Добавьте в каждую пробирку цветной индикатор (Enzyme Color Reagent)
8. Нажмите «Incubate» для начала инкубации содержимого пробирок.
9. Открыть шторку спектрофотометра справа – нажмите «Set Up».
10. Переместите первую пробирку в держатель спектрофотометра и нажмите кнопку «Analise». На экране появится красная точка, показывающая концентрацию глюкозы в первой пробирке. Зарегистрируйте результат в таблице, нажав Record Data
11. Перенесите пробирку из спектрофотометра в контейнер для тары слева (Test Tube Washer).
12. Повторите измерения концентрации раствора в остальных пробирках. Не забывайте после окончания каждого измерения выбрасывать пробирку в контейнер и нажимать «Record Data».
13. Запишите результаты в протокол и постройте калибровочную кривую, нажав кнопку «Graph» под экраном спектрофотометра
Рисунок 33. Оборудование для измерения концентрации глюкозы в крови.
Программа «Инсулин и диабет. Часть 2.
Часть 2.
В верней части экрана выбираем Experimentи затемInsulin and diabetes – Part II.Появится оборудование для измерения концентрации глюкозы в крови. В этой модели, кроме спектрофотометра, контейнера для пробирок и штатива, имеются клетки с экспериментальными животными и шприцы с различными веществами (инсулин, физраствор, аллоксан), которые Вы будете вводить крысам.
Алгоритм действий:
1. Выберите с помощью мышки шприц с физиологическим раствором (Saline) и сделайте инъекцию контрольной крысе. Заберите пробирку из контейнера и перенесите ее к основанию хвоста контрольного животного для забора крови. Затем пометите пробирку с кровью в первую лунку штатива.
2. Выберите с помощью мышки шприц с аллоксаном (Alloxan), который блокирует выделение инсулина бета-клетками поджелудочной железы, и сделайте инъекцию экспериментальной крысе. Заберите пробирку из контейнера и перенесите ее к основанию хвоста экспериментального животного для забора крови. Затем пометите пробирку с кровью во вторую лунку штатива.
3. Сделайте инъекции инсулина (Insulin)обеим крысам и заберите их кровь так же, как и раньше. Пробирки с кровью пометите в 3-ю ( контроль) и 4-ю (опыт) лунки штатива.
4. Нажмите (Obtain reagents) для перехода к процедуре анализа. Клетки с животными исчезнут, вместо них появятся необходимые растворы.
5. Добавьте в каждую пробирку дистиллированную воду (Deionized wather), гидроксид бария (Barium hydroxide) и гепарин (Heparin).
6. Нажмите Mixдля перемешивания раствора в пробирках.
7.Нажмите Centrifugeдля центрифугирования содержимого пробирок.
8.НажмитеRemuve Pelletдля удаления осадка.
9.Добавьте цветного индикатора (Enzyme Color Reagent)
10. Нажмите Incubate для начала инкубации содержимого пробирок.
11. Открыть шторку спектрофотометра справа – нажмите Set Up.
12. Нажмите «Graph Glucose Standard»под экраном спектрофотометра для появления калибровочной кривой.
13. Переместите первую пробирку в держатель спектрофотометра и нажмите кнопку «Analise». На экране появится горизонтальная линия, показывающая показатель экстинции прибора. С помощью мышки переместите вертикальную линию в точку пересечения горизонтали с калибровочной кривой. Эта точка соответствует концентрации глюкозы в первой пробирке. Зарегистрируйте результат в таблице, нажав Record Data
14. Перенесите пробирку из спектрофотометра в контейнер для тары слева (Test Tube Washer).
15. Повторите измерения концентрации раствора в остальных пробирках (как в пункте 13). Не забывайте после окончания каждого измерения выбрасывать пробирку в контейнер и нажимать Record Data.
16. Запишите результаты в протокол и сделайте выводы.
