Растворы, содержащие активный хлор используются 1 раз и готовят их непосредственно перед работой

Диацид используется в 0,2 % растворе для стерилизации корнеплодов, семян, кусочков, тканей, верхушечных меристем, изолированных зародышей, пыльников. Диацид готовят, растворяя отдельно 330 мг этанолмеркурхлорида и 660 мг цетилпиридиния хлорида в горячей воде (330 мл), затем их смешивают и доводят объем жидкости до 1 л, добавляют несколько капель детергента твин-80; хранят в плотно закрытой колбе в темноте.

Перекись водорода H₂O₂ используют в основном для стерилизации семян (в концентрации 2-10 %), реже для стеблей и листьев. После стерилизации перекисью водорода не требуется длительного промывания тканей водой (достаточна одноразовая промывка).

Бром Br₂ в виде 1% водного раствора – эффективное стерилизующее средство, особенно для семян. Однако этот раствор следует применять очень осторожно, причем только на сухих семенах, так как бром токсичен и повреждает зародыши, если они ненадежно защищены. После стерилизации бромной водой требуется тщательное отмывание растительных объектов дистиллированной водой.

В последнее время в биотехнологических лабораториях стали применять синтетические комплексные стерилизаторы (лизоформин, тетрамин и др.). Их особенностью является менее высокие концентрации и меньшая токсичность для работников, осуществляющих введение в культуру.

Антибиотики применяют для стерилизации растительного материала, инфицированного бактериями (ткани корончатогалловых опухолей). Наиболее часто применяют стрептомицин и тетрамицин 10-80 мг/л, ампициллин 200-400 мг/л, левомицитин, каномицин и другие.

Вид стерилизующего вещества, его концентрация и длительность применения зависит от плотности и чувствительности растительной ткани, которая должна быть стерилизована. Следует помнить, что многие стерилизующие вещества при длительном воздействии на ткань, ингибируют рост и затрудняют прорастание семян. Важным условием является то, что стерилизующее вещество должно легко удаляться из ткани промыванием дистиллированной водой или подвергаться разложению. Оптимальным способом стерилизации для каждого вида следует считать тот вариант, при котором наблюдается наименьший процент инфицированных семян при наименьшем повреждении растительных тканей.

Следует учитывать при подборе режима стерилизации морфологические особенности семян: гладкие семена с тонкой кожурой необходимо стерилизовать в более щадящем режиме, чем семена, имеющие твердую, плотную оболочку, выросты и опушение, неровную поверхность.

Семена для проращивания после стерилизации высевают либо на воду, либо на питательную среду, не содержащую гормонов и других биологически активных веществ.

 

Порядок выполнения работы:

Отобрать 10 семян выбранного вида растения. Семена завернуть в мешочки из марли по 5 штук.

В ламинар-боксе простерилизовать семена:

- Поместить мешочки с семенами в стакан с 96%-ным спиртом на 1 минуту. Промыть 3 раза в стерильной дистиллированной воде.

- После промывания поместить 1 мешочек с семенами в стакан с 10%-ным раствором хлорамина на 5 минут, 2 мешочек – на 10 минут. Промыть 3 раза в стерильной дистиллированной воде.

Пинцет опустить в стакан со спиртом и прокалить в пламени спиртовки. Стерильным пинцетом переместить семена на питательную среду (по 5 шт в каждый стаканчик). Закрыть стаканчик с семенами пленкой, подписать вид растения, дату введения, режим стерилизации (10% 10' или 10% 5').

Поставить культуральные сосуды с семенами в световую комнату или термостат.

Через 2-3 дня в течение последующих 2 недель контролировать состояние культивируемых семян: отмечать появление инфекции, проростков. Заполнить таблицу 4.

Таблица 4. Условия введения в культуру семян декоративных растений

Вид растения	Режим стерилизации	Условия культивирования	% инфицированных семян	Всхожесть, %	Динамика прорастания

 

 

Литература:

1. Калашникова Е.А., Кочиева Е.З., Миронова О.Ю. Практикум по сельскохозяйственной биотехнологии. – М.: КолосС, 2006.

2. Методы культуры тканей в физиологии и биохимии растений / Калинин Ф.Л., Сарнацкая В.В., Полищук В.Е. – Киев: Наук. думка, 1980.

3. Основы биотехнологии растений. Культура клеток и тканей: Учебное пособие / Составители: Сорокина И.К., Старичкова Н.И., Решетникова Т.Б., Гринь Н.А. – С.-П., 2002.

4. Основы микроразмножения редких растений: учебно-методическое пособие / Составители: О. Г. Баранова, О.Н. Дедюхина, Е.А. Китова и др. – Ижевск: Изд-во «Удмуртский университет», 2009.