ГРУППОВЫЕ РЕАКЦИИ НА УГЛЕВОДЫ
Проба с a-нафтолом.
Реакция является одной из наиболее чувствительных общих реакций на углеводы и углеводные компоненты в сложных соединениях. Углеводы с a-нафтолом дают фиолетовое окрашивание. Обусловлено оно тем, что при взаимодействии с концентрированной серной кислотой углеводы образуют фурфурол или 5-оксиметилфурфурол, которые конденсируются с нафтолом. Получившееся вещество окисляется в серной кислоте, образуя окрашенное хиноидное соединение.
Реакция с антроном
Фурфурол или 5-оксиметилфурфурол, образующиеся при действии серной кислоты на сахар, конденсируясь с антроном, дают соединения, окрашенные в синий или зеленый цвет.
Реакция Троммера
Реакция является пробой на редуцирующие сахара. Способностью окисляться в щелочной среде с восстановлением солей меди (II) в соли меди (I) обладают так называемые редуцирующие (восстанавливающие) моносахариды и дисахариды, содержащие в своей молекуле свободную карбонильную группу, которая при этом окисляется до карбоксильной.
Реакция Барфеда
Отличие от предыдущих реакций восстановления в том, что окисление сахароз протекает не в щелочной среде, а в среде, близкой к нейтральной. В этих условиях редуцирующие дисахариды в противоположность моносахаридам практически не окисляются, что позволяет отличить их от моноз.
Реакция Селиванова.
Реакция является пробой на кетозы 5-оксиметилферфурол, образующийся при нагревании кетогексоз с сильными кислотами (НСl), дает с резорцином вишнево- красное окрашивание. Реакцию с резорцином дают как свободные кетогексозы, так и отщепляющиеся от более сложных Сахаров (из сахарозы, например). Альдозы также могут образовывать 5-оксиметилфурфурол, но при этом требуется длительное нагревание.
Реакция на пентозы.
При нагревании с концентрированной соляной или серной кислотами пентозы теряют три молекулы воды и превращаются в фурфурол. Фурфурол - бесцветная жидкость, которая с анилином дает характерный продукт конденсации красного, с орцином - зеленого, с флороглицином - вишневого цвета.
Реакция Мальфаттн
Реакция является качественной пробой на лактозу. Химизм не ясен.
Ход работы: 1 мл исследуемого р-ра смешивают с 2 каплями NаОН и 0,5 мл аммиака. Смесь помещают на 15 мин. в водяную баню. В присутствии лактозы появляется оранжево-красное окрашивание.
Проба на сахарозу
Качественная реакция на сахарозу с солями кобальта.
Ход работы: В пробирку с 2 мл сахарозы добавляют 1 мл 5% р-ра NаОН и несколько капель 2% р-ра Со(NОз)2. Раствор приобретает фиолетовое окрашивание.
Проба на полисахарнды
При взаимодействии полисахаридов с йодом имеют место различные процессы: комплексообразованпе. адсорбция и пр. Оттенок окрашивания зависит от строения полисахарида, в частности, от степени его ветвления.
Для получения йодосорбционного соединения крахмала необходимо наличие свободного йода. NаОН превращает свободный йод в йодное, гипойодное и податное соединение, которое после прибавления кислоты разлагается с выделением свободного йода. Поэтому прежде чем приступить к йодной пробе, щелочные растворы надо нейтрализовать.
Реакция связывания свободного йода в щелочной среде:
1) J2+2NaOHàNaJ+NaJO+H2O
2) NaJOàNaJO3+NaJ
В кислой среде при нейтрализации:
2NaJ+Na2SO3+6HClà3J2+6NaCl+3H2
КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ САХАРА В БИОЛОГИЧЕСКОЙ ЖИДКОСТИ ОРТО-ТОЛУИДИНОВЫМ МЕТОДОМ
Глюкоза при нагревании с о-толуиднном в растворе уксусной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого пропорциональна содержанию глюкозы. Содержание глюкозы определяют в жидкости, из которой предварительно удаляют белок.
