Материал для исследования: слизь задней стенки носоглотки, взятая тампоном. При наличии кашля применяют метод «кашлевых пластинок»
Идентификацию возбудителя проводят по морфологическим, культуральным, антигенным (с О-агглютинирующими сыворотками к 1, 14, 12 и 7 антигенам или в РИФ с антителами, меченными флюоресцеином) и биохимическим свойствам. Параллельно возбудителя коклюша дифференцируют от других видов бордетелл (см. табл. 12).
B. рarapertussis дают рост на МПА в виде коричневых колоний, выделяют уреазу, используют цитрат, оксидазный тест отрицательный, не имеют капсул, агглютинируются антисывороткой к антигену 14.
B. рertussis растут только на специальных средах, на КУА – в виде капелек ртути.
Имеют капсулу, гемолиз на кровяном агаре, положительная внутрикожная проба. Агглютинируются с сывороткой к антигену 1. B. bronchiseptica – подвижны, агглютинируются сывороткой к антигену 12. Остальные свойства как у B. parapertussis.
Серологический метод – выявляют антитела в парных сыворотках больного, начиная со II периода заболевания в реакции агглютинации, РСК, РПГА или ИФА. Определяют также IgG и IgA против филаментозного гемагглютина и против токсина B. рertussis.
Аллергическая кожная проба – учет проводится через 20-24 часа (ПЧЗТ).
Профилактика. Неспецифическая включает изоляцию и лечение больных.
Осуществляют введение иммуноглобулинов направленного действия контактным, организуют карантин на 14 дней для детей до 7 лет.
Для специфической профилактики применяют АКДС (ассоциированную коклюшно-дифтерийную столбнячную вакцину) с 3-х-месячного возраста 3 раза с интервалом 45 дней. Ревакцинация моновакциной из убитых коклюшных бактерий в I фазе. Испытывается вакцина, состоящая из коклюшного анатоксина, гемагглютинина, пертактина (мембранный протеин) и антигена микроворсинок. Эту вакцину можно применять и для ревакцинации, и для первичной вакцинации.
Для лечения применяют антибиотики – гентамицин, ампициллин, а также препараты иммуноглобулинов, витамины
Лабораторная диагностика, лечение и профилактика шигеллезов.
Основным методом диагностики дизентерии является бактериологический, основанный на выделении и идентификации возбудителя. В качестве исследуемого материала берут испражнения. В условиях стационара испражнения собирают на поверхности бумажной тарелки или салфетки, которые вкладывают в судно, предварительно вымытое кипятком, высушенное и не содержащее дезинфицирующих веществ. Наилучшим способом является взятие фекалий тампоном из прямой кишки. Посев производят немедленно после получения испражнений до приема антибиотиков. Используют среды Мак Конки или Плоскирева, а также среды накопления (жидкая селенитовая среда особенно хорошо стимулирует рост шигелл Зонне).
Идентификацию шигелл проводят по следующим свойствам: шигеллы неподвижные, дают отрицательную реакцию с метиловым красным, не продуцируют ацетилметилкарбинол (реакция Фогеса-Проскауэра), не утилизируют лизин. Образование индола характерно для половины штаммов серогрупп А, В, С. Шигеллы не ферментируют лактозу и образуют бесцветные колонки на средах Мак Конки или Плоскирева. На агаре Клиглера ферментируют только глюкозу, не образуют газ (кроме некоторых вариантов S. flexneri) и сероводород.
Выделенные культуры исследуют в реакции агглютинации с поливалентными сыворотками. Если культура обладает всеми биохимическими признаками шигелл, но не реагирует с сыворотками, ее следует прокипятить в течение 30 мин, т.к. многие штаммы обладают термолабильным К-АГ, тормозящим взаимодействие АТ с О-АГ.
Для диагностики стертых, бессимптомных форм дизентерии можно использовать серологический метод (РПГА с эритроцитарным диагностикумом шигелл Флекснера и Зонне). Кожно-аллергическая проба с дизентерином применяется редко, т.к. после заболевания длительное время сохраняется ПЧЗТ. В качестве экспресс-диагностики эпидемических вспышек дизентерии используют РИФ, РПГА с антительными диагностикумами, ИФА.
Лечение. Из этиотропных средств при лечении больных назначают нитрофураны (фуразолидон, фурадонин), бисептол, для более тяжелых форм – фторхинолоны (ципробай, таривид).
Профилактика. Большое значение имеют санитарно-гигиенические мероприятия, направленные на разрыв механизма передачи возбудителей: санитарный контроль за источниками водоснабжения, пищевыми продуктами, соблюдение личных санитарно-гигиенических правил. Вакцинация не проводится из-за отсутствия эффективных вакцин.
Лабораторная диагностика хеликобактерной инфекции. Профилактика и лечение.
Материал для исследования: биоптаты слизистой оболочки желудка и двенадцатиперстной кишки.
Бактериоскопический метод. Выявляют бактерии в препаратах, окрашенных гематоксилин-эозином или акридиновым оранжевым. В фазовоконтрастном микроскопе определяют характерную подвижность.
Бактериологический метод. Производят посев материала на кровяной агар с амфотерицином, культивируют в термостате 5-7 суток при 37° в микрофильных, аэробных и анаэробных условиях. Вид микроба определяют по характерной морфологии и виде колоний, способности к росту только в микроаэрофильных условиях, по наличию оксидазной и уреазной активности.
Профилактика и лечение. Специфическая профилактика не разработана. Для лечения используются схемы, включающие ингибиторы желудочной секреции (блокатор протонного насоса омепразол), антибиотики (кларитромицин, азитромицин, доксициклин, метронидазол), коллоидный субцитрат висмута (Де-нол).
Хеликобактерии: таксономия, свойства, факторы патогенности, роль в развитии язвенной болезни и рака желудка.
Таксономия. К роду Helicobacter в настоящее время относится до 10 видов микроорганизмов (Helicobacter pylori, Helicobacter heilmannii, Helicobacter mustelae, Helicobacter felis и т.д). Основным возбудителем заболеваний у человека является H. pylori. Определенное значение в патологии имеет H. heilmannii. Считается, что Helicobacter pylori играет существенную роль в патогенезе острого и хронического гастритов, язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки. Кроме того, инфекция Helicobacter pylori является предрасполагающим фактором в развитии рака желудка и лимфоцитарной опухоли желудочно-кишечного тракта (мальтомы).
Морфологические свойства. Это грамотрицательные, короткие, извитые S-образные бактерии средних размеров, подвижные, имеют 4-5 жгутиков, лофотрихи (рис. 17). Содержание Г+Ц составляет 35-37%.
Культуральные свойства. Хорошо растут в микроаэрофильных условиях, в аэробных и анаэробных условиях не растут. Температурный оптимум 37°С, не растут при температуре 25-28 и 42°С, хорошо растут на кровяном агаре, на средах, содержащих 10% сыворотки. Не растут на средах, содержащих глицерин, желчные соли и NaCl.
Биохимические свойства. Оксидазо- и каталазоположительны, проявляют выраженную уреазную активность, обладают фосфатазой, образуют H2S, не свертывают молоко.
Антигены. Имеется О-АГ – ЛПС, Н-АГ, а также поверхностные мембранные белковые АГ (OMP-белки), по которым определяют типоспецифичность возбудителя с помощью моноклональных АТ.
Факторы патогенности. В патогенезе существенное значение имеют адгезины возбудителя, вакуолизирующий цитотоксин (VacA), поражающий эпителий желудка, белок CagA – продукт генов островков патогенности, ферменты супероксиддисмутаза и каталаза.
Источник инфекции – больные люди.
