Клонирования. На первом этапе клонировали двунитевую ДНК-копию
МРНК и расщеплением рестиктазами получали последовательность, коди-
Рующую всю аминокислотную последовательность гормона, кроме пер-
Вых 23 аминокислот. Далее клонировали синтетический полинуклеотид,
Соответствующий этим 23 аминокислотам со стартовым ANG кодоном в
Начале. Два полученных фрагмента соединяли и подстраивали к паре lac-
Промоторов и участку связывания рибосом. Сконструированный ген
трансплантировали в E. coli. Синтезированный в бактериях гормон обла-
Дал требуемой молекулярной массой, не был связан с каким-либо белком;
Его выход составлял около 100 000 молекул на клетку. Гормон, однако,
Содержал на N-конце полипептидной цепи дополнительный остаток ме-
Тионина; при удалении последнего выход гормона был низким.
В 1980 г. были получены доказательства того, что генноинженерный
Соматотропин обладает биологической активностью нативного гормона.
Клинические испытания препарата также прошли успешно. В 1982 г. гор-
Мон был получен также на основе сконструированной кишечной палочки
В Институте Пастера в Париже. Стоимость гормона к 1990 г. снизилась до
5 долларов/ед. В настоящее время его начинают применять в животновод-
Стве для стимулирования роста домашнего скота, удоев и др.
Получение интерферонов
Интерфероны – группа белков, способных продуцироваться в ядер-
Ных клетках позвоночных. Это мощные индуцибельные белки, являю-
Щиеся фактором неспецифической резистентности, поддерживающего
Гомеостаз организма. Система интерферонов обладает регуляторной
Функцией в организме, так как способна модифицировать различные
Биохимические процессы. Интерфероны позвоночных, в том числе че-
ловека, разделяют на три группы: α, β, γ, соответственно, лейкоцитар-
Ные, фибробластные и иммунные.
В конце 70-х гг. стала очевидной потенциальная значимость интерфе-
Ронов для медицины, в том числе профилактики онкологических заболе-
Ваний. Клинические испытания сдерживались отсутствием достаточных
Количеств интерферонов и высокой стоимостью препаратов, полученных
Традиционным способом (выделение из крови). Так, в 1978 г. для получе-
Ния 0.1 г чистого интерферона в Центральной лаборатории здравоохране-
ния Хельсинки (лаборатория – мировой лидер по производству интерфе-
Рона из лейкоцитов здоровых людей) получали при переработке 50 000 л
Крови. Полученное количество препарата оценочно могло обеспечить ле-
Чение против вирусной инфекции 10 000 случаев. Перспективы получения
Интерферонов связывали с генной инженерией.
В 1980 г. Гилберту и Вейссману в США удалось получить интерферон
В генетически сконструированной E. coli. Исходная трудность, с которой
они столкнулись, – низкий уровень мРНК в лейкоцитах, даже стимулиро-
Ванных заражением вирусом. При переработке 17 л крови удалось выде-
Лить мРНК и получить ДНК-копию. Последнюю встроили в плазмиду и
Клонировали в E. coli. Было испытано свыше 20 000 клонов. Отдельные
клоны были способны к синтезу интерферона, но с низким выходом, 1–2
Молекулы на клетку. Аналогичные исследования проводили в Японии,
Англии, Франции, России.
В 1980 г. были установлены нуклеотидные последовательности α- и β-
интерферонов: мРНК фибробластного интерферона состоит из 836 нук-
леотидов; из них 72 и 203 нуклеотида приходятся на 5’- и 3’-
Нетранслируемые области, 63 кодируют пептид, ответственный за секре-
Цию интерферона из клеток и 498 нуклеотидов кодируют 166 аминокис-
Лотных остатков собственно интерферона. После этого химическим син-
тезом были получены гены α- и β-интерферонов, которые клонировали в
E. coli. В 1981 г. была расшифрована нуклеотидная последовательность
Иммунного интерферона, существенно отличающегося от первых двух, но
Сравнимого по величине молекулы. Существенным моментом был полный