| № пробирки | Содержимое | Действия |
| 0,5 мл. опытной жидкости + 0,5 мл. ТХУ | 1) 10 мин Выдержать, до выпадения белого осадка. 2) Отцентрифугировать. 3) Отобрать 0,5 мл. | |
| 0,5 мл стандарта + 0,5 мл. ТХУ | Отобрать 0,5 мл. | |
| 0,5 мл. NaCl + 0,5 мл. ТХУ | Отобрать 0,5 мл. |
Ко всем 0,5 мл. из каждой пробирки добавить по 2 мл. орто-толуидинового реактива.
Пробирку 1` прокипятить в водяной бане в течении 8 минут.
Содержимое пробирки 1` колориметрировать на ФЭК против контрольной 2` пробы
( α = 620-640 нм., кювета 0,5 см.)
Cоп = (Cст*Eоп)/Eоп = мг/мл
Соп – с(С6Н6О6) в исследуемой жидкости
Сст – с(С6Н6О6) в стандартной пробе
Еоп и Ест – оптическая плотность опытной и стандартной пробы
Еоп =
Ест =
Тема: ЛИПИДЫ
АЦИЛГЛИЦЕРИНЫ
Акролеиновая проба
Кроме того, что жиры дают характерное масляное пятно, например, на бумаге, реакцией на присутствие жира может служить так называемая акролеиновая проба.
Акролеиновой пробой открывается в жирах остаток глицерина, который при нагревании жира частично переходит в свободный глицерин. Глицерин теряет воду и образует ненасыщенный альдегид - акролеин, легко обнаруживаемый по специфическому раздражающему запаху.
Акролеин может образовываться при пережевывании пищи, и от его присутствия в значительной мере зависит резкий, удушливый запах кухонного чада. Акролеиновую пробу проводят, нагревая жир в присутствии бисульфита калия или натрия (в качестве водоотнимающего средства). Липиды,не содержащие глицерин (воск, жирные кислоты, стерины и т.д.), акролеиновой пробы не дают.
Растворение жиров,
Обычно липиды извлекают из высушенных тканей органическими растворителями. Для разделения липидов пользуются неодинаковой растворимостью их в различных растворителях: одни из них хорошо растворимы в эфире, но плохо в ацетоне (фосфолипиды), другие растворимы в бензоле, но нерастворимы в спирте (холестерол и др.).
Эмульгирование жиров.
В виду плохой растворимости в воде липиды образуют эмульсии с бифильными молекулами - белками, детергентами, желчью.
Гидролиз жира (омыление).
Ход работы: В пробирку наливают около 2 мл растительного масла и добавляют равный объем 40% р-ра едкого калия. Пробирку закрывают пробкой, в которую вставлена стеклянная трубочка (холодильник), помещают в кипящую водяную баню и держат там до образования однородного раствора мыла. Результат опыта и уравнение реакции записывают.
В пробирку наливают примерно 8-10 мл воды и взбалтывают. Полученный раствор используют для определения составных частей жира.
Открытие в гидролизате составных частей жира.
Открытие жирных кислот.
Ход работы: В пробирку наливают часть полученного в четвертом опыте гидролизата и добавляют равное количество 10 %-ного раствора серной кислоты. Пробирку опускают в кипящую водяную баню до образования на поверхности жидкости жирного слоя.
Открытие глицерина
Ход работы: В пробирку наливают примерно 2 мл гидролизата, добавляют 8-10 капель 10 % р-ра едкого натра и несколько капель 2% р-ра сернокислой меди. Появляется слабо-синее окрашивание, вследствие образования глицерата меди.
Результаты обеих реакций записывают.
Открытие ненасыщенных жирных кислот в жире.
Ход работы: В 2 пробирки наливают по 1 мл бромной воды. В первую пробирку добавляют несколько капель растительного масла и тщательно встряхивают; наблюдают обесцвечивание бромной воды. Вторая пробирка служит контролем. Результаты опыта и уравнение реакции записывают.