Факторы ингибирования подразделяют на специфические и неспецифические. Обратимое ингибирование может быть конкурентное и неконкурентное
А затем обратись к практике,
порожденной этой наукой».
Леонардо да Винчи.
«Книга о живописи»
ТЕТРАДЬ 1 : ФЕРМЕНТЫ.
Ферменты- высокоспециализированные белки
Биохимические реакции, необходимые для функционирования организма, строго детерминированы, генетически запрограммированы и создают всю картину обмена веществ и свои особенности метаболизма, характерные для данного вида.
Практически все реакции, избранные природой для осуществления онтогенеза, протекают в организме с участием белков-ферментов.
Информация о первичной структуре белка закодирована в соответствующем ему структурном гене. Выполняется закон:
Ген -> белок-фермент – > одна биохимическая реакция.
В постулате «одна реакция» проявляется специфичность фермента, которая может быть:
А. субстратная абсолютная ( единственное вещество является субстратом этого фермента.
Б. субстратная групповая, относительная (вещества одного класса или сходного строения являются субстратами фермента)
В. стерео (в отношении пространственного строения – геометрических и оптических изомеров)
Г. каталитическая (реализация одного направления реакции из нескольких возможных)
Все множество реакций, происходящих в организме, можно разделить на 6 типов,
в связи с этим предложена классификация ферментов, включающая 6 классов.
Оксидоредуктазы 4. лиазы
Трансферазы 5. изомеразы
Гидролазы 6. лигазы( синтетазы)
* ( соответствие номера класса и название класса следует заучить )
По составу ферменты бывают
а. простые белки
б. сложные белки, состоящие из белковой части ( апофермента) и небелковой части
( кофермента). Совокупное название всего сложного фермента – холофермент.
Химическая природа коферментов - органические молекулы( гем, нуклеотиды ФАД, НАД+, витамины В-1, В-6, В-12, С, биотин, липоевая, фолиевая кислоты и др.) , катионы металлов (цинк, медь, марганец и др.)
Признак специфичностиопределяет белковая часть фермента, направляя каталитические возможности кофермента на нужный путь. Например, витамин В-6 может быть коферментом в составе трансаминаз ( класс трансферазы) и в составе декарбоксилаз аминокислот ( класс лиазы). Исследование активности трансаминаз АСТ и АЛТ широко применяется в клинической лабораторной диагностике.
Ферменты, обладающие одинаковой специфичностью, но отличающиеся строением первичной структуры белка, называются изоферментами. Изоферменты характеризуются различными физико-химическими свойствами: термолабильность. величина рI, электрофоретическая подвижность, Км
( рI- изоэлектрическая точка, Км – константа Михаэлиса -см. объяснения ниже в тексте)
Изоферменты локализуются в различных органах, появляются на разных этапах жизни (изменения в онтогенезе) или при изменении физиологических условий, осуществляя адаптацию. Как правило, для них характерна четвертичная структура, представленная вариантами сочетаний четного числа двух различных субъединиц.
Хорошо изученный фермент ЛДГ состоит из 4 субъединиц, представленных набором двух различных полипептидов : Н( heart ) и M ( muscle). Поэтому существует 5 изоферментов ЛДГ, отличающихся комбинациями субъединиц:
ЛДГ1 НННН ЛДГ2Н ННМ ЛДГ 3ННММ
ЛДГ 4 НМММ ЛДГ5 НМММ
.Знание изоферментного спектра органов широко используется в энзимодиагностике.
Ферменты катализируют
-только энергетически возможные реакции,
-направление реакции в процессе катализа изменяться не может,
- любой катализатор( в т.ч. фермент) в процессе реакции не расходуется.
К особенностям ферментативного катализа относятся:
* высокие скорости реакций
* физиологические условия ( температура в предела 36-38 0 С , значение рН 6,9 – 7,5)
* высокая специфичность
* возможность регуляции скорости реакции
Функции ферментов обеспечиваются их пространственным строением.
На поверхности белка фермента выделяют особый активный центр, в составе которого есть 2 различных по функциям участка :
субстратный ( служит для связывания субстрата). Формируется с участием радикалов аминокислот, которые оказываются сближенными благодаря образованию третичной пространственной структуры , изменение которой нарушает функции субстратного центра.
каталитический( в нем проходит превращение субстрата в продукт реакции). Именно в каталитическом участке сложного белка-фермента находится кофермент,а в случае простого белка фермента каталитический центр вновь формируется радикалами аминокислот.