Патогенез. При пероральном попадании возбудителя большое число бактерий скапливается в антральной части желудка, так как там мало клеток, секретирующих соляную кислоту, что помогает выживанию бактерий на поверхности эпителия. Проникая через слой слизи, хеликобактеры прикрепляются к эпителиальным клеткам (в области межклеточных ходов адгезины микроба связываются с мембранными гликолипидами, компонентами слизи), проникают в железы слизистой оболочки, разрушают слизистый слой и обусловливают контакт желудочного сока со стенкой органа. ЛПС стимулирует выделение ИЛ-8, миграцию нейтрофилов и способствует развитию острого воспаления. Локализация в области межклеточных ходов обусловлена хемотаксисом к местам выхода мочевины и гемина. Под действием фермента уреазы мочевина превращается в аммиак, который повреждает слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Кроме того, аммиак нейтрализует соляную кислоту желудка, способствуя выживанию хеликобактерий.
Клинические проявления не отличаются от симптомов гастродуоденитов. Инкубационный период – 7 суток. В острой фазе заболевания отмечается изменение рН желудочного сока, тошнота, рвота, в дальнейшем появляются симптомы язвенного гастродуоденита.
Микоплазмы: таксономия, свойства. Виды микоплазм – возбудителей респираторных инфекций.
Микоплазмы – уникальная группа прокариотов, которая характеризуется полным отсутствием клеточной стенки. Впервые с этой группой бактерий столкнулся Л. Пастер, изучая плевропневмонию крупного рогатого скота. В 1944 г. Итон выделил их из мокроты больного атипичной пневмонией. В 1962 г. микоплазмы были выделены в самостоятельный род.
Таксономия. Класс Mollicutes, порядок Mycoplasmatales.
Семейство Mycoplasmataceae включает 3 рода: род Mycoplasma, в него входят виды: M. pneumoniae (патогенный), M. hominis, М. arthritidis, М.genitalium, М. lipophilum, М.orale, М. buccale, М. primatum, М. salivarium и др. – условно-патогенные микоплазмы. Род Ureaplasma включает патогенный для человека вид U.urealyticum (14 сероваров). Третий род Acholeplasma включает непатогенный для человекавид А. laidlawaii.
Общие свойства
Морфологические. Мелкие (105-220 нм), грамотрицательные организмы, выражен полиморфизм, нет клеточной стенки, роль ее выполняет трехслойная ЦПМ, состоящая из стероидов, липидов и белков. ЦПМ регулирует внутриклеточный метаболизм, обеспечивает адсорбцию на эпителиальных клетках и эритроцитах. Микоплазмы имеют специальные липопротеиновые структуры для взаимодействия с рецепторами клеток макроорганизма, что способствует их персистенции в организме людей. Нет спор, капсул, жгутики есть не у всех видов.
Размножаются микоплазмы путем бинарного поперечного деления, фрагментацией клеток, почкованием и путем высвобождения множества элементарных телец, образующихся в нитях.
Культуральные свойства. Факультативные анаэробы. Культивируются в курином эмбрионе, культуре клеток и на специальных средах с высокой концентрацией серы, холестерином, кровью или сывороткой, белковыми гидролизатами. Холестерин стабилизирует мембрану клетки, обусловливает проникновение и утилизацию жирных кислот. Стерины являются источниками энергии. Колонии на этих средах мелкие, их сравнивают с «яичницей-глазуньей». Для дифференциации микоплазм от уреаплазм их выращивают на средах с мочевиной, аргинином или глюкозой и индикатором сульфатом марганца. Уреаплазмы разлагают мочевину и дают через 5-7 дней рост коричневых колоний, а микоплазмы мочевину не разлагают и дают рост бесцветных колоний. Источник инфекции – больной человек.
Путь передачи – воздушно-капельный.
Входные ворота – верхние дыхательные пути.
М.pneumoniae обладают выраженным тропизмом к базальным мембранам мерцательного эпителия. Адсорбция возбудителя приводит к продукции перекисей, и, следовательно, к цитотоксическому действию. Развиваются местные цитотоксические реакции в бронхах и прилежащих тканях. В процесс вовлекаются альвеолы. Возможна диссеминация процесса. В результате могут развиваться гемолитические анемии, артриты, энцефалиты, что связано с нарушением в иммунной системе, появляется ПЧЗТ и аллергические реакции типа иммунокомплексных и цитотоксических.
Иммунитет после острой респираторной инфекции сохраняется в течение 5-10 лет, обеспечивается антителами, макрофагами и Т-лимфоцитами. После стертых форм инфекции иммунитет кратковременный и слабо выражен.
Патогенез поражений урогенитального тракта.
Особенно опасен микоплазмоз для беременных, т.к. М.hominis и М.genitalium способны колонизировать эндометрий и плод, индуцировать выработку простагландинов и других метаболитов арахидоновой кислоты. Микоплазмоз в ранние сроки беременности приводит к ее прерыванию или задержке внутриутробного развития. В более поздние сроки беременности возможно инфицирование плода через систему кровообращения. Возникновение пороков развития плода связано с необратимыми поражениями хромосомного аппарата эмбриона. Возможно и интранатальное заражение плода во время прохождения через родовые пути больной матери.
Урогенитальные микоплазмозы передаются половым путем и по клиническим проявлениям почти не отличаются от урогенитальных поражений другой этиологии.
Иммунитет нестойкий, гуморальный, в меньшей степени клеточный. Обеспечивается IgА, IgG и холодовыми IgМ к поверхностным гликолипидам. В процессе заболевания развивается ПЧЗТ.
M.arthritidis может быть причиной воспаления синовиальных оболочек суставов. Патогенез таких артритов требует изучения, но достоверно установлено, что M.arthritidis может персистировать в синовиальной жидкости и тканях пораженных суставов.
Сальмонеллы: таксономия, свойства, резистентность.
Род Salmonella назван в честь Дэвида Сэльмона, который вместе со Смитом выделил первого представителя (1885).
Типовым видом является вид S. enterica, объединяющий 5 подвидов, при этом подвид S. choleraesuis включает большую часть известных в настоящее время сероваров (1367 из 2324), которых исторически называют видами.
Среди сальмонелл есть виды, патогенные только для человека: S. typhi, S. paratyphi A, S. paratyphi B, вызывающие брюшной тиф и паратифы. Многие виды обитают в организме домашних и диких животных, птиц, рыб и вызывают у человека поражение кишечника – сальмонеллезы.
Свойства. Все сальмонеллы – грамотрицательные подвижные палочки (перитрихи), спор не образуют. Факультативные анаэробы, хемоорганотрофы, имеют бродильный и окислительный тип метаболизма. Способны расти при температуре от 8 до 450С. Хорошо размножаются на простых питательных средах. На МПА образуют полупрозрачные, бесцветные колонии. Сальмонеллы паратифа В вокруг колоний образуют слизистый валик, напоминающий пуговицу. Среды с желчью являются элективными (желчный бульон, жидкая среда Рапопорт). На дифференциально-диагностических средах Эндо, Левина образуют бесцветные колонии, т.к. сальмонеллы не разлагают лактозу. Селективной средой для сальмонелл служит висмут-сульфит-агар, где они растут в виде черных блестящих колоний. В бульоне S-формы вызывают равномерное помутнение.
Биохимические свойства. Сальмонеллы ферментируют углеводы (глюкозу, мальтозу, маннит, арабинозу, маннозу) с образованием кислоты и газа. Оксидазоотрицательны, каталазоположительны, реакция Фогеса-Проскауэра отрицательна. При расщеплении белков образуют сероводород. Не ферментируют лактозу, сахарозу, не расщепляют мочевину и не образуют индол. В отличие от большинства сероваров S.typhi не выделяет газ при ферментации углеводов.
Резистентность. Во внешней среде сальмонеллы долго сохраняют свою жизнеспособность: в воде открытых водоемов они живут 11-120 суток, в морской воде – до месяца, в почве до 9 месяцев, в комнатной пыли до 1,5 лет, в колбасных изделиях 2-4 месяца, в замороженном мясе и яйцах до 1 года, на замороженных овощах и фруктах до 2,5 месяцев. В продуктах сальмонеллы не только сохраняются, но и размножаются (молоко, сметана, творог, мясной фарш). В заражении пищевых продуктов могут играть роль мухи. Бактерии хорошо переносят низкие температуры, при нагревании до 600С погибают через 30 минут, при 1000С – почти мгновенно. Дезинфицирующие средства (хлорамин, гипохлорит, лизол) в обычных концентрациях убивают возбудителей через несколько минут.
