжірибені бірінші минутынан бастап крінеді, шыныны сл айналдыранда оспада тйіршіктер пайда бола бастайды, лкейіп тамшыны шетіне шыады. Баылау оспасында біркелкі гомогенді лайлану байалады. Тжірибені орытындысыны суретін альбома салу керек.
Тікелей емес (пассивті) гемагглютинадия реакциясы (ТЕГР)
Бл реакция — агглютинация реакциясыны бір трі, негізгі принципі -эритроциттер з беткейіне ертінді антигендер жне гаптендерді жабыстыра (адсорбция) алатын абілеті (бактерияларды, вирустарды жне т.б. микроорганизмдерді). Осы жадайда эритроциттер жаа серологиялы арнайы абілетке ие болады, сондытан иммунды сары сулармен, гомологиялы адсорбцияланан антигендермен агглютинация реакциясына атысады. Осындай эритроциттерді сенсибилизацияланан эритроциттер, эритроцитарлы диагаостикум деп атайды. Сенсибилизацияланан эритроциттерді алу шін эритроциттерді алдын-ала танинмен 1:20000 ертіндіде дейді, бл жадайда оларды адсорбцияланатын абілеті (жабысу) жоарлайды. Реакцияны полистеролды плашнетаа немесе пробиркада жасайды. Тексерілетін ан сары суындаы комплементтен ажырату шін алдын ала 58°С 30 мин ыздырады. Сосын сары судан ертінді атарын дайындайды 1:10-нан 1:12000-ге дейін жне одан жоары, 0.5 мл пробиркалара немесе планшета лункаларына яды. р сары су ертіндісіне 0.1 мл эритроцитарлы диагностикум осады. Реакцияны блме температурасында 2 саат стайды немесе термостатта. орытындысы о + - егер пробирка немесе лунка тбіндегі эритроциттер тнбасыны шеттері иректелген - ол шатыр теріздес. Реакцияны орытындысы теріс - жадайда эритроциттер тнбасы біркелкі тбіне тседі, тйме тріздес.
Тапсырма 3. ТЕГР (РПГА) ою тжірибесі (ауру адамны микроба арсы антидснелерін табу шін). Серодиагностика.
| Зерітеу кні | Масаты | Зерттелетін материал | Зерттеу барысы | орытынды |
| Ауру адамны сары суында антиденелерді титрі жоарлауын анытау | І.Ауру адамны сары суы 8 тулікте 1:50 2.Ауру адамны сары суы 15 тулікте 1:50 | ТЕГР ою. |
ТЕГР-ны ою схемасы (Видаль реакциясы - іш сзекті диагностикасы)
| Ингредиенттер | Пробиркалар номері жне ертінділері | |||||
| 1:50 | 1:100 | 1:200 | 1:400 | 1:800 | к | |
| 1.Сары су (1:50) ауруды 8 немесе 15 тулігіндегі | 1.0 | 1.0 йып тастау | ||||
| 2.Физ.ертінді | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| 3. Эритроцитарлы диагностикум | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
Ескерту: бірінші пробиркадан 1,0 мл екіншіге апару, 2-ші пробиркадан 3-ге, 3-ші пробиркадан - 4-ге, 5-ден 1,0 мл дез.ертіндісіне йып тастау. Диагностикумны 0,1 мл-ден рбір пробиркаа енгізу, 2 саата термостата ою немесе блмеде сатау. орытындысын 2 сааттан кейін жргізеді.
ТЕГР-ны есептеу, альбома сурет салу, зерттеген сары суды титрін анытау.
Коагглютинация реакциясы.
Бл реакция - агглютинация реакциясыны бір трі: стафилококкты А—белогы иммуноглобулиндерді IgG тобы молекуланы с-фрагментімен спецификалы емес байланысуа абілетті. Коагглютинация реакциясын ою шін стафилококкты Cowan—1 штаммын олданылады (осыдан дісті атауы - Co—(Ко-)-агглютинация.
Коагглютинация реакциясьгн екі вариантта олданылады:
1. р трлі биологиялы сйытытарда патогенді микроорганизмдерді антигендерін табу шін (несепте т.б.) Бл шін антиденелік Ко—диагностикум дайындайды: - стафилококк жасушаларыны стінде белгілі спецификалы IgG-ді адсорбциялайды (жабыстырады). Зерттейтін ралда антиген (Аг) бар болса егізген Ко— диагностикумымен тез арада агглютинация болады.
