Иммунды ферментті анализ, ИФА

Зертгелетін материалды рамындаы микробты антигенін немесе сарысуындаы антиденелерді анытауа ммкіндік беретін - бл атты фазалы иммунды ферментті анализ (атты фазалы иммунды сорбентті анализ).

Тапсырма 3.

Микробтарды антигендерін ИФА бойынша анытау

Ингредиенттері: полистиролды планшеттерді ойытарына бекітілген белгілі антиденелер; рамында микробты антигені бар зерттелетін материал; зерттелетін микробты антигеніне пероксидазамен (П_х) белгіленген специфихалы антиденелер; ортофенилендиамин (О_ф, бл тссіз сйы хромоген, біра пероксидазамен байланысса оныр тсі пайда болады).

Полистиролды пробиркаларды абырасына белгілі антигенге арсы антиденелерді (антидене арсы антитенді) жабыстырады, зерттеуге арналан затты енгізеді, 30-40 мин 37°С инкубацияланады. Детергент осылан арнайы буферлы ертіндімен ойытар шайылады.

Техникасы, кезендері: 1. Белгілі антиденелер бекітілген полистиролды планшеттін ойытарына микробты антигені бар зерттелетін материал енгізіледі. 30-40 мин. 37°С инкубацияланады. Детергент осылган арнайы буферлы ертіндімен ойытар шайылады.

2. Пероксидазамен белгіленген антиденелер ойытара енгізіледі. 30-40 мин 37°С инкубацияланады. Детергент осылан арнайы буферлы ертіндімен ойытар шайылады.

3. Ортофенилендиамин осыланнан кейін планшеттер блмені араны орында 20 мин. сталады. атты фазалы ИФА нтижесі спектрофотометр Мультискан арылы есептеледі.

Нтижелері: зерттелетін материалды рамында микробты антигендері боланда олар ойытарды тбіндегі антиденелермен байланысады. Пх белгіленген антигендерімен байланысады. At + Ag - Пх комплексі тзіледі. Аыры кезенде ойытара енгізілген Оф Пх-мен байланысып оыр тсті болады. Бл нтижелі реакция.

Егер зерттелетін материалда микробты антигендері болмаса, онда буфермен шайаннан кейін ойытарды тбінде тек ана белгілі антиденелер орналасады. Содан кейін енгізген Пх-мен белгіленген антиденелерде ойытардан буфермен шайылып кетеді. Реакцияны аяында Оф тссіз боп алады. Бл нтижесіз реакция.

б) Спецификалы антиденелерді анытау

Ингредиенттер: полистиролды планшеттерді ойытарына бекітілген белгілі микробты антигендер; зерттелетін сарысу; пероксидазамен бекітілген белгілі микробты глобулинге арсы сарысу; ортофенилендиамин.

ИФА ою техникасы, кезендері: 1. Белгілі микробты антигендері бекітілген полистиролды планшетті ойытарына зерттелетін сарысу егізіледі. 30-40 мин. 37°С инкубацияланады. Детергент осылан арнайы буферлы ертіндімен ойытар шайылады.

Пероксидазамен белгіленген АГС ойытара енгізіледі. 37°С 30-40 мин. инкубацияланады. Детергент осылан арнайы буферлы ертіндімеи ойытар шайылады.

3. Ортофенилендиамин осыланнан кейін планшеттер блмені араы орында 20 мин. сталады.

4. атты фазалы ИФА нтижесі спектрофотометр Мультискан арылы есептеледі

Нтижелері: зерттелетін сарысудын рамында антиденелер боланда ойытарды тбіндегі антигендермен байланысады жне буферлы ертіндімен шайылып кетпейді. Содан кейін енгізілген АГС - Пх ойытарды тбінде алады. Ag + At + АГС - Пх комплексі тзіледі. Енгізілген Оф Пх-мен байланысып оыр тсті болады. Бл нтижелі реакция.

Егер зерттелетін сарысуды рамында антиденелер болмаса, онда ойытарды тбінде тек ана алдын ала бекітілген микробты антигені алады. Содан кейін енгізілген АГС - Пх буферлы ертіндімен шайылып кетеді, ал Оф тссіз боп алады. Бл нтижесіз реакция.

Радиоиммунды анализ, РИА

Зерттелетін материалды рамындаы антигенді, сондай-а сарысуды рамындаы антиденелерді анытауа баытталан зерттеу дісі.

РИА ткізу шін антиген немесе антидене радиоизотоппен танбаланады жне полистиролды планшеттін ойытарыны тбіне бекітіледі.

Микробты антигенін анытау шін ойытарды тбіне изотоппен табаланан антиделер бекітіледі. Содан со бекілген антиденелерге рамында микробты антигені бар зерттелетін материал осылады. Антиген-антидене комплексі тзілгеннен кейін ойытара изотоппен табаланан микробты антигені осылады. Табаланан микробты антиген тек ана алдында енгізілген антигенмен байланысаннан кейін алан антиденелерді активті орталытарымен осылады. Ойытарды тбінде алан антигенні пайзын немесе изотопты млшерін есептеу арылы дісті нтижесі бааланады.

Таырыбы: Жпалы ауруларды иммунопрофилактикасы жне иммунотерапиясы. Иммунопатология (Иммунодефицитті жадай, жоары сезімталды реакциясы, аутоиммунды процестер).