Рутин-3-рутинознд кверцетина
1 г (точная навеска) измельченной травы гречихи (размер частиц 1 мм) помещают в круглодонную колбу вместимостью 100 мл, добавляют 30 мл 95%-ного этилового спирта. Содержимое колбы взвешивают. Затем к колбе присоединяют обратный (шариковый) холодильник и проводят экстракцию на кипящей водяной бане в течение 1,5 ч. После этогб колбу охлаждают до комнатной температуры, взвешивают и доводят до первоначальной массы спиртом. Этанольный экстракт фильтруют через бумажный фильтр. 20 мл полученного экстракта упаривают досуха, сухой остаток растворяют в 5 мл этилового спирта, фильтруют через бумажный фильтр.
0,03—0,05 мл полученного экстракта наносят на линию старта стеклянной пластинки 9 X 15 см с закрепленным слоем силикагеля марки ЛС 5/40 (Чехословакия) в виде полос — три полосы исследуемого раствора и одну полосу «свидетеля». Пластинку сушат на воздухе в течение 10 мин и хроматографируют в системе н-бутанол— ледяная уксусная кислота — вода (4:1: 2). После того как фронт растворителя пройдет 11—12 см, пластинку вынимают из камеры и сушат на воздухе до исчезновенйя запаха растворителей. В УФ свете отмечают пятна рутина, флуоресцирующие темно-коричневьщ светом (Rf ~ 0,68). Отмеченные зоны силикагеля с рутином и зон^ холостого опыта количественно переносят в колбы вместимостыс 25 мл и элюируют 10 мл смеси диоксан — вода 1 : 1 при встряхи» вании в течение 1 ч. Раствор фильтруют через бумажный фильтр!
Оптическую плотность полученных элюатов измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волнн 363 нм на фоне элюата холостого опыта. ,
Процентное содержание рутина в сырье в пересчете на абсолютна сухое сырье вычисляют по формуле
KiVjVsDm 100
Vy?{o/°Mm(100-E/)-0,667/'
где Ki — коэффициент элюирования (1,195); Vt — объем этанол** ного экстракта после растворения сухого остатка, мл; У2 — объе|
этанольного экстракта, взятый для нанесения на хроматограмму, мл; V3 — объем элюата; Dm — оптическая плотность раствора при Я = 363 нм; DJ% — удельный показатель поглощения рутина при % = 363 нм (268,4); т — масса навески сырья, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %; 0,667 — коэффициент пересчета на 20 мл экстракта; I — толщина слоя, см.
Реактивы и оборудование: этиловый спирт (этанол); бутиловый спирт (н-бутанол); уксусная кислота (лед.); диоксан; силикагель марки JIC5/40; рутин.
Бумага фильтровальная; тсолбы круглодонные с нормальным шлифом вме* стимостью 100 мл; колбы мерные вместимостью 20 мл; колбы плоскодонные вместимостью 50 мл; холодильники (обратные) стеклянные лабораторные с нормальным шлифом; воронки стеклянные для фильтрования диаметром 5 см; пластинки стеклянные для ТСХ размером 9 X 15 см; фильтры стеклянные № 4; пипетки измерительные вместимостью 1 мл; бюксы с притертыми крышками; сита с диаметром отверстий 1 мм; весы ручные; весы лабораторные аналитические; шкаф сушильный лабораторный; эксикатор; спектрофотометр СФ-4А.
Методика количественного определения суммы флавоноидов в соцветиях пижмы обыкновенной (Flores Tanaceti). 1 г (точная навеска) измельченных соцветий пижмы помещают в пакетик из фильтровальной бумаги и экстрагируют в аппарате Сокслета (вместимостью 100 мл) хлороформом в течение 3 ч. Хлороформное извлечение отбрасывают, а пакетик с навеской высушивают и экстрагируют в круглодонной колбе с обратным холодильником на водяной бане 30 мл метилового спирта в течение 3 ч, периодически перемешивая. Берут 20 мл извлечения и метиловый спирт отгоняют досуха. Сухой остаток растворяют в 20 мл дистиллированной воды, количественно переносят в делительную воронку вместимостью 50 мл и очищают дважды по 15 мл четыреххлористым углеродом.
Очищенный водный экстракт пятикратно обрабатывают 20 мл этил ацетата, дожидаясь' каждый раз полного расслаивания фаз. Объединенный этил ацетатный'экстракт упаривают в вакууме досуха и сушат остаток в течение I ч в сушильном шкафу при / = 65 °С. Высушенный остаток растворяют в небольшом объеме этилового спирта и переносят количественно в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем до метки этиловым спиртом (раствор А). 0,5 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 50 мл и объем доводят этиловым-спиртом до метки (раствор Б).