Антигенная структура, серологическая классификация Кауфмана-Уайта.
Антигенная структура и классификация Кауфмана-Уайта. Сальмонеллы имеют 3 основных антигена: О-АГ, Н-АГ, Vi-АГ, которые вызывают в организме образование анти-О-, анти-Н-, анти-Vi-антител. О-антиген термостабильный, выдерживает кипячение в течение 2,5 часов. Н-антиген жгутиковый, термолабильный, разрушается при температуре 75-1000С, состоит из 2 серологических фаз: первая – специфическая и вторая – неспецифическая.
Кауфман и Уайт классифицировали сальмонеллы по антигенной структуре. По О-АГ все сальмонеллы делятся на 67 групп (А, В, С, D, Е и т.д.). В одну группу входят сальмонеллы, имеющие общую детерминанту О-антигена, обозначенную цифрой. По Н-АГ внутри групп сальмонеллы делятся на серовары (виды). Фазы Н-антигена: 1 фаза обозначается латинскими строчными буквами, 2 фаза – арабскими цифрами (или вместе с латинскими буквами). Всего известно более 2300 сероваров сальмонелл.
Vi-АГ принадлежит к группе поверхностных или капсульных АГ. Он термолабилен, полностью разрушается при кипячении в течение 10 минут, чувствителен к HCl и этанолу, частично инактивируется при температуре 600С в течение 1 часа. Наличие Vi-АГ может препятствовать агглютинации микроорганизмов О-антисыворотками. Сальмонеллы, имеющие Vi-антиген, лизируются Vi-фагами. Фаготипирование проводят с целью установления источника инфекции, что имеет важное эпидемиологическое значение. В настоящее время известно 78 фаготипов. Часть фагов обозначают латинскими буквами (А-Т), часть – арабскими цифрами (25-50). Необходимым условием фаготипирования является наличие Vi-АГ у исследуемых бактерий в культуре, что определяют в пробе с несколькими Vi-бактериофагами
Лабораторная диагностика ботулизма. Профилактика и лечение.
1.Экспресс-метод – постановка РПГА с эритроцитарным антительным антитоксическим диагностикумом с целью быстрого обнаружения экзотоксина в крови больного. Можно использовать ИФА и ВИЭФ.
2.Биологический метод (реакция нетрализации токсина антитоксином in vivo) позволяет обнаружить экзотоксин в материале (остатки пищи, рвотные массы, промывные воды желудка, испражнения, кровь, секционный материал – печень, кишечник, желудок). Мышам внутрибрюшинно вводят фильтрат материала в смеси с поливалентной противоботулинической сывороткой А, В, Е. Другая группа мышей получает материал без сыворотки. В том случае, когда животные второй группы погибают, ставят развернутую реакцию нейтрализации для определения типа экзотоксина.
3.Бактериологический метод. Материал засевают на среду Китта-Тароцци, далее производят пересев в высокий столбик сахарного агара, а затем идентифицируют культуру и в реакции нейтрализации определяют экзотоксин.
Профилактика и лечение. При наличии ранних признаков ботулизма, а также лицам, принимавшим зараженную пищу, вводят противоботулиническую антитоксическую сыворотку. Когда неизвестен серовар токсина, вводят поливалентную сыворотку против токсинов А, В, С, Е, а после определения типа экзотоксина – соответствующую моновалентную.
Для специфической профилактики применяют анатоксины типов А, В, Е, в том числе в составе ряда ассоциированных вакцин.
Вибрионы – возбудители холеры, свойства, резистентность.
Холерные вибрионы представляют собой изогнутые палочки размерами 1,5-4,0х0,2-0,4 мкм, имеют один полярный жгутик (иногда два), который окружен чехлом.
Холерные вибрионы обладают полиморфизмом. Типичные «запятые» обычно наблюдают в образцах клинического материала. В мазках из колоний преобладают палочковидные формы.
В старых культурах, на средах с крахмалом или иммунной сывороткой образуются нитевидные, S-образные, кокковидные, булавовидные формы. Под действием пенициллина образуют L-формы, спор и капсул не образуют.
Подвижность вибрионов весьма выражена, является важным диагностическим признаком.
Хорошо окрашиваются многими анилиновыми красителями, грамотрицательны.
Культуральные свойства. Факультативный анаэроб, с более выраженными аэробными свойствами.
Хорошо растет на простых питательных средах в температурном диапазоне 16-40°С, оптимум – 37°С, элективными являются щелочные среды с рН 7,6-9,0.
На жидких средах вызывает помутнение и образование нежной голубоватой пленки на поверхности. На 1% пептонной воде (рН 8,8-9,0) растут быстро, помутнение и пленка появляется через 6-8 часов.
На твердых средах (щелочной агар) образуют мелкие, прозрачные, с ровными краями, голубоватые в проходящем свете колонии.
На агаре с тиосульфатом, цитратом, солями жёлчных кислот и сахарозой (TCBS-агар) образуют желтые колонии на фоне голубовато-серой среды. На среде Монсура (щелочной таурохолат-теллурит-желатиновый агар) растут в виде серо-черных колоний.
Биохимические свойства. Холерные вибрионы сбраживают с образованием кислоты глюкозу, сахарозу, мальтозу, маннозу, маннит, гликоген, крахмал. По отношению к трем углеводам – маннозе, сахарозе и арабинозе (триада Хейберга) все вибрионы разделяют на 8 групп.
Холерные вибрионы разлагают только маннозу, сахарозу, не разлагают арабинозу и принадлежат к 1 группе Хейберга. Проявляют протеолитическую активность: разжижают желатину в виде «воронки», гидролизуют казеин. Обладают плазмокоагулирующим и фибринолитическим действием. Свертывают молоко, разлагают белки до индола и аммиака. Восстанавливают нитраты в нитриты.
Образование индола и восстановление нитратов определяют в нитрозоиндоловой реакции (холера-рот реакция).
На основании биохимических и биологических различий холерные вибрионы разделяют на 2 биовара: классический (V.сholerae asiaticae) и Эль-Тор (V.сholerae asiaticae eltor). Особенностью вибриона Эль-Тор является способность гемолизировать эритроциты, в связи с чем его относят к гемолитическим вибрионам. Дифференциальные различия возбудителей холеры представлены в табл. 13.
Резистентность. Холерные вибрионы устойчивы к низким температурам; во льду сохраняют жизнеспособность до 1 месяца, в морской воде – до 47 суток, в речной – до нескольких недель, в почве – до 3 месяцев, в фекалиях – до 3 суток, на вареных продуктах, в молоке и молочных продуктах, сырых овощах – 2-5 дней, на фруктах – 1-2 дня. При 80°С погибают через 5 мин, при 100°С – мгновенно. Холерные вибрионы высокочувствительны к высушиванию, ультрафиолетовому облучению, хлорсодержащим препаратам; все вибрионы высокочувствительны к кислотам.
Микобактерии проказы: свойства, роль в патологии человека.
Проказа – хроническое инфекционное антропонозное заболевание, источником инфекции которого являются только больные люди. Заболевание носит генерализованный характер и сопровождается поражением кожи, слизистых оболочек, периферических нервов и внутренних органов.
Возбудитель проказы был впервые описан в 1874 г. Ганзеном, а в 1879 г. А. Нейссер предложил способ окраски.
Свойства
Морфологические. Мелкие палочки, реже представляют собой извитые формы, нет спор, капсул, жгутиков, грамположительны. По Циль-Нильсену окрашиваются в красный цвет. Кислотоустойчивы. Строгие внутриклеточные паразиты.
