Серологические исследования
Предложено большое количество различных реакций, выявляющих Аг микобактерий и AT к ним, например РСК, РА, РПГА по Бойдену, агрегатагглютинации и др.; однако они либо не обладают необходимой специфичностью, либо требуют дифференциальной диагностики при получении ложноположительных реакций с Аг и AT к другим микобактериям.
Кожные пробы с туберкулином
Имеют особую значимость, т.к. позволяют проводить широкомасштабные скрининговые обследования населения; метод включает внесение небольших доз ППД-Л (новый туберкулин Коха) в кожные насечки (реакция Пирке), внутрикожно (реакция Манту) и подкожно (реакция Коха). При положительном результате через 48 ч в месте введения формируется папула диаметром 10 мм с гиперемированными краями.
Таблица 1. Основные дифференциально-диагностические морфологические и ростовые характеристики микобактерий
| Вид | Колонии | Рост | ||
| Морфология | Пигмент* | Скорость** | Температура | |
| М. tuberculosis | R-колонии | Н (кремовые) | Медленная | 31-37 |
| М. bovis | Мелкие, прозрачные R-колонии | Н (бесцветные или кремовые) | Медленная | |
| М. africanum | R-колонии | Н | Медленная | |
| М. aviumintracellulare | Мелкие, выпуклые, мутные S-колонии, реже R-диссоциаты | Н (иногда окрашены) | Медленная (более 8 нед) | 37 (оптимум): растет от 25 до 45 |
| М. scrofulaceum | Круглые S-колонии | С (желто-оранжевые) | Медленная | 25-37 |
| М. kansasii | R-колонии, содержат кристаллы b-каротина | Ф (редко Н или С) | Медленная | 25-37 |
| М. fortuitumcheloneae | S- и R-колонии | Н(кремовые) | Быстрая | 25-40 |
| М. xenopi | S-колонии с выростами | Н(С) | Медленная | 42-43 (оптимум) |
| М. szulgai | S- и R-колонии | С (37°С); Ф(25°С) | Медленная | 25-37 |
| М. malmoense | S-колонии | Бесцветные | Умеренная | 25-37 |
| M. simiae | S-колонии | Ф (при дли тельной экспозиции) | Медленная | |
| М. marinum | Неровные, блестящие S-колонии; реже R-диссоциаты | Ф | Умеренная | 31-33 (оптимум) |
| М. haemophilum | R-колонии; реже S-диссоциаты | Н | Медленная | 20-32 (оптимум) |
| М. gordonae | S-колонии | С, оранжевые | Медленная | 25-37 |
| М. asiaticum | ? | Ф | Медленная | 25-37 |
| М. thermoresistible | Чаще S-колонии; реже R-диссоциаты | Ф (желто-оранжевые, позднее коричневые) | Быстрая | 37-45 (оптимум) |
| М. terratriviale | S- (М. terra) и R- (М. triviale) колонии | Н | Медленная | 25-37 |
| М. nonchromogenicum | R-колонии | Н | Медленная | 25-37 |
| М. flavescens | S-колонии | С | Умеренная | 25-37 |
| М. smegmatis | ЧащеR-колонии; реже S-диссоциаты | Н (кремовые) | Быстрая | 25-45 |
| М. shimoidei | R-колонии | Н | Медленная |
* Н — нефотохромогенные; С — скотохромогенные; Ф — фотохромогенные.
** Скорость роста на твердых средах: медленная — рост в течение 4-6 недель; умеренная — рост в течение 2-3 недель; быстрая — в течение 5-7 суток.
Рисунок 10. Принципиальная схема бактериологического выделения возбудителей туберкулеза
Mycobacterium bovis
Возбудитель туберкулеза крупного рогатого скота, вызывает 5% случаев туберкулеза у человека. Морфологические отличия от Mycobacterium tuberculosis не выражены, микобактерии бычьего типа несколько короче, с менее выраженной склонностью к ветвлению. Культуральные свойства также сходны; однако на искусственных средах растут медленно и только при температуре 37°С, в глицерине не нуждаются. В первичных культурах и на средах, не содержащих пируват, отмечают скудный рост; колонии мелкие, плоские, шероховатые. Принципы выделения аналогичны таковым для микобактерий человеческого типа (рис. 21). Основными методами дифференциальной диагностики с Mycobacterium tuberculosis считают ниациновый тест и биологическую пробу на кроликах (кролики резистентны к заражению М. tuberculosis). Возбудитель — рекордсмен по числу возможных хозяев и выявлен у 60 видов млекопитающих, но эпидемическую опасность для человека представляют крупный рогатый скот (наибольшее значение), верблюды, козы, овцы, свиньи, собаки и кошки. Больные животные выделяют микобактерии с молоком, мокротой, мочой и калом: человек заражается при контактах с больным животным или при употреблении сырого молока, или (реже) плохо обработанного мяса. В сливочном масле возбудитель может сохраняться до 240 суток, в сыре — до 200 суток.
Мycobacterium avium
Возбудитель туберкулеза птиц. Бактериальные клетки тонкие, от коротких до длинных, иногда ветвятся. Оптимум температуры 38-41°С, рН 6,8-7,3. На питательных средах растет быстрее (10-20 дней), чем М. bovis и M. tuberculosis.
На плотных яичных средах растет в виде гладкого маслянистого налета. Колонии округлые, слизистые, мягкие, серовато-белые, с возрастом могут желтеть. Могут иметь пуговицеобразное возвышение с кратерообразным углублением. При первичной изоляции из патологического материала колонии плоские и полупрозрачные. Бактериальная масса легко суспендируется в физиологическом растворе. В жидких питательных средах возбудитель дает диффузный рост, на поверхности формируется влажная жирная пленка, на дне рыхлый осадок. Вид антигенно неоднороден. Дифференцируют три серовара. Серовар 2 отличается большой патогенностью для кур.
Кроме больных птиц, может быть изолирован из лимфатических узлов и пораженных тканей крупного рогатого скота, свиней и других животных. В эксперименте при внутривенном заражении кур обусловливает заболевание с летальным исходом в течение месяца, реже позднее. На вскрытии у павших кур обнаруживают очаги в печени и селезенке. У зараженных внутривенно кроликов развивается септический процесс, и они гибнут на 11-30-е сутки. После подкожного заражения у морских свинок наблюдают изменения (абсцесс) на месте инъекции.
В соответствии с «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (1986) бактериологическое исследование предусматривает микроскопическое исследование препаратов, окрашенных по методу Циля-Нельсена, люминесцентную микроскопию, выделение культуры посевом материала на стерильные питательные среды (Петраньяни, Гельберга, Левенштейна-Иенсена). Выделенные культуры идентифицируют с учетом скорости появления первичного роста, культурально-морфологических и тинкториальных свойств, способности к росту при различных температурных режимах (20-25, 37-38, 45°С) на разных питательных средах (яичные, яичные с салицилатом натрия, МПБ). Проводят биопробу с целью обнаружения возбудителя в испытуемом материале или определения видовой принадлежности выделенной культуры микобактерий. Вид подопытного животного определяется целью исследования (морские свинки, куры, кролики).