Культуральный метод исследования
2.1. Бактериологический (культуральный) метод- совокупность методик искусственного культивирования микроорганизмов на питательных средах в целях их идентификации. Современные методы изучения большинства биологических свойств бактерий возможны только при наличии чистой культуры.
Задачи культурального метода:
1) получение чистой культуры какого-либо вида (вара) из микробной ассоциации;
2) идентификациявыделенной чистой культуры,
3) определение дополнительных свойств, например, чувствительности к антибиотикам, вирулентности.
Выполнение бактериологического метода исследования позволяет установить вид микроорганизма, обнаруженного в исследуемом материале, что важно в медицине для установления причина заболевания и назначения правильного лечения, а в других областях для понимания происходящих процессов. Бактериологический метод исследования выполняется в несколько этапов:
1) взятие материала и его доставка в бактериологическую лабораторию;
2) микроскопия исследуемого материала. Этот этап часто не выполняется, хотя предварительная микроскопия в ряде случаев дает ориентировочные сведения о возбудителе и позволяет выбрать необходимые для посева среды;
3) обработка исследуемого материала физическими или химическими факторами в целях удаления или уменьшения посторонней микрофлоры, т.е. обогащение исследуемого материала;
4) посев исследуемого материала на питательные среды с последующей инкубацией (1 - 2 суток) для получения изолированных колоний;
5) исследование колоний. Для изучения выбирают однородные изолированные колонии, располагающиеся далеко от краев чашки и по штриху петли, окружают их чертой, нумеруют. Если исследование ведется не направленно (полиэтиологичный процесс и пр.), то на основании результатов визуального осмотра выбирают по 2-3 колонии всех имеющихся на чашке типов и делают с них мазки. При исследовании колоний, выросших на питательной среде отмечают наиболее важные признаки – цвет колонии, размер, влажность, форму края, форму поверхности и другие признаки, помогающие в дальнейшем идентифицировать выделенные бактерии;
6) пересев выбранных колоний на среды накопления для получения микробной массы, достаточной для идентификационных исследований. Для этого с остатка колоний, в мазке которой выявлены однородные по форме и окраске бактерии, петлей забирают часть культуры и засевают на скошенный в пробирке МПА или специальную среду штрихом; в процессе инкубации необходимо получить сплошной, а не изолированный, рост колоний;
8) определение чистоты выросшей на скошенных средах культуры путем макроскопического осмотра роста и микроскопии мазка из него;
9) идентификация выделенной чистой культуры и в случае необходимости (по требованию клинициста, эпидемиолога) определение различных биологических свойств;
10) заключение о видовой принадлежности выделенной культуры и ее свойствах.