Единственный источник инфекции – больной человек, который может выделять возбудителя в окружающую среду при кашле, чихании. Инкубационный период 3-5 лет и более.
Основной путь передачи – воздушно-капельный, реже – контактный, трансплацентарный. Остается открытым вопрос о возможности передачи возбудителя кровососущими насекомыми.
Входные ворота – слизистые оболочки и кожа.
Патогенез: возбудитель проникает в кровь, лимфу, нервную систему, внутренние органы. Образуются гранулемы, состоящие из макрофагов, содержащих много микобактерий, т.е. выражен незавершенный фагоцитоз, формируется ПЧЗТ, развивается вторичный иммунодефицит, лимфоциты не подвергаются бласттрансформации, подавляется миграция макрофагов.
Заболевание может протекать в 3-х формах:
- лепроматозная форма – самая тяжелая, наиболее опасна для окружающих. На лице, предплечьях, голенях образуются множественные инфильтраты (лепромы), в них очень много возбудителя. Затем лепромы распадаются, образуются язвы. Поражается кожа, слизистые, лимфатические узлы, нервная система, внутренние органы. При диффузной инфильтрации кожи лица формируется «львиное лицо» – морщины и складки углубляются, нос утолщается, щеки, губы и подбородок приобретают дольчатый вид. На более поздних стадиях выпадают брови, ресницы, развиваются парезы и параличи;
- туберкулоидная – более легкая, менее заразная. Чаще поражается только кожа, появляются симметрично расположенные папулы. Они сопровождаются потерей чувствительности. Возбудителя в очагах меньше;
- недифференцированная – при этом образуются асептические инфильтраты на нижних конечностях, ягодицах. Сначала гиперестезия, затем развивается анестезия. Недифференцированная форма может переходить в I или II форму.
Комитет экспертов ВОЗ по лепре в 1990 г. предложил рабочую классификацию, по которой выделяют многобациллярную лепру (лепроматозную) и малобациллярную лепру (туберкулоидную и недифференцированную).
Без лечения смерть наступает через 5-10 лет от кахексии, иммунодефицита и сопутствующих заболеваний.
Иммунитет. Естественный иммунитет является клеточно-опосредованным. Характерен незавершенный фагоцитоз. При лепре развивается вторичный клеточный иммунодефицит. Положительная реакция на лепромин свидетельствует о благоприятном прогнозе.
Лабораторная диагностика проказы, профилактика и лечение.
На первый план выступает клиническая диагностика с выявлением изменения чувствительности слизистых верхних дыхательных путей к температурным факторам (от гипостезии до анастезии), образование рубцовых тканей, язв.
Микроскопический метод: исследуют соскоб из гранулем, пунктат из лимфоузлов. Готовят мазки, окрашивают по Циль-Нильсену, выявляют клетки, наполненные возбудителем в виде «пачки сигар». При лепроматозной форме в препарате много плазмоцитов, лимфоцитов, фибробластов. При туберкулоидной форме возбудителя мало, основную массу составляют эпителиальные клетки, вокруг которых располагаются лимфоидные клетки.
Применяют РИФ с люминесцирующими сыворотками для выявления лепрозных антигенов.
Биопробу проводят на бурундуках и броненосцах. Можно вводить материал в кожу лапки белой мыши, развивается инфильтрат, в котором микроскопически выявляют скопления клеток в виде «пачки сигар».
Аллергическая проба носит больше прогностическое, чем диагностическое значение. Вводят внутрикожно лепромин (аллерген), полученный длительным кипячением тканей лепроматозного узла. При легких формах выявляют ПЧЗТ. При тяжелых реакция на лепромин отрицательная (вторичный иммунодефицит). Учет пробы производится через 8-24 дня (поздняя реакция).
Серологический метод. Используют РПГА с эритроцитарным диагностикумом (эритроциты, нагруженные лепромином, или туберкулином или вакцинным штаммом БЦЖ), ИФА, непрямую РИФ, преципитацию в агаре (метод двойной диффузии) или ВИЭФ.
Профилактика. Неспецифическая – изоляция больных многобациллярными формами лепры и лечение до перевода в малобациллярные формы. Изоляция детей от больных родителей, многократная вакцинация их вакциной БЦЖ. Полной защиты от проказы нет, но заболевание у вакцинированнх детей протекает в более легкой форме.
В целях специфической профилактики испытывается вакцина, полученная на принципах генной инженерии (ген M. leprae встраивают в плазмиду кишечной палочки, получая специфические белки – протективные антигены). Испытывается действие убитой лепроматозной вакцины вместе с вакциной БЦЖ для групп риска. Эффект вакцинации можно проследить только через 5-10 лет.
Лечение. Используют химиотерапевтические препараты: дапсон, рифампицин, дифенилсульфон. С целью коррекции иммунодефицита применяют гамма-интерферон, гретую лепрозную вакцину с БЦЖ, моноклональные антитела. Лечение длится от 3-х до 10 лет и более.
Лабораторная диагностика, профилактика и лечение дифтерии.
Так как заболевание связано с действием токсина, то основным экспресс-методом диагностики является выявление токсина, параллельно ведутся традиционные методы исследования.
Проводят выявление токсина в фильтрате исследуемого материала (пленки, ткани трупа) или материала после 4-5-часового подращивания бактерий в сывороточном бульоне. С этой целью можно ставить реакцию коагглютинации со стафилококковым антительным противодифтерийным диагностикумом.
С этой же целью можно ставить РПГА, ИФА и ПЦР и ДНК-зонды для обнаружения гена tox в бактериальной хромосоме. Используют также заражение куриных эмбрионов, наблюдают их гибель при наличии токсина. При заражении культур клеток Vero дифтерийный токсин дает ЦПД (цитопатическое действие). В реакции нейтрализации идентифицируют вид токсина.
Бактериоскопический метод. В мазке из слизи зева и фибринозного налета при окраске по Нейссеру выявляют типичную морфологию возбудителя и явление метахромазии. Можно окрашивать препарат корифосфином и изучать препарат в люминесцентном микроскопе (оранжево-красное свечение).
В остром периоде заболевания за счет антагонистических свойств возбудителя коринебактерии видны прямо в мазке при микроскопии практически в чистой культуре.
Бактериологический метод – засевают материал на сывороточный агар и другие селективные среды (Клауберга, Тинсдаля и кровяной агар, т.к. некоторые штаммы дифтерийного возбудителя не растут при наличии теллура). Идентифицируют возбудителя по культуральным, морфологическим, биохимическим свойствам и токсигенности, которую определяют методом иммунопреципитации. Для этого на чашку с сывороточным агаром накладывают фильтровальную бумагу, смоченную антитоксической противодифтерийной сывороткой, а вокруг на расстоянии 1,5 см сеют выделенные и идентифицированные дифтерийные культуры. Если культура выделяет экзотоксин, то он диффундирует в среду, и на месте встречи с антителами видны линии преципитации.
При идентификации культуры в бактериологическом методе необходима дифференциация возбудителя дифтерии от других коринебактерий, которые могут вызывать дифтериеподобные заболевания или просто находиться в слизи зева.
С.ulcerans – бактерии палочковидной формы, располагаются беспорядочно, имеют одно зерно волютина на конце; глюкозу и крахмал разлагают до кислоты, сахарозу не разлагают, выделяют уреазу, желатиназу, иногда цистиназу, не восстанавливают нитраты в нитриты, непостоянно могут выделять экзотоксин.
C.xerosis располагаются параллельными рядами, не имеют зерен волютина, разлагают глюкозу и сахарозу, мальтозу, восстанавливают нитраты, не разлагают крахмал и мочевину.
C.pseudodiphtericum – представитель нормальной микрофлоры. Может располагаться параллельными рядами или беспорядочно с одним зерном волютина. Не разлагает углеводы, восстанавливает нитраты в нитриты, разлагает мочевину, не имеет цистиназы, не выделяет экзотоксин.
