Демонстрація 4. Пневмококи та менінгококи під мікроскопом
Вивчіть мікропрепарати налаштовані під демонстраційними мікроскопами, та зарисуйте їх. При розгляді та зарисовці препаратів зверніть увагу на форму та розміщення коків.
| Назва препарату, метод фарбування | Рисунок | Морфологічна характеристика бактерій |
| Streptococcus pneumoniae (чиста культура), фарбування генціан-віолетом | _________________________________ _________________________________ _________________________________ _________________________________ | |
| Neisseria meningitidis у спинномозковій рідині, фарбування метиленовим синім | _________________________________ _________________________________ _________________________________ _________________________________ |
Демонстрація 5. Набір барвників,таких, що застосовуються в бактеріологічних лабораторіях для фарбування препаратів.
Мета використання __________________________________________________________
___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________
Практична робота 3. «Мікроскопія готових препаратів з чистої культури
стрептококів, зафарбованих генціан-віолетом»
Матеріали та обладнання: імерсійна олія, готові фіксовані та пофарбовані генціан-віолетом препарати, мікроскоп.
Пофарбовані препарати бактерій мікроскопуються лише з використанням імерсійного об'єктива (х90).
Порядок та правила роботи з імерсійною системою:
1. Підняти конденсор Аббе до рівня предметного столика, повністю відкрити ірис-діафрагму.
2. Користуючись об'єктивом х8 та дивлячись в окуляр, не виймаючи його, за допомогою плескатого дзеркала досягти максимального освітлення поля зору.
3. На предметному столику розмістити забарвлений препарат стрептококів, нанести на нього імерсійну олію і закріпити клемами.
4. Повертаючи револьвер, установити над препаратом імерсійний об'єктив х90, під контролем зору занурити його в краплю імерсійної (кедрової) олії.
5. Дивлячись в окуляр правим чи лівим оком (не закриваючи іншого), спочатку макрогвинтом знайти контури зображення, потім мікрогвинтом досягти максимальної чіткості, вивчити й зарисувати препарат.
6. Після закінчення роботи підняти тубус, зняти предметне скло, обережно витерти серветкою імерсійний об'єктив від кедрової олії, повернути його в бік, опустити тубус.
| Назва препарату, метод фарбування | Рисунок | Характеристика морфологічних властивостей бактерій |
| Streptococcus pyogenes (чиста культура), фарбування генціан-віолетом | ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ |
Можливі помилки під час роботи з мікроскопом
1. Неправильний вибір дзеркальця.
2. Неправильна установка конденсора та ірис-діафрагми, що призводить до недостатньої освітленості об’єкта.
3. Неправильний вибір об’єктива для роботи.
4. Неправильна установка револьвера та інше.
Догляд за мікроскопом
Мікроскоп необхідно тримати в чистоті та запобігати механічним пошкодженням. При перенесенні його беруть за колонку та підтримують іншою рукою знизу за штатив. Перед початком роботи перевіряють справність мікроскопа. Особливу увагу необхідно звернути на чистоту оптики. Не треба торкатися руками до поверхні лінз – на них завжди залишаються відбитки пальців. Забруднення лінз окуляра можна виявити, рухаючи його під контролем зору. Не треба самостійно розбирати об’єктиви та регулювати механічні частини.
Після завершення роботи мікроскоп необхідно привести у порядок. Спеціальною серветкою ретельно протирають олію з імерсійного об’єктива, переводять револьвер на малий сухий об’єктив 8х, повністю відкривають діафрагму, трохи опускають конденсор, на предметний столик кладуть серветку для прибирання мікроскопа та опускають тубус мікроскопа максимально вниз. Покривають мікроскоп поліетиленовим чохлом.
Практична робота 4. «Приготування мазка кишкової палички з культури, що вирощена у рідкому живильному середовищі (м’ясопептонному бульйоні). Фарбування фуксином Пфайфера, мікроскопування препарату ”
Матеріали та обладнання:пробірка з чистою культурою кишкової палички у МПБ, бактеріальна петля, пінцет, барвник – фуксин Пфайфера, склограф, спиртівка, сірники, марлеві серветки, імерсійна олія, мікроскоп.
Порядок роботи та методика приготування мазка з культури, що вирощена на рідкому живильному середовищі:
1. Для приготування мазка необхідно взяти чисте знежирене предметне скло.
2. Позначити місце нанесення матеріалу склографом із зворотного боку предметного скла.
3. Предметне скло провести через полум'я спиртівки (стерилізація). Робоча поверхня повернута до полум’я.
4. Петлю прожарити в полум’ї спиртівки, тримаючи її як олівець вертикально у правій руці. Два-три рази провести через полум’я і нижню третину петлетримача.
5. Не випускаючи петлі, лівою рукою взяти пробірку з культурою кишкової палички, що вирощена на МПБ. Пробку пробірки притиснути до долоні 4-м та 5-м пальцями, пробірку повільно крутити колоподібними рухами і витягнути з неї пробку.
6. Краї пробірки, не випускаючи пробки, провести через полум'я, петлю ввести в пробірку та охолодити об стінки пробірки.
7. Бактеріальною петлею набрати краплю культури з рідкого середовиша із дотриманням правил стерильності і обережності, не торкаючись стінок пробірки, вийняти її.
8. Далі провести пробку і відкритий край пробірки через полум’я, після чого її необхідно закрити і поставити у штатив.
9. Взяту культуру нанести на скло і, поступово розтираючи її, приготувати тонкий, рівномірний мазок округлої чи овальної форми діаметром 1 – 1,5 см.
10. Петлю прожарити у полум’ї спиртівки і вставити у штатив.
11. Висушити мазок на повітрі при кімнатній температурі.
12. Зафіксувати препарат фізичним способом – провести його 3 рази зверху полум’я спиртівки (мазок має бути зверху).
13. Пофарбувати препарат - нанести фуксин Пфайфера та потримати його 1 – 2 хвилини після чого барвник змити водою.
14. Промаркерувати препарат (рис. 2): зліва на предметному склі зазначити назву бактерій або матеріалу, що фарбується.
| Кишкова паличка Назва |
Рисунок 2 – Маркування мікропрепарату
15. Висушений у зошиті для висушування препаратів препарат покласти на предметний столик мікроскопа, нанести на нього краплю імерсійної олії.
16. Мікроскопувати пофарбований препарат, дотримуючись всіх правил мікроскопії з використанням імерсійного об’єктива (див. робота 3).
17. Результати мікроскопії занести до таблиці.
| Назва препарату, метод фарбування | Рисунок | Характеристика морфологічних властивостей бактерій |
| Escherichia coli (чиста культура), фарбування фуксином Пфайфера | ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ ________________________________________ |