Диференційно-діагностичні селективні середовища
Агар для ідентифікації лістерій (PALCAM) –
Listeria Identification Agar (PALCAM) (M1064)Поліміксин (Polymyxin) – Акрифлавін (Acriflavine) – Літій (Lithium-chloride) – Цефтазідім (Ceftazidime) Ескулін (Esculin) – Маніт (Mannitol) агар з добавкою FD061 рекомендований для виділення лістерій з харчових продуктів
| Склад: | грам/дм3 |
| Пептон Крохмаль Натрію хлорид Маніт Заліза амонійного цитрат Ескулін Глюкоза Літію хлорид Феноловий червоний Агар-агар Кінцеве значення рН ( при 250С) 7,0±0,2 | 23,00 1,00 5,00 10,00 0,50 0,80 0,50 15,00 0,08 13,00 |
Приготування.Розмішати 34,5 г порошку в 500 см3 дистильованої води. Прокип'ятити до повного розчинення середовища. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Охолодити до 500С і асептично додати розчинений в дистильованій воді вміст 1 флакона з Селективною добавкою для лістерій (PALCAM) (FD061). Ретельно перемішати і розлити середовище в стерильні чашки Петрі. Готове середовище має червоне забарвлення, прозоре, із злегка опалесцуючою поверхнею.
Принцип і оцінка результату.Середовище є високо селективним через наявність в ньому хлориду літію, цефтазідіму, поліміксину і акрифлавіну. PALCAM агар - диференційно-діагностичне середовище. Використовуються 2 індикаторні системи: ескулінова і манітна.
Listeria monocytogenes гідролізує ескулін на ескулетин і глюкозу. Реагуючи з цитратом заліза, ескулетин утворює коричнево-чорний комплекс, що приводить до потемніння середовища навкруги колоній. Лістерії не ферментують маніт, тому зброджуючі маніт ентерококи і стафілококи формують кольорові колонії (від червоного до жовтого). Мікроаерофільні умови обмежують ріст аеробів, наприклад, представників родів Bacillus і Pseudomonas.
Введення до складу середовища яєчного жовтка (2,5%) сприяє відновленню пошкоджених клітин. Додавання середовища з кров'ю поверх PALCAM агару дозволяє диференціювати і підрахувати кількість гемолітичних лістерій.
Залежно від типу аналізованого зразка перед висівом на PALCAM агар повинне бути проведено збагачення в різних бульйонах для селективного збагачення.
Основа Оксфордського середовища для лістерій –
Listeria Oxford Medium Base (M1145)
Рекомендовано для виділення Listeria monocytogenes з клінічного матеріалу і зразків харчових продуктів.
| Склад: | грам/дм3 |
| Пептон спеціальний Літію хлорид Крохмаль кукурудзяний Ескулін Заліза амонійного цитрат Агар-агар Кінцеве значення рН ( при 250С) 7,0±0,2 | 23,00 15,00 1,00 1,00 0,50 10,00 |
Приготування.Розмішати 27,75 г порошку в 500 см3 дистильованої води. Прокип'ятити до повного розчинення середовища. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Охолодити до 500С і асептично додати розчинений в 5 см3 50%-го етанолу вміст 1 флакона з селективною добавкою для виділення лістерій (FD172). Ретельно перемішати і розлити середовище в стерильні чашки Петрі. Готове середовище має темно-бурштинове забарвлення з блакитним відблиском.
Принцип і оцінка результату.Хлорид літію і антибіотики пригнічують ріст грамнегативної мікрофлори і більшості грампозитивних мікроорганізмів (окремі штами Staphylococcus утворюють ескулін-негативні колонії). Listeria monocytogenes гідролізує ескулін на ескулетин і глюкозу. Реагуючи з цитратом заліза, ескулетин утворює коричнево-чорний комплекс, що приводить до потемніння середовища навкруги колоній.
Методика виділення лістерій залежить від досліджуваних зразків. Для всіх зразків рекомендується селективне і холодове збагачення.
Для зразків харчових продуктів і матеріалу з об’єктів довкілля звичайно використовують селективне збагачення.
Селективний агар для лістерій (двокомпонентне середовище) –
Listeria Selective Agar (M567)
Середовище запропоновано для культивування і виділення видів Listeria з клінічного і іншого матеріалу
| Склад: | грам/дм3 | |
| Частина А: | Гідролізат казеїну Пептичний перевар тваринної тканини Глюкоза Натрію хлорид Тіаміну дихлорид Акрифлавіну гідрохлорид (Трипафлавін) Налідиксова кислота Агар-агар | 10,00 10,00 1,00 5,00 0,005 0,01 0,04 13,00 |
| Частина В: | Калію роданід | 37,50 |
| Кінцеве значення рН (при 250С) 7,4 ± 0,2 |
ПриготуванняРозмішати 39,0 г порошку частини А і 37,5 г порошку частини В в 1000 см3 дистильованої води. Підігріти до кипіння для повного розчинення частинок. Стерилізувати автоклавуванням при 1,1 атм (1210С) протягом 15 хв. Готове середовище має жовте забарвлення, прозоре або злегка опалесцує.
Принцип і оцінка результату.Гідролізат казеїну і пептичний перевар тваринної тканини є джерелом необхідних поживних речовин для росту лістерій. Тіамін (вітамін групи В) стимулює ріст лістерій. Роданід і налідиксова кислота пригнічують ріст грамнегативних бактерій. Комбінація селективних речовин і акридинових фарбників пригнічує ріст ентерококів. Контаміновані зразки засівають в Бульйон збагачення для лістерій безпосередньо або проводять холодове збагачення в Триптозному бульйоні (М179), після чого культури відсівають на Селективний агар для лістерій. Гемоліз можна перевірити шляхом висіву на Кров'яний агар (М073).