Практическая работа № 3. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ГРУППЫ КРОВИ И РЕЗУС ПРИНАДЛЕЖНОСТИ С ПОМОЩЬЮ ЦОЛИКЛОНОВ
Моноклональные Анти-А и Анти-В антитела продуцируются двумя мышиными гибридомами и принадлежат к иммуноглобулинам класса М. Цоликлоны изготавливаются из асцитной жидкости мышей – носителей анти-А и анти-В гибридом. Цоликлон Анти-АВ представляет собой смесь моноклональных анти-А и анти-В антител. Имеются и цоликлоны Анти-D для определения резус принадлежности крови.
Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-А, Анти-В и Анти-АВ, а также Анти-D по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности антигенов А или В или резус-антигена.
Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.
Интерпретация результатов реакции агглютинации исследуемой крови с цоликлонами представлена в таблице.
| Результат реакции с цоликлоном Анти-А Анти-В Анти -АВ | Исслед.кровь принадлежит к группе | ||
| - | - | - | 0(I) |
| + | - | + | А(II) |
| - | + | + | В(III) |
| + | + | + | АВ(IV) |
Знаком плюс (+) обозначено наличие агглютинации, знаком минус (-) – отсутствие агглютинации.
Наличие агглютинации с Анти-D цоликлоном свидетельствует о том, что кровь резус-положительная, а отсутствие агглютинации – что кровь резус-отрицательная.
Для лучшего усвоения навыка чтения результатов определения групповой принадлежности крови желающие студенты могут использовать компьютерную программу «Тренажер по определению групп крови».
ПРОТОКОЛ ДАННЫХ ПО ТЕМЕ: «Физиология системы крови. Физиология свертывающей и антисвертывающей систем. Группы крови».
Данные пациента:
Ф.И.О.______________ Возраст_____________ Пол: М/Ж
Практическая работа № 1
Определение скорости свертывания крови.
Полученные результаты:
Рисунок
Время свертывания крови____________________мин.
Выводы:________________________________________________________________________________________________________________________
Практическая работа № 2
Определение времени кровотечения по Дьюку.
Время кровотечения______________мин.
Выводы:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Практическая работа № 3
Определение группы крови.
Полученные результаты:
После смешивания крови с цоликлонами агглютинация (наступила, не наступила)
Анти –А_____________________________________
Анти -В______________________________________
Анти -АВ_____________________________________
 | | |
Анти-А Анти-В Анти-АВ
Выводы:____________________________________________________________________________________________________________
Практическая работа № 4
Определение резус – принадлежности (Rh).
Полученные результаты:
После смешивания крови с цоликлоном Анти-Д агглютинация (наступила, не наступила)
_________________
Анти-Д
Выводы:__________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________