Субстратный и каталитический участки находятся в кооперативном взаимодействии. Достаточно часто в составе фермента присутствуют различные ионы, располагающиеся вне активного центра, но необходимые для полноценного функционирования фермента - их называют кофакторы.
У особых регуляторных ферментов есть дополнительный участок – аллостерический центр, который связывает особые вещества модуляторы, или эффекторы, способные изменять активность фермента. Лекарственные препараты могут действовать как аллостерические активаторы или ингибиторы .
Термин аллостерический ( пространственно иной- греч) ввел Ж. Моно- французский биохимик и микробиолог лауреат Нобелевской премии ( 1965 )
Ошибки в аминокислотной последовательности первичной структуры белка наиболее опасны в тех случаях, когда аминокислоты участвуют в образовании функционально важных участков фермента.- возникают дефектные ферменты( одна из причин наследственной энзимопатии).
Скорость ферментативной реакции зависит от факторов:
* температуры
* величины рН среды
* концентрации энзима ( зависимость линейная)
* концентрации субстрата ( зависимость описывается гиперболой, при достаточном увеличении концентрации субстрата скорость перестает расти , достигает максимальной и сохраняется постоянной при дальнейшем увеличении концентрации субстрата., в отдельных случаях может и понижаться.)
В обоих случаях ( температура., рН ) наблюдается максимальное значение скорости реакции при определенных оптимальных значениях этих величин. При отклонении от оптимального значения в обе стороны скорость реакции снижается.
Снижение температуры, как правило, вызывает обратимую денатурацию белка-фермента вследствие повышения энергетического барьера реакции. Повышение температуры выше Т ( опт) сопровождается необратимой денатурацией белка, поскольку белки термолабильны. Уместно напомнить, что термин денатурация белкаозначает потерю нативных ( природных) свойств белка.
Изменение величины рН сопровождается нарушением конформации третичной структуры белка, которая формирует активный или аллостерический центры : изменяется заряд белка., меняется характер ионного взаимодействия, число водородных связей.
Знание вышеперечисленные зависимостей позволяет научно объяснить :
1. необходимость поддержания кислотно-основного гомеостаза организма, который нужен для обеспечения функций белков- ферментов, белков-рецепторов.
2 при осуществлении энзимотерапии: выбор дозы, условия применения лекарственного препарата, содержащего ферменты.
Локализация и компартментализация ферментов в клетке и тканях.
Ферменты по локализации делят на 3 группы:
I – общие ферменты (универсальные)
II - органоспецифические
III - органеллоспецифические
Общие ферменты обнаруживаются практически во всех клетках, обеспечивают жизнедеятельность клетки, катализируя реакции биосинтеза белка и нуклеиновых кислот, образование биомембран и основных клеточных органелл, энергообмен. Общие ферменты разных тканей и органов, тем не менее, отличаются по активности.
Органоспецифичные ферменты свойственны только определенному органу или ткани. Например: Для печени – аргиназа. Для почек и костной ткани – щелочная фосфатаза. Для предстательной железы – КФ (кислая фосфатаза). Для поджелудочной железы – α-амилаза, липаза. Для миокарда – КФК (креатинфосфокиназа), ЛДГ, АсТ и т.д.
Внутри клеток ферменты также распределены неравномерно. Одни ферменты находятся в коллоидно-растворенном состоянии в цитозоле, другие вмонтированы в клеточных органеллах (структурированное состояние).
Органеллоспецифические ферменты. Разным органеллам присущ специфический набор ферментов, который определяет их функции.
Органеллоспецифические ферменты это маркеры внутриклеточных образований, органелл:
-Клеточная мембрана: ЩФ (щелочная фосфатаза), АЦ (аденилатциклаза), К-Nа-АТФаза
-Цитоплазма: ферменты гликолиза, пентозного цикла.
-ЭПР: ферменты обеспечивающие гидроксилирование (микросомальное окисление).
-Рибосомы: ферменты обеспечивающие синтез белка.
- Лизосомы: содержат гидролитические ферменты, КФ (кислая фосфатаза).
- Митохондрии: ферменты окислительного фосфорилирования, ЦТК (цитохромоксидаза, сукцинатдегидрогеназа), β-окисления жирных кислот.
