Работа № 1. Определение содержания общего ХС в сыворотке крови
Принцип метода - основан на реакции Златкис-Зака. Холестерин при взаимодействии с хлорным железом в присутствии смеси серной, фосфорной и уксусной кислот образует окрашенный продукт, оптическая плотность его раствора пропорциональна концентрации холестерина.
Ход работы: В двух чистых пробирках приготовить растворы – опыт (оп) и стандарт (ст), как указано в таблице № 1.
Таблица № 1.
| Реагенты | Оп (мл) | Ст (мл) |
| Стандартный р-р ХС | - | 0,2 |
| Сыворотка крови | 0,2 | - |
| Уксусная к-та (лед) | 3,0 | 3,0 |
| Рабочий р-р FeCI3 | 2,0 | 2,0 |
Содержимое пробирок перемешать и инкубировать при комнатной температуре 15 минут, затем против воздуха определить оптическую плотность, используя зеленый светофильтр.
Расчет концентрации холестерина провести по формуле: СХС = ЕОП/ЕСТ . 1,29 ммоль/л (50 мг%)
Содержание холестерина ммоль/л: идеальное < 5,2; допустимое 5,2 – 6,5; патологическое > 6,5.
Клинико-диагностической значение: Исследование уровня ХС в сыворотке крови не даёт точной диагностической информации о конкретном заболевании, а лишь отражает патологию обмена липидов в организме. Его содержание исследуется для уточнения диагноза типа липидемии, а также для расчёта коэффициента атерогенности (см. ниже) и прогноза развития коронарного артериосклероза. Повышенный уровень ХС наблюдается при IIа, IIб, III типах липидемий, сахарном диабете, ожирении, алкоголизме, холестазе и др. Гипохолестеринемия - при голодании, синдроме мальабсорбции, гипертиреозе, онкологической кахексии, туберкулёзе, анемиях.
Вывод:
Работа № 2. Определение содержание ХС-ЛПВП в сыворотке крови.
Принцип метода: Добавление к образцу сыворотки крови осаждающего раствора – смеси фосфорновольфрамовой кислоты и MgCI2, приводит к осаждению всех липопротеидных фракций сыворотки крови, кроме ЛПВП. В полученном при центрифугировании супернатанте, определяется ХС-ЛПВП, аналогично общему холестерину.
Ход работы: В центрифужную пробирку внести 0,3 мл сыворотки крови и 0,6 мл осаждающего раствора, хорошо перемешать стеклянной палочкой и дать постоять 10 минут при комнатной температуре. Пробу центрифугировать при 4 тыс. об/мин. 8 минут, полученный прозрачный супернатант использовать для определения ХС-ЛПВП, как указано в таблице №1. Но вместо сыворотки крови исследовать супернатант.
Содержание ХС-ЛПВП в ммоль/л.
Нормальные величины: мужчины > 1,42; женщины > 1,68.
Группа риска: мужчины 0,9 – 1,42; женщины 1,16 – 1,68.
Патологические нарушения: мужчины < 0,9; женщины < 1,16.
Вывод:
Клинико-диагностическое значение.
Снижение содержания ХС-ЛПВП ниже, чем 1,42 у мужчин и 1,68 у женщин следует рассматривать как неблагоприятный признак, предсказывающий развитие атеросклероза и ИБС. При снижении концентрации с 0,91 до 0,78, т.е. всего на 0,13 ммоль/л, повышается риск развития ИБС в 3 раза. Таким образом, ХС-ЛПВП является очень чувствительным интегральным тестом, отражающим состояние обмена ЛП, и не зависит от изменения уровня общего ХС.
Снижение содержания ХС-ЛПВП наблюдается при ожирении, курении, избыточном употреблении в пищу углеводов, гиподинамии и, значительное снижение - при атеросклерозе, инфаркте миокарда, сахарном диабете, заболеваниях печени, липопротеинемии IV типа, болезни Танжи, дефиците ЛХАТ.
Повышение ХС-ЛПВП происходит под влиянием физических нагрузок, эстрогенов, пестицидов, алкоголя, но при его исчезновении из крови их уровень снижается до исходного.
В клинической практике для оценки атерогенности дислипопротеинемий пользуются расчетным коэффициентом атерогенности (КА).
КА = ХС общ. – ХС-ЛПВП / ХС-ЛПВП
В норме КА не должен превышать 3,5. В противном случае ставится диагноз - атеросклероз.
При нормолипидемии, чем ближе КА к верхней допустимой границе, тем выше вероятность развития атеросклероза. Таким образом, коэффициент КА позволяет выявлять клинические и доклинические стадии атеросклероза.
Исходя из полученных данных, рассчитайте коэффициент КА и сделайте по нему соответствующее заключение.
7. Контрольные вопросы по теме занятия.(см. задание к занятию № 16).
8. Литература для подготовки. ( см. задание к занятию № 16).
9. Обсуждено на заседании кафедры 29. 05. 2011 г.
10.Учебное задание подготовлено: доц. Трубачевым С.Д.
ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия
Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
кафедра биохимии
Утверждаю
Зав. каф. проф., д.м.н.
Мещанинов В.Н.
_____‘’_____________2011 г
МЕТОДИЧЕСКИЕ УКАЗАНИЯ