Робота № 4. Визначення на препаратах кристалів геміну та гемоглобіну
Будову гему в молекулі гемоглобіну однакова у всіх ссавців, а глобін має видову специфічність і різноманітні структури в межах одного виду. При якісному визначенні у крові, розчинах, на предметах виявляють різноманітні сполуки гемоглобіну. Можна встановити, якому виду тварин чи людині належить кров.
Мета роботи: встановити, чи є кров у препараті і кому вона належить.
Для роботи потрібні: досліджувана рідина або предметне скло з висушеним препаратом, мікроскоп, освітлювач, покривне скло, спиртівка, сірники, очні піпетки, льодова оцтова кислота, хлороформ, бальзам.
Хід роботи. Одержання кришталів геміну та гемоглобіну. 1. До висушеної на предметному склі краплі додати маленький кришталик натрію хлориду, 1 краплю льодової оцтової кислоти, розмішати й дочекатись, доки зникне запах кислоти (можна скло підігріти на вогні). Після цього покласти на препарат покривне скло й при великому збільшенні шукати під мікроскопом кристали геміну.
2. На предметне скло нанести краплю бальзаму, розчиненого у хлороформі. Внести в неї в 5 – 10 разів меншу краплю досліджуваного розчину і зразу ж накрити покривним склом. Підігріти на вогні 1 – 2 хв.
Розглянути під мікроскопом. Якщо у розчині є кров, у препараті повинні бути кристали гемоглобіну.
Рекомендації щодо оформлення результатів роботи. Замалювати кристали геміну і гемоглобіну. Звернути увагу на їх колір та форму.
У висновках відповісти на такі запитання: чи була кров у досліджуваному препараті; кров тварини чи людини була в препараті?
5. Зміст теми
· Фізіологія еритроцитів : утворюються в червоному кістковому мозку, тривалість життя – до 120 днів: містять гемоглобін, завдяки якому здійснюється транспортування кисню.
Кількість еритроцитів у чоловіків: 4 – 5 х 1012/л, у жінок: 3,9 – 4,7 х 1012/л.
· Кількість гемоглобіну у чоловіків 135 –180 г/л, у жінок 120 – 140 г/л.
· Основні функції еритроцитів та гемоглобіну це:
1) транспортування кисню у вигляді оксигемоглобіну (НbО2): 1 г Нb приєднує 1, 34 мл кисню. Киснева ємкість крові (КЄК) - це кількість кисню, що транспортується 1 л ( або 100 мл) крові при насичені гемоглобіну киснем на 100%. КЄК становитиме: 140 г х 1,34 = 187,6 мл О2. В артеріальній крові насиченість гемоглобіну киснем становить 98% при диханні атмосфернм повітрям. У плазмі в тих же умовах розчиняється незначна кількість кисню (у 100 мл плазми при напрузі кисню в артеріальній крові 100 мм рт.ст розчиняється 0,3 мл, у 1 л – 3 мл), отже кисень переважно транспортується у вигляді НbО2;
2) транспортування СО2 у вигляді карбогемоглобіну (НbСО2): у венозній крові до білкової частини молекули гемоглобіну приєднується СО2, у такому з”єднані транспортується до 27% вуглекислого газу; основна форма транспортування вуглекислого газу кров”ю – це утворення бікарбонатів, у цьому еритроцити приймають участь, бо мають фермент карбоангідразу, завдяки якому утворюється вугільна кислота (СО2 + Н2О = Н2СО3), яка дисоціює, аніон НСО3- переходить у плазму, де і транспортується у вигляді NaHCO3 (65%);
3) при отруєнні людини чадним газом утворюється стійка сполука СО з гемоглобіном – карбоксигемоглобіну (НbСО) людина гине від нестачі кисню, бо весь гемоглобін з”єднується з чадним газом і транспортування кисню стає неможливим;
4) утворення метгемоглобіну(МеНb) в еритроцитах відбувається під впливом окислювачів, які надходять в кров, бо утворюються в процесі метаболізму, залізо стає трьохвалентним, фермент гемоглобінредуктаза відновлює Fe+3 до Fe+2;
5) буферні системи гемоглобіну та дезоксигемоглобіну, які разом з буферними системами плазми приймають участь у регуляції рН крові
· Регуляція еритропоезу: утворення еритроцитів у дорослої людини здійснюється у червоному кістковому мозку. Для синтезу гемоглобіну необхідні: залізо, амінокислоти, вітаміни: В12, фолієва кислота, В6, С, інші. Регуляція еритропоезу відбувається переважно під впливом еритропоетинів, які утворюються в нирках (90%) і печінці (10%) в умовах гіпоксії (див.схему регуляції),на еритропоез впливають також інші гормони, які його стимулюють, або пригнічують.