-Ядро клетки: ферменты обеспечивающие синтез РНК, ДНК ( РНК-полимераза, НАД-синтетаза).
Ферменты – катализаторы и регуляторы биохимических реакций в клетке, поддерживающие постоянство внутренней среды организма.
Ферментативные биохимические реакции отличаются от химических реакций тем, что в организме необходимо изменять скорость биохимической реакции в соответствии с изменением внешних и внуиренних условий.
Изменение и регуляция скоростей биохимических реакций – условие поддержания г о м е о с та з а.
Увеличение скорости реакции происходит с участием активаторов, а снижение – ингибиторов.
Ингибирование ферментативной активности может происходить под действием различных факторов обратимо и необратимо.
Факторы ингибирования подразделяют на специфические и неспецифические. Обратимое ингибирование может быть конкурентное и неконкурентное.
.
Неспецифические факторы ингибирования оказывают свое действие на большинство белков-ферментов: к ним относят значительное отклонение температуры и величины рН от физиологической нормы, сильное электромагнитное и ультразвуковое воздействие, дегидратирующие вещества( спирты, ацетон, эфир), ионы тяжелых металлов( свинца, ртути, серебра).
Специфические факторы действуют избирательно на отдельные группы ферментов, действие обычно затрагивает активный центр, например, оксид углерода(+2) взаимодействует с ионом железа в системе гема.
Конкурентное ингибирование происходит при связывании ингибитора - структурного или пространственного аналога субстрата- с активным центром фермента. На конкурентный тип ингибирования указывает увеличение значения Км. По этому механизму действуют лекарственные препараты- антиметаболиты
Регуляция метаболических процессов опирается на возможность регуляции скоростей биохимических реакций. Следует выделить два принципиально различных принципа:
- изменение каталитической активности белка- фермента ( быстрый путь)
- изменение количества белка – фермента ( более медленный путь)
Изменение количества белка фермента осуществляется путем регуляции синтеза на уровне процесса транскрипции и трасляции.
Регуляция каталитической активности осуществляется несколькими способами:
· аллостерическая регуляция
· частичный протеолиз ( превращение неактивного профермента в активный фермент).
· фосфорилирование/дефосфорилирование фермента
Фосфорилирование осуществляют особые ферменты протеинкиназы( ПК), а дефосфорилирование – протеинфосфатазы ( ПФ).
· белок/ белковое взаимодействие.
Осуществляется двумя путями:
- ассоциация или диссоциация протомеров фермента
- активация фермента вследствие активации регуляторного белка, находящегося в мембране клетки, и образования внутриклеточного химического сигнала( посредника ) :
А. Гормон, лекарственный препарат ->R( рецептор) -> G - белок –> АЦ(аденилатциклаза) - > цАМФ –> активная ПК (А) –>фосфорилированный фермент –> увеличение скорости реакции -> увеличение содержания метаболита( метаболический ответ)
Б. Гормон, лекарственный препарат ->R( рецептор) -> G - белок –> Фосфолипаза С - > Фосфолипид фосфатидилинозитолдифосфат (ФИДФ) –> продукты гидролиза: ИТФ(инозитолтрифосфат) и диацилглицерол(ДАГ) –> увеличение внутриклеточного кальция –> образование комплекса Са /кальмодулин ->активация фермента -> увеличение скорости реакции -> увеличение содержания метаболита( метаболический ответ)
Ферменты в медицине .
Знание свойств ферментов, их локализации в клетках и органах используется в энзимодиагностике, энзимотерапии, необходимо для понимания причин развития энзимопатий.
Энзимодиагностика- использование знания активности, распределения ферментов для постановки диагноза, оценки тяжести состояния больного и качества лечения.
Ферменты, выделяющиеся из ткани, органа в кровь называются индикаторными.
При заболевании органа, в начальный период развития патологического состояния
содержание этих ферментов в крови увеличивается ( АСТ, АЛТ, КК ).
Ферменты, которые специализированно выделяются каким- либо органом в кровь для выполнения в ней биохимических функций, называются секреторными : ферменты свертывающей и антисвертывающей систем крови
Ферменты, которые в норме выделяются в просвет ж.к.т. и попадают в кровь в результате воспалительных и некротических процессов в желчном пузыре, поджелудочной железе, называются экскреторными( трипсин, амилаза, щелочная фосфатаза)
Ферменты, имеющие преимущественную локализацию в определенном органе, называются органоспецифичными ( печень –аргиназа, АЛТ, сердце- ЛДГ1, АСТ, креатинкиназа КВ, мозг-креатинкиназа ВВ, мышцы – креатинкиназа ММ , ЛДГ-5)
Ферменты, специфичные для определенной клеточной структуры, называются органеллоспецифичными ( митохондрия - сукцинатДГ, цитоплазама- ЛДГ ), применяют также термин маркерные.