Для установления источника инфекции необходимо проверить эпидмаркеры: фаговары (их 9), бактериоциновары (5), серовары (их 57, чаще встречается 11), биовары (4), антибиотикограмму.
Серологический метод используют при стертых формах для ретроспективной диагностики или для выявления неиммунной прослойки населения. С этой целью ставят РПГА, ИФА и реакцию нейтрализации токсина в культуре клеток Vero.
Профилактика. Неспецифическая: проводят изоляцию и лечение больных, санацию носителей антибиотиками, дезинфекцию в очаге.
Специфическая профилактика – с трех месяцев после рождения детям вводят вакцину АКДС 3 раза с интервалом в 45 дней. Ревакцинация через 1,5-2 года, вводят АКДС, или АДС-М, или АД (адсорбированный дифтерийный анатоксин) по схеме. При низком титре антител (менее 1:40 в РПГА или 0,03 мE/мл в реакции флоккуляции) по эпидемическим показаниям проводят ревакцинацию. К группам риска для вакцинации в РБ относят не только детей, но и взрослое население с низким уровнем (менее 1:40) антитоксических антител.
Лечение. Антитоксическая противодифтерийная сыворотка применяется в ранние сроки. Ее вводят по методу Безредки (дробно, постепенно увеличивают дозу). Параллельно используют антибиотики, глюкозу, витамины, антигистаминные препараты.
Менингококки, таксономия, свойства. Серогруппы менингококков. Резистентность.
Морфология и свойства. Грамотрицательные парные кокки бобовидной формы, неподвижны, имеют капсулу и пили. Очень требовательны к условиям культивирования. Растут на средах с нативным белком (сывороточный, шоколадный или кровяной агары) и повышенной влажностью; среда должна быть свежей и подогретой. Оптимум температуры 370С. Для культивирования необходимо наличие 5-10% углекислоты. На плотных средах образуют прозрачные, бесцветные колонии, возможна диссоциация на R- и S-формы. Разлагают до кислоты глюкозу и мальтозу, выделяют оксидазу, каталазу, дают положительную пробу с КОН, выделяют цитохромоксидазу.
Антигены: группоспецифические АГ – гликопротеиды; родовые АГ – белки, полисахариды – общие для всего рода нейссерий; видовые АГ белковой природы. По капсульным и полисахаридным антигенам все менингококки подразделены на серогруппы (А, В, С, D, Х, V, Z, 29Е, W135, Н, J, К, L), С и V вызывают спорадические заболевания. Наиболее вирулентными являются менингококки из группы А, В, С, Х, W135. По белковому антигену наружной мембраны клеточной стенки они подразделяются на серовары (1,2,3,4…20).
Менингококки малоустойчивы во внешней среде, чувствительны к дезинфицирующим средствам, к низким температурам.
Лабораторная диагностика холеры. Профилактика и лечение.
Основной метод – бактериологический.
Цели исследований: выявление больных и бактерионосителей; контроль за эффективностью лечения больных и санации носителей; контроль над объектами внешней среды и эффективностью дезинфекционных мероприятий.
Материалы для исследований – испражнения, рвотные массы, желчь, секционный материал, вода, смывы с объектов окружающей среды, пищевые продукты и др.
Материал следует доставлять в лабораторию не позже 2 ч после забора. При невозможности образцы помещают в транспортные среды (наиболее удобна 1% пептонная вода с рН 8,2-8,6). Для посева используют жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды.
На всех этапах исследования посевы выращивают на пептонной воде 6-8 ч, пептонной воде с теллуритом калия 12-18 ч, на щелочном агаре не менее 14-16 ч, на элективных плотных средах 18-24 ч.
Исследование больных, бактерионосителей и трупного материала проводят в четыре этапа.
1 этап. Материал засевают на накопительную среду, на щелочной агар илиодну из элективных сред (например, TCBS-агар).
2 этап. Изучают рост на первой среде накопления и производят высев на щелочной агар и вторую среду накопления. Если при исследовании материала ускоренными методами (микроскопия, агглютинация О1-сывороткой) получают положительные результаты, пересев на другую среду накопления не производят.
3 этап (через 12-14 ч после начала исследования). Изучают рост на второй среде накопления; производят высев из нее на щелочной агар. Из чашек с ростом отбирают для дальнейших исследований не менее 5 подозрительных колоний, проверяют морфологию и агглютинабельность, пересевают для выделения чистой культуры.
4 этап (через 18-24 ч после начала исследования). Подозрительные колонии исследуют в РА на стекле с О1-антисывороткой, с сыворотками Инаба и Огава в разведении 1:50-100, а также холерной сывороткой О139. Из культур готовят мазки для окраски по Граму и пробам с люминесцирующими сыворотками. Затем проводят биохимическую иидентификацию выросших микроорганизмов.
Для ускоренной диагностики болезни применяют иммунолюминесцентный и иммобилизационный микроскопические методы и РПГА.
Лечение. Основным направлением в лечении является немедленное восполнение дефицита воды и электролитов. Антибактериальную терапию проводят препаратами тетрациклинового ряда. Можно использовать левомицетин, бисептол и фуразолидон.
Профилактика.
Неспецифические санитарно-гигиенические мероприятия направлены на предупреждение заноса холеры из неблагополучных районов, раннее выявление больных и носителей, эпидемиологический надзор за источниками водоснабжения, контроль за соблюдением санитарно-гигиенических норм на предприятиях пищевой и молочной промышленности, торговли и т.п.
С целью специфической профилактики используются вакцины.
Шигеллы – возбудители дизентерии, классификация, свойства, резистентность.
Бактериальная дизентерияилишигеллез–инфекционное заболевание, вызываемое бактериями рода Shigella, протекающее с преимущественным поражением толстого кишечника.
Род Shigella выделили Кастеллани и Чалмерс в 1919 г., а свое название род получил в честь Шига, описавшего один из его видов. В различных странах бактериальная дизентерия составляет от 20 до 60 % кишечных инфекций.
По Международной классификации род подразделяется на 4 вида:
S.dysenteriaе серогруппа А, серовары 1-12;
S.flexneri серогруппа В, серовары 1-8;
S.boydii серогруппа С, серовары 1-18;
S.sonnei серогруппа D.
Серогруппы В и D чаще всего вызывают дизентерию.
Свойства
Морфология. Мелкие, грамотрицательные неподвижные палочки, имеют пили, которые обеспечивают адгезию; спор, микрокапсулу не имеют.
Культуральные свойства. Факультативные анаэробы, хемооргано-трофы. Растут на простых питательных средах в виде мелких, полупрозрачных, бесцветных колоний. Склонны к диссоциации на S- и R-формы. На дифференциально-диагностических средах также дают бесцветные колонии, т.к. не расщепляют лактозу. В жидких средах S-формы дают равномерное помутнение, R-формы – придонный осадок.
Биохимические свойства. Все шигеллы менее активны, чем другие кишечные бактерии. Не образуют H2S. При расщеплении углеводов не образуют газа, оксидазоотрицательны, каталазоположительны, не разлагают лактозу и сахарозу. Важным дифференциальным признаком является их отношение к манниту: S.dysenteriae не ферментирует маннит, представители групп В, С, D маннитположительны. Разные виды по-разному ферментируют углеводы. Наименьшей ферментативной активностью обладают S.dysenteriae, ферментирующие лишь глюкозу без газообразования.
Шигеллы Флекснера, как правило, не ферментируют лактозу, дульцит и ксилозу; слабо активны в отношении мальтозы, сахарозы, арабинозы и рамнозы (не ферментируют либо расщепляют не ранее 6-10 суток), почти все образуют индол. Бактерии серогруппы 6 (шигеллы Ньюкасл) образуют небольшое количество газа при ферментации углеводов.
Сходной биохимической активностью обладают S.boydii, но они также ферментируют ксилозу, дульцит и арабинозу. Некоторые шигеллы Бойда также способны ферментировать мальтозу (на 6-20 сутки), что имеет практическое значение при идентификации культур.