Раздел 7. МОЧЕОБРАЗОВАНИЕ
Работа 1. ФАКТОРЫ, ВЛИЯЮЩИЕ НА ОБРАЗОВАНИЕ МОЧИ.
Диурез (процесс образования мочи в почке) является результатом трех процессов: клубочковой фильтрации, канальцевой реабсорбции и канальцевой секреции.
Клубочковая фильтрация представляет собой перенос воды и веществ с низкой молекулярной массой из плазмы, протекающей через клубочковые капилляры крови в капсулу клубочка. На этот процесс оказывают влияние: площадь фильтрационной поверхности мембраны клубочков, давление в капиллярах клубочков и коэффициент клубочковой фильтрации.
Фильтрационное давление в капиллярной сети (Pf) является результатом взаимодействия гидростатического давления крови в капилляра (Pb = 70 mm Hg), онкотического давления крови (Po = 25 mm Hg), внутрикапсульного тканевого давления (Pi = 5 mm Hg), и вычисляется по формуле:
Pf = Pb - (Po + Pi)
Коэффициент клубочковой фильтрации составляет примерно 20% всего сердечного выброса, и его величина зависит от расширения или сужения приносящих клубочковых артериол.
Цель: продемонстрировать влияние коэффициента клубочковой фильтрации, гидростатического давления крови и онкотического кровяного давления на интенсивность образования мочи.
На модели нефрона (рис. 1) вы можете изменять радиус как выносящей, так и приносящей артериолы клубочка почки, а также менять величину давления на входе в клубочек. Модель рассчитывает объем получаемой за время эксперимента мочи (Urine Volume), рассчитывает гломерулярное (фильтрационное) давление (Glomerular Pressure) и т.н. показатель фильтрации (Glomerular. Filtr. Rate)
Планируя эксперимент, исследуйте вклад каждого из факторов поочередно (сначала роль радиуса артериол, затем - роль давления и т.п). Для того, чтобы результаты были записаны в нужную ленту таблицы, перед запуском модели обозначайе название опыта (Data Set). Если вы меняете все показатели – опыт будет называться комбинированным (Combined)
Алгоритм действий:
1. По умолчанию в модели установлены следующие показатели: радиус приносящей артериолы – 0,50; радиус выносящей артериолы – 0, 45; давление на входе – 90 mm Hg; концентрационный градиент – 1200 mosm. Нажмите «Start» и дождитесь, когда вся кровь перетечет в приемный резервуар.
Рис. 34. Модель нефрона для изучения влияния различных факторов на фильтрационную функцию клубочка.
2. Затем зафиксируйте результаты в таблице внизу модели, нажав кнопку «Record Data».
3. Верните кровь в исходный резервуар с помощью кнопки«Refil».
4. Обозначьте название исследования– «Afferent»в блоке «Add data set»
5. Установите нужный Вам радиус афферентной и эфферентной артериол, нажимая на кнопки (+) или (-) на модельной установке и нажмите «Start».Когда вся кровь перетечет в приемный резервуар, зарегистрируйте результат и верните кровь в исходный резервуар (Refil).
6. Обозначьте название исследования– «Pressure»в блоке «Add data set»
7. Измените давление на входе и повторите эксперимент. Не забывайте регистрировать его результаты и восстанавливать исходное состояние модели.
8. Обозначьте название исследования– «Combined»в блоке «Add data set»
9. Измените в нужную Вам сторону и величину давления, и радиус артериол и повторите эксперимент. Не забывайте регистрировать результаты в таблице.
10. Запишите все результаты в тетрадь (табл. 1) и сделайте необходимые выводы.
Работа 2. ВЛИЯНИЕ АЛЬДОСТЕРОНА И АНТИДИУРЕТИЧЕСКГО ГОРМОНА НА ОБРАЗОВАНИЕ МОЧИ.