б) антигені бар зерттеу рала осу.
Осындай вариант ккжтел, менингококты инфекцияларды жне т. б. тез арада анытауын ою шін олданылады.
2. Созылмалы бактериялы инфекцияларды анытау шін.
Созылмалы инфекцияларды оздырыштары з беткейінде спецификалы антиденелерді тасымалдайды, сондытан олар стафилококк Cowan-1 штаммымен агглютинация реакциясын беруі ммкіндігі бар. Мысалы, пиелонефрит ауруында р трлі шартты-патогенді бактериялар блінеді (E.coli, P.aeruginosa, эпидермальды стафилоккк жне т.б.).
Шыарып алынан даыл Cowan-1 штаммымен агглютинация берсе, бл созылмалы инфекция деп есептелінеді.
Кумбс реакциясы (антиглобулинді реакция)
Бл реакцияны рамында 1 ана белсенді орталыы бар жне антигенні бір детерминантты тобымен байланысатын толы емес (моновалентті, тежеуші) антиденені анытау шін олданады. Сондытан да пайда болан антиген-антидене комплексі микроагрегат, тнба тзбейді, лайланбайды жне баса да згерістерге шырамайды. Ал Кумбс реакциясы нтижені кзбен арап-а баалауа ммкіндік береді. Диагностика шін: резус-келіспеушілікте, бруцеллезде, аутоиммунды ауруларда (ызыл брі ауруы, полиартрит) олданады.
Масаты: Жкті йелді зерттелетін сары су рамында, резус-антигенге арсы толы емес антиденені анытау шін. Ингредиенттері: зерттелетін сары су, оянны антиглобулинді сарысуы (АГС), рамында резус-антигені бар эритроцит. АГС-ті оянды адамны глобулиндерімен иммунизациялау жолы арылы дайындайды. АГС-ті рамында адамны ртурлі глобулиндеріне арсы толы, бивалентті антиденелер бар.
Техникасы жне нтижесі:
Зерттелетін сарысуа резус-антигені бар эритроцит осылады. 1 саат инкубациядан кейін АГС-ті енгізеді. Реакция нтижелі болса, гемагглютинация байалады.
Преципитация реакциясы
Преципитация реакциясы электролит атысуында спецификалы
антиденелермен (преципитиндермен) са бытыраулы (мелкодисперсные)
антигендерді (преципитогендерді) тндыру. Ертілмейтін антиген + анти-дене тнба жнінде комплексті тндырылуы тек ана ингредиенттерді баламалы ара атысында байалады. Преципитиноген млдір коллоидты ертінді болу керек. Преципитация реакциясы антиденелер стайтын белгілі преципитациялайтын сары су бойынша антигендерді анытау шін олданылады; сары суды жануарларды белгілі антигенмен иммунизация жасап алады.
а) Кольцепреципитация реакциясын ою шін пробиркалара (диаметрі 0.5 см) 0,1 мл диагностикалы сары суын р трлі антигендерге арсы яды, сосын оны стіне Пастер пипеткасымен пробирканы абырасымен зерттейтін ралды абаттайды. Реакцияны 1-2 минуттан кейін есептейді. Реакцияны орытындысы о болса - сары суды жне зерттейтін ралды арасында а саина сияты преципитат пайда болады. Баылау (контроль) пробиркада болмау керек.
б) Гельдегі преципитация реакциясы: антиген жне антидене гельде байланысып, преципитат пайдалынады. Преципитат гельде а тсті сызы болып келеді.
ою техникасыны бойынша преципитация реакциясыны екі трін ажыратады:
1. арапайым диффузия дісі: иммунды сары су осылан бір абатты агарды гель дайындайды жнеосы абатта істелінген шыра антиген егізіледі.
2. Оухтерлони бойынша екі абатты диффузия дісі: антигендер жне антиденелер агарды гельді р трлі шырларына егізеді, олар диффундирлеп кездеседі, преципитат сызытары пайда болады. Осы реакцияны ою шін шыныларды млдір агарымен йып егізеді, бл агарда сосын аралары бірдей шырлар жасайды.
3.