S.sonnei не ферментируют сорбит и дульцит, не образуют индол, расщепляют ксилозу, арабинозу, что сближает их с бактериями серогруппы С. Основное отличие – способность сбраживать рамнозу, а также лактозу и сахарозу (в течение 2 суток).
Резистентность. Шигеллы обладают невысокой устойчивостью к действию различных факторов. Наиболее устойчивы S.sonnei, которые в водопроводной воде сохраняются до 2,5 месяцев, в воде открытых водоемов – до 1,5 месяцев. В продуктах, особенно молочных, могут не только сохраняться, но и размножаться.
Возбудители ботулизма: таксономия, свойства, резистентность.
Ботулизм– инфекционная болезнь, характеризующаяся интоксикацией организма с преимущественным поражением ЦНС, возникающим при употреблении пищевых продуктов, содержащих экзотоксины возбудителя – Clоstridium botulinum.
Возбудитель ботулизма открыт Э. Ван Эрменгемом (1896), выделившим микроб из организма погибшего человека и остатков колбасы, которую тот принимал в пищу (отсюда название: лат. botulus – колбаса).
Свойства. Представляют собой палочки с закругленными концами, размерами 4-9х0,6-1,0 мкм, образуют субтерминальные споры, отсюда имеют вид теннисной ракетки, подвижные перитрихи, грамположительны.
C. botulinum – строгий анаэроб. Растет на среде Китта-Тароцци, температурный оптимум 25-35°С, pH – 7,2-7,4. На кровяном агаре образует мелкие сероватые колонии с зоной гемолиза. В высоком столбике сахарного агара имеет вид пушинок или зерен чечевицы.
Разлагают сахара, желатин, белки, выделяют сероводород.
Антигенные свойства. Возбудитель имеет О и Н антигены и выделяет экзотоксин. В зависимости от антигенной структуры экзотоксина различают 8 сероваров возбудителя: А, В, С1(a), С2(b), D, Е, F, G Наиболее патогенны для людей серовары А, В, Е. Для идентификации возбудителя используется антигенная специфичность токсинов.
Резистентность. Споры C. botulinum высокорезистентны к различным воздействиям, выдерживают кипячение в течение 6 часов, длительное высушивание, замораживание при -253°С. Сохраняют жизнеспособность в 5% растворе фенола до 1 суток.
Бордетеллы: таксономия, свойства, факторы патогенности, роль в патологии человека.
Бордетеллы –возбудители коклюша – острого антропонозного воздушно-капельного инфекционного заболевания детей, которое характеризуется цикличным течением и приступообразным спастическим кашлем.
Возбудитель относится к семейству Alcaligenaceae, роду Bordetella, виды: В.pertussis – вызывает коклюш; В.parapertusis – паракоклюш; В.bronchiseptica – вызывает острые респираторные заболевания.
Впервые бордетеллы выделены в 1906 г. Ж. Борде и О. Жангу.
Морфология. Очень мелкие овоидной формы, грамотрицательные палочки (коккобактерии).
Не имеют спор, жгутиков (кроме B.bronchiseptica). Возбудители коклюша имеют капсулу. При окраске толуидиновым синим выявляются метахроматические биполярные гранулы.
Культуральные свойства. Строгие аэробы, каталазо-положительны, прихотливы к питательным средам. Нуждаются в факторах роста. В среды добавляют аминокислоты, кровь, уголь, ионообменные смолы, никотиновую кислоту, цистеин, метионин.
Лучшими средами являются глицерино-картофельно-кровяной агар (среда Борде-Жангу); КУА (казеиново-угольный агар). Уголь и кровь добавляют в среды для адсорбции жирных кислот, которые образуются в процессе роста бордетелл. На этих средах возбудитель коклюша образует колонии в виде капелек ртути, паракоклюша – коричневые колонии.
Скорость роста – 48-72 часа.
Возбудители коклюша диссоциируют на 4 типа: I – вирулентные бордетеллы, S -формы, имеют пили; II и III – RS-формы (переходные); IV – авирулентные R -формы, пили отсутствуют.
Антигены. Имеется 14 вариантов О-антигена, для всего рода характерен антиген 7, для возбудителя коклюша дополнительно специфический антиген – 1, для возбудителя паракоклюша – 14, для B.bronchiseptica – 12. Их выявляют в реакции агглютинации с монорецепторными сыворотками.
Биохимические свойства слабо выражены. Белки и углеводы не разлагают. Имеют фермент аденилатциклазу.
Бордетеллы чувствительны к температуре, солнечным лучам, к фенолу, лизолу.
Факторы патогенности В.pertussi: имеет специфический трахеальный цитотоксин, вызывающий гибель и слущивание мерцательного эпителия, имеет небелковую природу – это продукт синтеза и трансформации муреина (активатор вторичных месенджеров); другой - термолабильный белковый токсин представлен двумя субъединицами: А – собственно токсин, В – действует на АДФ-рибозилтрансферазу. Мишень действия – g-белки обеспечивают контакт А-фракции с цитоплазмой клетки.
Имеется дермонекротический токсин (вторичный месенджер), оказывает дейтсвие на диамедазу, мишень действия – Rho-g-белки, под воздействием токсина происходит модификация Rho-белков, которая заключается в дезаминировании отстатка глютамина с образованием глютаминовой кислоты, образуется активный Rho-белок, не способный гидролизовать ГТФ (АДФ); микроворсинки обеспечивают адгезию к мерцательному эпителию; филаментозный гемагглютинин связывается с глилипидами мембран клеток мерцательного эпителия и с CR3 гликопротеиновым рецептором поверхности полиморфноядерных лейкоцитов и инициирует фагоцитоз; эндотоксин (ЛПС) активирует комплемент и стимулирует выработку цитокинов; аденилатциклаза подавляет активность фагоцитов и миграцию моноцитов.
Лабораторная диагностика сальмонеллезной инфекции. Профилактика и лечение сальмонеллезов.
Используют бактериологический и серологические методы, которые проводят с учетом периода инфекционного процесса.
Материалом для бактериологического исследования являются кровь, испражнения, моча, дуоденальное содержимое, желчь, соскоб розеол, костный мозг.
В бактериологическом исследовании ранним методом является выделение возбудителя из крови (гемокультура) в период бактериемии (первая неделя заболевания). Кровь засевают в желчный бульон или среду Рапопорт в соотношении 1:10 (чтобы уменьшить бактерицидные свойства белков крови). На 2-й день проводят пересев на среду Эндо или Левина, или висмут-сульфит агар. Подозрительные (прозрачные или черные в зависимости от сред) колонии пересевают на скошенный агар или одну из комбинированных сред (Олькеницкого, Ресселя, Клиглера). На этих средах для первичной идентификации определяют ферментацию глюкозы, способность к газообразованию, выделение сероводорода, отсутствие уреазы.
Одновременно изучают морфологию и тинкториальные свойства. Бактерии тифо-паратифозной группы не разлагают сахарозу, лактозу, не образуют индол. При выделении культур, имеющих характерные для сальмонелл ферментативные свойства, изучают их антигенную структуру в реакции агглютинации на стекле с О- и Н-диагностическими антисыворотками, определяют чувствительность к антибиотикам, проводят фаготипирование.
Для серологической диагностики брюшного тифа и паратифов с 5-7 дня заболевания используется преимущественно РПГА с О- и Н-эритроцитарными диагностикумами. Положительной считается реакция в титре 1:200 и выше. При исследовании в РПГА титр антител в динамике заболевания нарастает.
В прошлом широко применялась реакция агглютинации Видаля с О- и Н-монодиагностикумами к конкретным возбудителям (положительный титр реакции – 1:200 и выше).
Для выявления бактерионосителей используют РПГА с эритроцитарным Vi-диагностикумом (титр реакции – 1:40). При эпидемических вспышках брюшного тифа для экспресс-диагностики с целью выявления АГ в крови, костном мозге и другом материале применяют РИФ и ИФА.