Определяют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при А, == 330 нм.
Процентное содержание суммы флавоноидов х вычисляют по формуле
25Д/СЮ0
где D — оптическая плотность испытуемого раствора; 25 — объем раствора А, мл; К — коэффициент разведения раствора А, равный 100; £'% — удельный показатель поглощения, равный 560,8; т — навеска сырья в расчете на взятый аликвот, г; w — потеря в массе сырья при высушивании, %; / — толщина слоя, см.
Реактивы и оборудование: этиловый спйрт (этанол); метило-J спирт (метанол); хлороформ; четыреххлористый углерод; этилацетат; вода4тил. j
Бумага фильтровальная; аппарат Сокслета; колбы плоскодонные вмести-1 гью 200 мл; колбы круглодонные с нормальным шлифом вместимостью 100 мл; - бы мерные вместимостью 25 и 50 мл; пипетки измерительные вместимостью, i 20 мл; цилиндры мерные на 50 и 100 мл; воронки делительные вместимостью ил; бюксы с притертыми крышками; весы ручные; весы лабораторные анали- еские; эксикатор; установка для отгонки растворителей; шкаф сушильный j ораторный; спектрофотометр СФ-4А. "t,
Методика количественного определения суммы флавоноидов в траве- педецы копеечниковой (Herba Lespedezae hedysaroidis). В основу^ фаботанного метода количественного определения суммы флаво-й адов в надземной части леспедецы копеечниковой (Lespedezm lysazoides сем. бобовых — Fabaceae (Leguminosae)) положено вы-| 1ение суммы флавоноидов и определение оптической плотности! атвора в этиловом спирте при длинноволновом максимуме поглсГ-| ния (353 нм) с последующим расчетом процентного содержания! удельному показателю поглощения чистого гомоориентина: >1
гомоориентин , j
(лютеолин-б-С-р-О-глюкопиранозид) •
|
Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья (размер частищ -2 мм) экстрагируют этиловым спиртом в аппарате Сокслета течение 4 ч. Извлечение упаривают досуха, сухой остаток раствш нот в 10 мл горячего 10%-ного NaCl, раствор охлаждают, фильт| тот через вату в колонку полиамидного сорбента (диаметр kw >нки 2,5 см, количество полиамида 1,5 г). Колбу повторно промыв нот 5 мл 10%-ного NaCl и раствор фильтруют в колонку с полиа^ адом. з
Сумма флавоноидов адсорбируется в верхнем слое полиамида^ олонку с полиамидом промывают 30 мл воды. Элюирование суммы навоноидов с сорбента проводят 50 мл этилового спирта. Когдй >на флавоноидов подходит к нижней части сорбента (в УФ свЩ фактерное свечение), раствор собирают в мерную колбу вмести^ эстью 50 мл. Раствор доводят спиртом до метки и тщательно nepej гшивают (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колб^ лестимостью 50 мл и объем доводят до метки этиловым спиртом! олученный раствор после тщательного перемешивания спектра
J
! • j фотометрируют при А, = 353 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Процентное содержание суммы флавоноидов х в абсолютно сухом сырье в пересчете на гомоориентин рассчитывают по формуле
50-50- 1.01РК100 662DK 381,4т (100—w) ** т (100—а>) *
где т — масса навески сырья, г; D — оптическая плотность исследуемого раствора при = 353 нм; 50 — объем раствора А, мл; 50 — число разведения; 381,4 — удельный показатель поглощения гомоориентина при \тйХ = 353 нм; w — потеря в массе сырь» при высушивании, %; К — инструментальная поправка; 1,01 — поправочный коэффициент при элюировании суммы флавоноидов с полиамидного сорбента.
Величину инструментальной поправки (К) на используемые кюветы и спектрофотометр определяют следующим образом. Точную навеску дихромата калия (ДЮ, высушенного до постоянной массы 50 мг (квалификация «ХЧ», ГОСТ 4220—75), растворяют в 1 л 0,-005 М HaS04 и определяют оптическую плотность Dраствора при X = 353 нм в кювете с толщиной слоя 1 см. Вычисляют экспериментальную величину удельного показателя поглощения дихромата калия (Е\Ъ по формуле
VD353
I
(£!ем)дк"
т