Правила работы в бактериологической лаборатории
Сотрудники лаборатории обязаны соблюдать следующие правила:
1. Работать разрешается в специальной одежде – халате и шапочке. В боксе работают в стерильном халате, маске, шапочке, при необходимости надевают резиновые перчатки и очки. Обязательно меняют обувь.
2. Запрещается выходить за пределы лаборатории в халатах или надевать верхнюю одежду на халат.
3. В лаборатории запрещается курить и принимать пищу.
4. Весь материал, поступающий в лабораторию на анализ, должен рассматриваться как инфицированный. Поэтому при распаковке материала необходимо соблюдать осторожность. Емкости следует обтирать снаружи дезинфицирующим раствором и ставить их на подносы или в кюветы.
5. В случае попадания инфицированного материала на халат, руки, стол, обувь необходимо провести дезинфекцию и сообщить об этом заведующему лабораторией.
6. Зараженный материал обязательно уничтожают автоклавированием. Инструменты, а также поверхность рабочего стола после работы дезинфицируют.
7. Запрещается выносить из лаборатории оборудование, инвентарь, материалы без предварительной их дезинфекции. 8. Пипетки, предметные и покровные стекла и другую посуду, бывшую в употреблении, обеззараживают, погружая в дезраствор.
9. По окончании работы рабочее место приводят в порядок и тщательно дезинфицируют. Культуры микроорганизмов, необходимые для дальнейшей работы, убирают на хранение в холодильник.
Правила микроскопирования:
Работа с микроскопом требует строгого соблюдения правил работы с ним. При микроскопировании в качестве источника света используется естественное освещение и искусственные источники света. При рассматривании неокрашенных препаратов пользуются суженой диафрагмой и опущенным конденсором. Окрашенные препараты микроскопируют при поднятом конденсоре и открытой диафрагме.
1. С помощью зеркала, конденсора и диафрагмы обеспечивают хорошее освещение.
2. Помещают препарат на предметный столик микроскопа и, используя объектив х8, получают четкое изображение
3. После смены объектива х8 на х90 (иммерсионный объектив) и под контролем глаза с боку, осторожно отпускают его до прикосновения с покровным стеклом
4. Глядя в окуляр, медленно с помощью макровинта поднимают тубус микроскопа до получения четкого изображения, после чего с помощью микровинта (пол-оборота в одну сторону или другую) добиваются наилучшего изображения.
Для окрашивания препаратов пользуются кислыми, щелочными и нейтральными анилиновыми красителями. Наиболее широкое применение нашли основной и кислый фуксин, метиленовый синий, генцианвиолет и везувин.
Простой способ окраски мазков производится водным фуксином Пфейффера и метиленовым синим Леффлера. Готовят водный фуксин из фенолового фуксина Циля, разводя его дистиллированной водой в соотношении 1:10. Состав РАСТВОРА ФУКСИНА ЦИЛЯ: основной фуксин – 1 г; спирт этиловый 96 % – 10 мл; фенол кристаллический – 5 г; глицерин – несколько капель; вода дистиллированная – 100 мл.
Метиленовый синий Леффлера готовят, прибавляя к 30 мл насыщенного раствора метиленового синего (10 г метиленового синего в 100 мл 96 % этилового спирта) 1 мл 1% NaOH или KOH и 100 мл дистиллированной воды.
После окрашивания красители сливают, препарат промывают водой и высушивают между листками фильтровальной бумаги. На сухой мазок наносят каплю масла и микроскопируют с использованием иммерсионного объектива оптического микроскопа. Способность микробов воспринимать красители называется тинкториальными свойствами.
При окраске щелочным метиленовым синим по Леффлеру (3–5 мин) гранулы волютина у дифтерийных коринебактерий приобретают темно–синий, а палочка – голубой цвет.
При сложных методах окраски мазков применяют два–три различных по цвету красителя, что позволяет дифференцировать микробы и выявить некоторые нюансы в деталях их строения. К таким методам относят окраску по Граму, Цилю–Нельсену, Нейссеру, Бурри–Гинсу, Романовскому–Гимзе и некоторые другие.
При окраске по НЕЙССЕРУ гранулы ВОЛЮТИНА у дифтерийных коринебактерий окрашиваются в сине–черный, а бактерия – в желтый цвет. Мазок окрашивают: 1) 1 мин уксуснокислым метиленовым синим (метиленовый синий – 0,1 г, спирт – 2 мл, ледяная уксусная кислота – 5 мл, дистиллированная вода – 100 мл); 2) сливают краситель и мазок промывают водой; 3) на 20– 30 с наносят раствор Люголя; 4) 1 –3 мин окрашивают везувином (прокипяченная и отфильтрованная взвесь 2 г везувина в смеси 60 мл спирта и 40 мл дистиллированной воды).
Бактериальная клетка состоит из клеточной стенки, цитоплазматической мембраны, цитоплазмы с включениями и ядерного аппарата, называемого нуклеоидом. Имеются другие структуры: мезосома, хроматофоры, тилакоиды, вакуоли, включения полисахаридов, жировые капельки, капсула (микрокапсула, слизь), жгутики, пили.
Кислотоустойчивые бактерии— микроорганизмы, обладающие выраженной резистентностью к 5—10% серной или соляной кислотам, щелочам и спирту. После окрашивания кислотоустойчивые бактерии обесцвечиваются кислотами с большим трудом, так как содержат жировые и воскоподобные вещества. К числу кислотоустойчивых бактерий относятся возбудители туберкулеза, проказы и некоторые сапрофиты.
Люминесцентный микроскоп освещает образец ультрафиолетовым или синим светом. Поглощая это излучение, образец испускает видимый свет люминесценции. Люминесцентные микроскопы широко используются в биологии, а также в медицине – для диагностики.
Фазово-контрастный микроскоп применяется для исследования изображений прозрачных объектов, особенно живых клеток. При помощи специальных устройств часть света, проходящего через микроскоп, сдвигается по фазе на половину длины волны относительно другой части, благодаря чему достигается контраст на изображении.
Спирохеты (speira —виток, изгиб, chaite —волосы) представляют собой спирально извитые подвижные микроорганизмы, объединённые в порядок Spirochaetales, семейство Spirochoutaceae, включающее 3 рода: Borrelia, Treponema, Zeptospira.
Риккетсии занимают промежуточное положение между бактериями и вирусами. Представляют собой грам- прокариоты, мелкие, размеры не превышают 1,5 мкм.
Хламидии или гальпровии относятся к облигатным внутриклеточным кокковидным грам- бактериям.
Микоплазмыимеют строение прокариотов, но у них отсутствует клеточная стенка. Это - мелкие бактерии, окружённые цитоплазматической мембраной. Этим объясняется их полиморфизм. Из-за отсутствия клеточной стенки микоплазмы осмотически чувствительны и имеют разнообразную форму: кокковидную, нитевидную, колбовидную, гранул в виде крошечных кокков и элементарных телец, крупных шаров, колец, палочек, ветвящиеся или мицелиапьные формы и др.
Актиномицеты - это ветвящиеся грам+ бактерии. Актиномицеты (actis - луч, mykes - гриб) - «лучистые грибы» - это многочисленная группа микробов, включённых в порядок Actinomycefales, включающий 3 семейства: Actinomycetaceae, Strepfomycefaceae, Nocardiaceae. Антиномицеты имеют вид палочек, небольших разветвлённых нитей (ceм. Actinomycefaceae) или длинных тонких несептированных ветвящихся гиф (ceм.Streptomycefaceae).