Энзимотерапия имеет определенные ограничения :
- нативный белок-фермент обладает антигенной активностью, денатурированный белок теряет антигенные свойства , но одновременно и ферментативную активность
- подверженность ферментов протеолизу
.Энзимы использует как препараты заместительной терапии( ферменты желудочно-кишечного тракта(.пепсин, трипсин и препараты с их содержанием- панкреатин, абомин, панзинорм и другие. )
Несомненным достоинством лекарственных препаратов- ферментов является их высокая специфичность действия и широкое применение их в лечении различных заболеваний
связано, именно, с этим важнейшим отличительным свойством.
Для энзимотерапиииспользуют, как правило, ферменты класса «гидролазы», обладающие способностью гидролизовать пептидные связи( трипсин, химотрипсин, эластаза., коллагеназа) , гликозидные( гиалуронидаза, лидаза, стрептокиназа, ДНК-аза, РНК-аза).
. Фибринолизин - компонент естественной противосвертывающей системы организма-используют в лечении тромбозов.
Стрептолиаза, выделяемая из культуры ß- гемолитического стрептококка группы С – проявляет тромболитическую активность
Рибонуклеаза деполимеризует РНК –задерживает образование РНК из вирусов, например, клещевого энцефалита.
Лидаза( гиалуронидаза) деполимеризует связи в гиалуроновой кислоте- применяют для предотвращения образования рубцов, контрактур суставов
Комплексное применение нескольких ферментов одновременно в одном препарате используется в системной энзимотерапии ( распространенный препарат вобэнзим)
Для медицинской науки огромное значение приобретает исследование причин возникновения энзимопатий- изменения активности ферментов. Традиционно принято говорить о снижении активности ферментов, но не меньшую роль в развитии патологических состояний приобретает повышенная активность ферментных систем по сравнению с нормой . Это касается, в первую очередь , увеличения активности ключевого фермента в синтезе холестерина( фермент Гидроксиметилглутарил-КоА-редуктаза К 1.1.1.88 ) и ряда ферментов свертывающей системы крови.
Энзимопатии( нарушение функционирования ферментов) могут быть:
- наследственные ( отсутствие фермента, мутации в гене и изменения в первичной
структуре белка, появление нетипичных для данного органа изоферментных форм, врожденные нарушения обмена витаминов- всасывания, активации в клетке)
-приобретенные( наличие ингибиторов, усиленный протеолиз ферментов, общая белковая не достаточность, гипо- и авитаминозы, создающие дефицит коферментов).
Наследственные энзимопатии по типу нарушений метаболизма делят на:
1. нарушения обмена аминокислот: фенилкетонурия, альбинизм, алкаптонурия и др.;
2. нарушения углеводного обмена: галактоземия, наследственная непереносимость фруктозы, гликогенозы;
3. нарушения липидного обмена: липидозы;
4. нарушения обмена нуклеиновых оснований: подагры, синдрома Леш-Нихана и др.;
5. нарушение обмена в соединительной ткани: мукополисахаридозы, хондродистрофия и др.;
6. дефекты ферментов в ЖКТ: муковисцидоз, целиакия, непереносимость лактозы и др.
7. нарушения обмена стероидов и т.д.
Витамины – коферменты влияют на интенсивность синтеза белка-апофермента: недостаток витаминов( гиповитаминоз) снижает скорость образования белка, а поступление витаминов увеличивает скорость образования фермента. На этом основана витаминотерапия ,которая широко используется в практической медицине.
Отсутствие витаминов сопровождается тяжелыми изменениями метаболических процессов. Но надо помнить, что избыточное поступление витаминов в составе лекарственных препаратов также может быть причиной развития патологических состояний( возникают ятрогенные болезни)
Недопустимы как гиповитаминозы, так и гипервитаминозы !
Многие гиповитаминозы и особенно авитаминозы имеют характерные симптомы ( проявления) и их выделяют в особую группу заболеваний -алиментарные болезни.
(см. таблицу 1)