Влияние желчи на активность липазы
Принцип метода. Если к молоку добавить немного липазы и подщелочить полученную смесь до розовой окраски по фенолфталеину, то при стоянии в водяной бане при 37°С жидкость постепенно обесцвечивается. Это объясняется тем, что под действием липазы освобождаются высшие жирные кислоты и рН смещается в сторону более низких значений. Обесцвечивание в этом опыте ускоряется при добавлении желчи. Это объясняется тем, что липаза активируется солями желчных кислот.
Реактивы:
4)панкреатин (вытяжка из поджелудочной железы, содержащая липазу), 5% раствор;
5)фенолфталеин, 0,5% спиртовой раствор;
3)0,05 и. раствор №ОН;
6) молоко, прокипяченное и предварительно разведенное дистиллированной водой в соотношении 1:1.
Ход работы:В 2 пробирки вносят по 1 мл молока и по 1 капле раствора фенолфталеина. В каждую пробирку добавляют по каплям раствор гидроксида натрия до слабо-розовой окраски по фенолфталеину. В каждую пробирку вносят по 2 капли вытяжки липазы, а в пробирку 1, кроме того, и каплю желчи. Пробирки помещают в водяную баню при 37 С и отмечают время обесцвечивания фенолфталеина в опыте с желчью и без нее.
Результат: ______________________________________________________
_____________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Эмульгирование жира
Принцип метода Жиры, чтобы подвергнуться расщеплению липазами в желудочно-кишечном тракте, должны быть предварительно эмульгированы. Основными эмульгаторами жира в пищеварительном тракте являются желчные кислоты. Белки, мыла, соли угольной кислоты, содержащиеся в некотором количестве в двенадцатиперстной кишке, также эмульгируют жиры.
Взбалтывая жир с водой, можно наблюдать образование расслаивающейся, нестойкой эмульсии. Добавляя поверхностно-активные вещества, можно получить стойкую эмульсию. Эмульгаторы легко адсорбируются на поверхности раздела двух фаз, образуя тончайшую пленку, которая препятствует слиянию капелек эмульсии.
Ход работы: в 5 пробирок наливают по 3 капли растительного масла. В первую пробирку добавляют 20 капель дистиллированной воды, во вторую — 20 капель желчи, в третью — 20 капель 1 % раствора яичного белка, в четвертую — 20 капель I % раствора мыла, а в пятую — 20 капель 1 % раствора карбоната натрия. Все пробирки тщательно взбалтывают. Через 5 мин оценивают сохранение эмульсии.
| Оценка | Мыло | Вода | Желчь | Белок | Сода |
| Стабильность эмульсии | |||||
| Степень дисперсности эмульсии |
Вывод______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________
Качественные реакции на холестерин
По химической природе холестерин является циклическим ненасыщенным вторичным спиртом. В основе реакций лежит его способность образовывать окрашенные соединения в присутствии серной кислоты и уксусного ангидрида. Этой способностью пользуются для количественного определения холестерина в крови.
Реактивы:
1. холестерин, 1% раствор в хлороформе;
2. серная кислота, концентрированная;
3. уксусный ангидрид.
4. 1% хлороформный раствор;
5. бромная вода.
6. ледяная уксусная кислота.
Ход работы
Реакция Сальковского.Под действием концентрированной серной кислоты происходит дегидратация холестерина, конденсация образовавшихся продуктов в виде непредельных углеводородов, соединяющихся с образованием окрашенных продуктов. Всухую пробирку вносят 10 капель раствора холестерина и осторожно по стенке пробирки наслаивают 0,5 мл серной кислоты. На границе жидкостей появляется красное кольцо.
Реакция Либермана—Бурхарда.Раствор холестерина в хлороформе дает с уксусным ангидридом и концентрированной серной кислотой красное окрашивание, переходящее затем в синее и зеленое. В пробирку вносят 1 каплю хлороформного раствора холестерина, добавляют I каплю уксусного ангидрида и 1 каплю концентрированной серной кислоты. Развивается синяя, а затем зеленая окраска.
Обнаружение ненасыщенной связи в молекуле холестерина. Ненасыщенную связь в молекуле холестерина можно обнаружить по обесцвечиванию бромной воды.
В пробирку вносят 10—15 капель хлороформного раствора холестерола, добавляют 2 капли бромной воды. Происходит обесцвечивание бромной воды при встряхивании содержимого пробирки.
Получение кристаллов холестерида. Холестерин при взаимодействии с кислотами образует сложные эфиры — стероиды.
В пробирку вносят 10 капель уксусной кислоты и на кончике лопатки немного холестерина. Нагревают до кипения. Охладив пробирку на воздухе, наблюдают появление осадка. Несколько капель полученной взвеси переносят на предметное стекло, покрывают покровным и исследуют под микроскопом кристаллы ацетилхолестерида.
Результат: ______________________________________________________
_____________________________________________________________________
Вывод______________________________________________________________
__________________________________________________________________________________________________________________________________________