Альдостерон – минералокортикоидный гормон, синтезируется в клубочковой зоне коры надпочечников. Выброс альдостерона в кровь контролируется ренин-ангиотензин-альдостероновой системой.Понижение давления в клубочковых артериолах провоцирует выделение из юкста-гломерулярными клетками почек протеолитического фермента ренина. Ренин превращает плазматический ангиотензиноген в ангиотензин I, который в дальнейшем под влиянием специального агниотензин-превращающего фермента переродит в ангиотензин II.Последний стимулирует синтез и выделение альдостерона из надпочечников и повышает тонус гладкой мускулатуры кровеносных сосудов, вызывая повышение АД..
Основными эффектами альдостерона являются:
- удержание ионов Na, Cl, и воды
- сокращение скорости образования мочи
- повышение кровяного давления
Антидиуретический гормон (АДГили вазопрессин) является нейрогормоном, который синтезируется в гипоталамусе и накапливается в задней доле гипофиза. Затем АДГ выделяется в кровоток, когда осморецепторы гипоталамуса воспринимают понижение кровяного осмотического давления, а барорецепторы аорты и сонной артерии воспринимают понижение кровяного давления.
Основными эффектами АДГ являются:
- удержание воды
-сокращение скорости образования мочи
- повышение кровяного давления.
На модели нефрона в этом виртуальном эксперименте Вы не сможете изменять величину фильтрации, но, вводя в систему альдостерон или антидиуретический гормон, вы будете влиять на процессы обратной реабсорбции воды и солей в собирательной трубочке нефрона.
Предусмотрена также возможность изменять реабсорбцию глюкозы из мочи в кровь (Glucose carriers).
Повышение уровня глюкоза в крови, характерное для сахарного диабета, приводит к тому, что она перестает абсорбироваться в канальцах и попадает в мочу; осмотическое давление в канальцах повышается, и вода задерживается в моче. Таким образом, чем больше реабсорбция, тем меньше глюкозы остается в моче, и тем меньше ее объем.
Кроме того, вы сможете, изменяя величину концентрационного градиента натрия, влиять на его концентрацию и осмотическое давление мочи. Накопление натрия в межклеточных пространствах почки меняет цвет фона, на котором изображен нефрон.
Рис. 35. Модель нефрона для изучения влияния гормонов и реабсорбции глюкозы на образование мочи.
Алгоритм действий:
1. В меню «Эксперимент» откройте программу «Simulating Urine Formation» (Симуляция образования мочи).
2. По умолчанию в модели установлены следующие показатели: концентрационный градиент – 300 mosm, транспорт глюкозы (carriers glucose) = 0.
3. Обозначьте название исследования– «Gradient»в блоке «Data sets»
4. Нажмите «Start» и дождитесь, когда вся кровь перетечет в приемный резервуар.
5. Затем зафиксируйте результаты в таблице внизу модели, нажав кнопку «Record Data».
6. Очистить резервуар с мочой с помощью кнопки«Dispense».
7. Измените величину концентрационного градиента и повторите шаги 3-6.
8. Обозначьте название исследования– «Glucose»в блоке «Data sets»,
9. Установите нужную Вам интенсивность обратного транспорта глюкозы в проксимальном извитом канальце нажимая на кнопки (+) или (-) в верхней части модельной установки и нажмите «Add carriers».
10. Нажмите «Start» и дождитесь, когда вся кровь перетечет в приемный резервуар. Зарегистрируйте результат и освободите резервуар с мочой (Dispense).
11. Повторите шаги 9-10 с другой величиной транспорта глюкозы.
12. Обозначьте название исследования– «Hormone»в блоке «Data sets».
13. С помощью пипетки введите в область собирательной трубочки нефрона альдострон (Aldosterone) и повторите эксперимент. Не забывайте регистрировать его результаты и восстанавливать исходное состояние модели.
14. С помощью пипетки введите в область собирательной трубочки нефрона антидиуретический гормон (ADH) и повторите эксперимент. Не забывайте регистрировать его результаты и восстанавливать исходное состояние модели.
15. Запишите все результаты в тетрадь (табл. и сделайте необходимые выводы.