Работа 2. Определение количества эритроцитов

Оснащение:микроскоп,смеситель для подсчета эритроцитов, камера Горяева, 3% раствор хлорида натрия, чашка для разбавляющего раствора, вата.

Ход работы: камеру тщательно вымойте и насухо вытрите. Камеру поместите под микроскоп и рассмотрите сетку Горяева вначале при малом, а затем при большом увеличении. На участок камеры, где нанесены сетки, уложите обезжиренное покровное стекло, при этом нижняя поверхность камеры должна находиться на третьих пальцах обеих рук, двумя вторыми пальцами придерживайте ее спереди. Двумя большими пальцами притрите покровное стекло, плавно продвигая его по поверхности боковых прямоугольных пластинок до появления цветных колец Ньютона в местах соприкосновения покровного стекла с поверхностью боковых пластинок камеры.

В каплю крови погрузите кончик смесителя для эритроцитов (рис.4а), держа вертикально, и наберите кровь до метки 0,5, следя, чтобы в капилляр не попали пузырьки воздуха. Оботрите конец капилляра и перенесите его в чашку с гипертоническим раствором. Продолжая держать смеситель вертикально, наберите раствор до метки 101, после чего смеситель переведите в горизонтальное положение. Зажав оба конца меланжера между третьим и первым пальцами руки, в течение 1 минуты перемешайте кровь.

Получится разведение 1:200. Заполните камеру Горяева. Для этого выпустите из смесителя на вату три капли, а четвертую нанесите на среднюю площадку камеры у края покровного стекла. Капиллярными силами капля сама втягивается под покровное стекло и заполняет камеру. Следите, чтобы в пространстве над сеткой не было пузырьков воздуха и избытка жидкости. Камеру положите на столик микроскопа и настройте его на малое увеличение (объектив 8-9, окуляр 10 или 15). Эритроциты считайте в пяти больших разделенных квадратах (5х16=80 малых), расположенных по диагонали. Подсчет ведите в пределах маленького квадрата по рядам (от верхнего до нижнего). Во избежание двукратного подсчета клеток, лежащих на границе между малыми квадратами, пользуетесь следующим правилом: к данному квадрату пренадлежат все эритроциты, лежащие внутри квадрата, и те, которые находятся на его верхней и левой границах (правило Егорова).

Вычислите количество эритроцитов (Э) в 1 литре крови по формуле:

Nх4000х200

Э = -------------------х 10⁶,

где, N – количество эритроцитов в пяти больших квадратах,

4000 – множитель, приводящий объем малого квадрата (1/4000 мкл) к объему 1 мкл крови,

200 – поправка на степень разведения крови,

80 – количество малых квадратов, в которых был произведен подсчет,

10⁶ – количество микролитров в 1 литре.

Оформление результатов работы: полученные результаты подсчета эритроцитов занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.

Работа 3. Определение количества лейкоцитов.

Оснащение:микроскоп, смеситель для подсчета лейкоцитов, камера Горяева, чашка для разбавляющего раствора, 5% раствор уксусной кислоты, подкрашенный метиленовым синим, вата.

Ход работы: наберите кровь до метки 0,5 в смеситель для лейкоцитов (рис. 4б). Затем разбавьте ее в 20 раз 5% раствором уксусной кислоты, набрав ее до метки 11. Перемешайте. Заполните камеру Горяева.

Подсчитайте количество лейкоцитов в 100 больших нерасчерченных квадратах, которые в сетке счетной камеры сгруппированы по четыре (см. рис. 3в).

Вычислите количество лейкоцитов (Л) в 1 литре крови по формуле:

Nх4000х20

Л = ----------------х10⁶,

где, N – количество лейкоцитов в 100 больших квадратах,

4000 – множитель, приводящий объем малого квадрата (1/4000 мкл) к объему 1 мкл крови,

20 – поправка на степень разведения крови,

1600 – количество малых квадратов, в 100 больших, в которых был произведен подсчет (100х16=1600),

10⁶ – количество микролитров в 1 литре.

Оформление результатов работы: полученные результаты подсчета лейкоцитов занесите в тетрадь протоколов опытов, оцените их и сделайте вывод, сравнив с нормой.