Лечение. Этиотропную терапию проводят до 10 дня нормальной температуры. Применяют левомицетин, ампициллин, гентамицин. При устойчивости к данным антибиотикам используют бактрим (бисептол), фторхинолоны. Патогенетическое лечение включает инфузионно-дезинтоксикационную терапию.
Профилактика. Проводятся санитарно-гигиенические и противоэпидемические мероприятия, направленные на обезвреживание источников инфекции, пресечение путей передачи, повышение невосприимчивости организма. Для специфической иммунопрофилактики брюшного тифа разработано 3 типа вакцин: убитая (эффективность 50-70%), живая аттенуированная из штамма Ту21а (оказывает большее протективное действие, но дает побочные эффекты), вакцина из Vi-антигена капсулы S.typhi (находится на стадии клинических испытаний), применяется по эпидпоказаниям.
Лабораторная диагностика туберкулеза. Дифференциация возбудителей туберкулеза, микобактериозов и кислоустойчивых сапрофитов.
Материалом для исследования служат мокрота, моча, ликвор, пунктат лимфоузла, биоптаты тканей.
Бактериоскопический метод. Окрашивают мазки по Циль-Нильсену, выявляют мелкие красные палочки. При окраске флюоресцентными красителями (аурамином, родамином) микобактерии дают желто-белое свечение в люминесцентном микроскопе.
При малом количестве возбудителя используют методы обогащения.
Гомогенизация – материал обрабатывают щелочью, фибрин при этом растворяется, а возбудитель высвобождается. Из осадка после центрифугирования готовят мазки.
Флотация – гомогенизированную мокроту обрабатывают ксилолом или бензолом и тщательно встряхивают. Возбудитель всплывает в силу гидрофобности вместе с пеной. Из нее готовят мазок и окрашивают по Цилю-Нильсену.
Бактериологический метод. Материал обрабатывают серной кислотой и засевают на яичные среды.
Для идентификации M. tuberculosis проводят оценку свойств возбудителя:
характер роста – обнаруживают сухие, бородавчатые, кремовые колонии (R-форма); длительность роста – 12-60 дней; выявляют наличие корд-фактора (определяют по методу Прайса – на стекло наносят исследуемый материал, обрабатывают серной кислотой для уничтожения кислоточувствительной флоры и погружают препараты в цитратную кровь, через 3-4 дня препараты извлекают, окрашивают по Циль-Нильсену, при микроскопии видны «косы» палочек, при отсутствии корд-фактора возбудитель располагается аморфно); для микобактерий туберкулеза характерен рост только при температуре 37-380С; они не растут на простых средах и средах с салицилатами; положительный ниациновый тест (среда с хлорамином В желтеет при накоплении никотиновой кислоты); обладают термолабильной каталазой; восстанавливают нитраты в нитриты; выделяют уреазу; к микобактериям туберкулеза чувствительны морские свинки.
Для внутривидовой дифференциации используют фаготипирование штаммов десятью микобактериофагами.
Для выявления АГ используют ИФА или РИФ, для генной диагностики ставят ПЦР и выявляют генетические маркеры.
Mycobacterium bovis вирулентны в S-форме; колонии кремовые, гладкие; ниациновый тест отрицательный; рост до 40 дней; каталаза термолабильная; выделяют уреазу; не восстанавливают нитраты; рост только при температуре 37-400С.
Mycobacterum africanum – рост 31-40 дней; ниациновый тест положительный; вирулентны в S-форме; каталаза термолабильна; не восстанавливают нитраты; выделяют уреазу. Остальные свойства как у M.tuberculosis.
Микобактерии туберкулеза необходимо дифференцировать от атипичных кислотоустойчивых бактерий, вызывающих микобактериозы.
Атипичные кислотоустойчивые бактерии имеют оранжевый пигмент, вирулентны в S-форме, растут на средах с салицилатами, имеют термостабильную каталазу, рост через 10-20 дней при температуре 22-450С, нет корд-фактора.
Кислотоустойчивые сапрофиты M.smegmatis, в отличие от предыдущих возбудителей, растут на простых средах, длительность роста 3-4 дня, имеют S-форму, оранжевый пигмент, нет признаков болезнетворности, чувствительны к спирту.
Биопроба применяется при стертых формах. Морским свинкам внутрикожно втирают исследуемый материал. Через 10-14 дней появляется долго не заживающая язва, и реакция Манту у них становится положительной.
Метод аллергических проб – реакция Манту с туберкулином.
Внутрикожно вводят туберкулин PPD (PPD – очищенный белковый дериват). Если организм инфицирован (иммунен), то через 24-48-72 часа наблюдается инфильтрация и гиперемия, т.е. развивается ПЧЗТ. У больных туберкулезом диаметр папулы на 6 мм (и более) больше, чем у вакцинированных.
Генодиагностика – ПЦР.
Серологический метод: для выявления антител используют РПГА, ИФА.
Профилактика. Неспецифическая профилактика: проводится изоляция и лечение больных до полного прекращения выделения возбудителя. Дезинфекция в очаге 5% фенолом, 1:1000 раствором сулемы, хлорамином, хлорной известью.
Специфическая профилактика проводится живой аттенуированной вакциной БЦЖ на 3-5 день после рождения с последующей ревакцинацией при отрицательной реакции Манту.
Вакцина БЦЖ получена Кальметом и Гереном из M.bovis путем многократных посевов на голодные среды, в результате был получен авирулентный штамм, сохранивший высокую иммуногенность.
Лечение проводится антибиотиками и сульфамидными препаратами. Назначают препараты первого ряда – изониазид (тубазид), рифампицин, пиразинамид, стрептомицин, этамбутол. Комбинация из двух препаратов позволяет преодолеть химиорезистентность возбудителя. Альтернативные средства – канамицин, ПАСК, этионамид, циклосирин, капреомицин.
Лабораторная диагностика синегнойной инфекции. Профилактика и лечение
Микроскопический метод имеет ориентировочное значение, обнаружение грамотрицательных неспорообразующих подвижных палочек позволяет правильно подобрать питательные среды.
Бактериологический метод: делают посев материала на селективную для псевдомонад среду ЦПХ-агар (состав среды: агар, цетрамид, фурагин, NaCl для подавления роста других микробов).
Далее учитывают образование сине-зеленого, водорастворимого пигмента пиоцианина, делают мазки из колоний слизистой консистенции и определяют следующие признаки: цитохромоксидазу, которая должна быть положительна, положительный каталазный тест. Т.к. возбудитель – строгий аэроб, то он разлагает глюкозу в аэробных условиях и не разлагает в анаэробных условиях, разжижает желатин, не выделяет индол.
P.aeruginosa растет при 42°С и не растет при 5°С, редуцирует нитрат, имеет фермент аргинингидролазу, синтезирует пиоцианин.
Серодиагностику проводят для определения АТ к различным антигенным компонентам (экзотоксину) и используют РПГА, РСК, ИФА, ВИЭФ. Для быстрого обнаружения экзотоксина используют РПГА с эритроцитарным антительным антитоксическим диагностикумом.
Фаготипирование и пиоцинотипирование проводят по эпидпоказаниям.
Иммунопрофилактика и лечение. Вакцина синегнойная поливалентная корпускулярная инактивированная жидкая представляет собой смесь убитых эктерицидом культур 7 штаммов синегнойной палочки, относящихся к наиболее часто встречающимся серогруппам. Препарат предназначен для иммунопрофилактики синегнойной инфекции у больных с обширными травматическими повреждениями мягких тканей и внутренних органов, с обширными послеоперационными ранами, ожогами, острой легочной деструкцией и больным с дефицитом иммунной системы.
Анатоксин синегнойной палочки адсорбированный жидкий применяют для профилактики синегнойной инфекции у больных в возрасте старше 14 лет и для вакцинации доноров с целью получения антитоксической плазмы.
