Механизмы взаимодействия антигенов и антител. Специфичность. Фазы. Проявления. Афинность. Авидность

 

Антитела обладают способностью отличать один антиген от другого. Они взаимодействуют только с теми антигенами (за редким исключением), против которых они выработаны и подходят к ним по пространственной структуре. Эта способность антитела получила название комплиментарность. Специфичность антитела обусловлена химической структурой, пространственным рисунком антидетерминант. Она связана с первичной структурой (чередованием аминокислот) белковой молекулы антитела.

Тяжелые и легкие цепи иммуноглобулинов обусловливают специфичность активного центра. В формировании комплекса антиген-антитело участвуют возникающие между ионными группами кулоновские силы и силы притяжения Ван-Дер-Ваальса, полярные силы и силы Лондона, межатомные ковалентные связи.

Известно, что взаимодействуют они как целые молекулы. Поэтому на одну молекулу антигена приходится значительное количество молекул антител. Они создают слой толщиной до 30 А0. Комплекс антиген-антитело разъединим с сохранением первоначальных свойств молекул.

Первая фаза соединения антитела с антигеном неспецифическая, невидимая, характеризуется абсорбцией антитела на поверхности антигена или гаптена. Протекает при температуре 37°С за несколько минут.

Вторая фаза специфическая, видимая, завершается феноменом агглютинации, преципитации или лизиса. В этой фазе необходимо присутствие электролитов, а в некоторых случаях и комплемента. Несмотря на обратимость процесса, комплексообразование между антигеном и антителом играет положительную роль в защите организма, которая сводится к опсонизации, нейтрализации, иммобилизации и ускоренной элиминации антигенов.

  • Аффинность антител - сила связывания отдельной детерминаты (эпитопа)антигена с определенным активным центром- комбинаторным участком молекулы иммуноглобулина ( паратопом).
  • Авидность антител - кумулятивная сила связывания комбинаторных участков антител (паратопов) с антигенными детерминантами (эпитопами) сложного антигена.

 

18.

Серологический метод исследования. Задачи, этапы, оценка. Титр сыворотки, диагностический титр. Диагностикумы, диагностические сыворотки, применение. Характеристика серологического метода исследования

Серологическим называют метод исследования, в основе которого лежит реакция специфического взаимодействия антигенов и антител. На основе ее специфичности возможно определение неизвестных антител при взаимодействии с известным антигеном или неизвестного антигена по связыванию с известным антителом.

 

Метод решает следующие задачи:

  1. Серологическая диагностика инфекционных и иммунных заболеваний, основанная на обнаружении в сыворотке крови больных антител. Обоснованием для постановки диагноза является:
    • обнаружение антител к возбудителю болезни в диагностическом титре, т.е. в таком разведении сыворотки, в котором реакция может быть положительна только у больных и отрицательна у здоровых;
    • нарастание титра антител при повторном исследовании в динамике болезни, что позволяет отличить заболевание от поствакцинального или постинфекционного иммунитета.
  1. Серологическая диагностика инфекционных заболеваний, основанная на обнаружении в биологических жидкостях или тканях антигенов патогенных микробов.
  2. Серологическая идентификация неизвестных микробов, выделенных при бактериологическом методе диагностики инфекционных болезней. Обоснованием для отнесения микроба к определенной серофуппе, сероварианту или виду является:
    • взаимодействие микроба с адсорбированной моноспецифической сывороткой, содержащей антитела только к-специфическим для микроба антигенам (из таких сывороток в процессе их производства сорбируются антитела к групповым антигенам);
    • взаимодействие микроба с моноклональными антителами, полученными методом гибридомной техники, т.е. метода культивирования гибрида из плазматической клетки, синтезирующей антитела одной специфичности, с опухолевой клеткой, способной к длительному размножению в культуре ;
    • взаимодействие микроба с диагностической сывороткой в разведении, составляющем не менее половины титра этой сыворотки.
  1. Определение активности поствакцинального или постинфекционного индивидуального или коллективного иммунитета.
  2. Получение и определение титров иммунных диагностических, лечебных и профилактических сывороток, поли- и гамма-глобулинов.

 

Терминология.

Диагностическая сыворотка - иммунная сыворотка, содержащая антитела известной специфичностити в известном титре, и предназначенная для серологической идентификации микроба или для обнаружения антигенов в организме больного,

Диагностикум - взвесь известных микробов или антигенов, предназначенных для серологической диагностики заболеваний по обнаружению антител в сыворотке больного.

 

Серологический метод исследования включает ряд реакций:

  • агглютинации
  • преципитации
  • связывания комплемента
  • иммунофлюоресценции
  • иммуиоферментного и радиоиммунологического анализа.

 

ОЦЕНКА МЕТОДА

Достоинства:

  • высокая специфичность,
  • относительная простота,
  • доступность,
  • безопасность,
  • быстрота (от 10 мин. до 4 часов) получения результатов.

Недостатки:

  • при острых инфекционных заболеваниях обнаружение антител часто бывает ретроспективным диагнозом, т.к. они появляются в достаточных титрах к 7-8 дню от начала болезни, и к этому сроку болезнь может закончиться.

 

19.

Реакция агглютинации. Цели и методы постановки, учёт, оценка. Применение

 

Реакция агглютинации (от лат. agglutinatio - склеивание) - склеивание корпускул (бактерий, эритроцитов и др.) антителами в присутствии электролитов - натрия хлорида.

Реакция агглютинации проявляется в виде хлопьев или осадка, состоящих из корпускул (например,бактерий), "склеенных" антителами.

 

РА используют для:

  • Определения возбудителя,
  • Определения антител в сыворотке крови больного

Методы постановки:

  • Реакция агглютинации на стекле. К капле агглютинирующей сыворотки (разведение 1 : 20) добавляют взвесь бактерии, выделенных от больного. Образуется хлопьевидный осадок.
  • Развернутая реакция агглютинации с сывороткой крови. К разведениям сыворотки добавляют диагностикум.

 

20.

Реакция пассивной гемагглютинации, ингредиенты Методика постановки, учёт, оценка. Применение. Реакция обратной пассивной гемагглютииации. Реакция латексагглютинации