При пищевых токсикоинфекциях и дисбактериозах кишечника используют комплексный интестибактериофаг, в состав которого входит псевдомонадный фаг.
Для лечения тяжело протекающих процессов назначают: антисинегнойную гипериммунную плазму, специфический гамма-глобулин, очищенную концентрированную антисинегнойную сыворотку, поливалентную вакцину и анатоксин.
Антибиотики применяют те, к которым чувствительны выделенные культуры (чаще карбенициллин, амикацин, имипенем).
Факторы патогенности синегнойной палочки. Этиологическая роль в развитии гнойно-воспалительных заболеваний.
Факторы патогенности. Патогенность синегнойной палочки обусловлена слизью капсулоподобного вещества, защищающего микробы от фагоцитоза.
Экзотоксин А – угнетает синтез белка в клетках, нарушает клеточный метаболизм. По молекулярной структуре и механизму действия имеет сходство с дифтерийным экзотоксином. Это белок, состоящий из двух субъединиц, чувствителен к трипсину.
Цитотоксин – вызывает нарушение проницаемости клеточных мембран, разрушает клетки, способствует развитию нейтропении.
Гемолизины – (их несколько) – вызывают высвобождение ферментов из лейкоцитов, приводят к некротическим изменениям в паренхиматозных органах
Нейраминидаза – разрушает нейраминовую кислоту.
Эластаза – разрушает эластин, влияет на снижение уровня IgG, подавляет хемотаксис нейтрофилов.
Адгезины (фимбрии) обеспечивают прикрепление к различным клетками и тканям.
Взаимодействие с клетками реализуется через рецепторы, включающие Nа-цетилнейраминовые кислоты. Определенную роль в этом механизме играет бактериальная слизь. Прикрепление к субстратам стимулирует дефицит фибронектина. Особенно выражены адгезивные свойства к эпителию дыхательных путей и роговицы глаза. Адгезивные свойства усиливаются при повышении температуры до 37°С и при повышении атмосферного давления. Это одна из причин распространения кожных форм синегнойной инфекции после приема лечебных ванн и синегнойных отитов у людей, подвергавшихся воздействию повышенного атмосферного давления.
Токсические свойства микроба связаны с наличием эндотоксина – ЛПС клеточной стенки; по О-АГ имеется 20 серогрупп.
Несмотря на наличие большого набора факторов вирулентности, синегнойная палочка является оппортунистическим патогеном, т.к. инфекция редко наблюдается у лиц с нормальной резистентностью и неповрежденными кожей и слизистыми оболочками.
Патогенез. Псевдомонады – типичные внеклеточные паразиты, и их размножение прямо обусловлено способностью противостоять действию факторов резистентности.
Слизь и цитотоксины затрудняют их элиминацию фагоцитами и иммунокомпетентными клетками, что выражено у больных с иммунодефицитами.
Бактерии продуцируют комплекс биологически активных продуктов, обеспечивающих их неорганическим фосфором (фосфолипазы), железом (сидерофоры, нарушающие связывание железа трансферрином) и метаболиты, нарушающие гомеостаз тканей и частично стимулирующие воспалительные реакции (протеазы гидролизуют эластин, способствуют внедрению микробов в ткани и секвестрации в артериальной стенке, а также активируют систему комплемента).
К группам риска приобретения госпитальной синегнойной инфекции относятся больные с лейкемией, злокачественными новообразованиями, нейтропенией (любой этиологии), ожоговой травмой, кистозным фиброзом, патологией дыхательных путей, почек, мочевыводящих путей.
При ослаблении иммунитета синегнойная палочка вызывает раневую инфекцию, отиты, менингиты, циститы, некротические пневмонии, остеомиелит, сепсис, абсцесс печени, мозга
При инфицировании раны синегнойной палочкой развивается фибринозно-гнойное воспаление, при котором задерживается процесс регенерации в ране. У детей с ожогами часто развивается токсико-септическая форма.
Эшерихии: свойства, резистентность.
Прямые грамотрицательные палочки размерами 1,1-1,5х2-6,0 мкм, в мазках располагаются одиночно, не имеют спор, перитрихи (или неподвижны); большинство штаммов имеет микрокапсулу (некоторые – капсулу, реснички), факультативные анаэробы.
Образуют различные сахаролитические ферменты, расщепляют глюкозу, лактозу, мальтозу и маннит с выделением кислоты и газа, не растут на среде с цитратом; реакция Фогес-Проскауэра на ацетоин отрицательна.
Тесты на оксидазу, сероводород, желатин, уреазу отрицательны. Каталазоположительны, восстанавливают нитраты в нитриты, содержат Г+Ц в ДНК 50-51 моль%.
E. сoli хорошо растет на простых питательных средах – колонии на агаре круглые, прозрачные, в мясопептонном бульоне вызывают диффузное помутнение всей среды. На среде Эндо образуют красные с металлическим блеском лактозоположительные колонии, на среде Левина – темно-синие.
Штаммы, обитающие у человека и теплокровных животных, могут размножаться при 430С, оптимальный рН 7,2-7,4, температурный оптимум – 370С.
Энтеропатогенные, энтеротоксигенные, энтероинвазивные и энтерогеморрагические кишечные палочки. Факторы патогенности и патогенез эшерихиозов.
Факторы патогенности диареегенных E. сoli связаны с плазмидами, которые кодируют следующие свойства:
1. Плазмида К88 обеспечивает синтез факторов адгезии, колонизации, которые необходимы для прикрепления к клеткам эпителия кишечника. У патогенных E. сoliобнаружены 3 типа факторов адгезии, которые кодируются плазмидными генами:
а) факторы колонизации фимбриального типа;
б) белки наружной мембраны, помогающие прикреплению к клеткам. У энтеропатогенной кишечной палочки в роли адгезина выступает белок интимин, который для прикрепления к эпителиоцитам требуетр специализированного рецептора к интимину (ТИР-транслоцируемый рецептор интимина). В норме на клетках макроорганизма такого рецептора нет. Однако, он присутствует в бактериальной клетке. После контакта с E. сoli с клетками эпителия тонкой кишки с помощью интектисомы (в состав которой входят сократительные белки) происходит впрыскивание белков, составляющих рецептор к интимину, внутрь эпителиоцита. Через некоторое время этот рецептор появляется (начинает экспрессироваться) на мембране энтероцита. E. сoli посредством интимина присоединяется к транслоцированному рецептору, что обеспечивает прочную адгезию микроба с поверхностью эпителиальных клеток.
в) фимбрии, способствующие прикреплению к клеткам.
2. Факторы инвазии – это белки наружной мембраны. С их помощью энтероинвазионные E. сoliпроникают в эпителиальные клетки, размножаются в них и вызывают их разрушение.
3. Экзотоксины – энтеротоксины, синтез которых зависит от плазмиды Ent. Среди них различают цитотоксины и цитотонины.
Цитотоксины обусловливают разрушение клеток эндотелия капилляров и стенки кишечника. Цитотонины стимулируют гиперсекрецию клетками кишечника жидкости, что приводит к дегидратации организма. Выделяют два варианта цитотонинов: термолабильные и термостабильные энтеротоксины. Низкомолекулярный термостабильный токсин повышает уровень циклического гуанилмонофосфата в клетках эпителия, что приводит к нарушению транспорта железа и выходу жидкости.
Действие высокомолекулярного термолабильного токсина аналогично действию токсина холерного вибриона. Токсин состоит из двух компонентов: А и В. Компонент В состоит из 5 одинаковых субъединиц, он соединяется с галактолипопротеинами на мембранах клеток эпителия, формирует внутримембранный канал, что позволяет компоненту А проникать в клетки. Компонент А состоит из двух полипептидных цепей (А1 – собственно токсин) и А2. Пептид А активирует аденилатциклазу, что приводит к накоплению цАМФ и нарушению водно-солевого обмена.
4. Эндотоксины – липополисахариды, обладают пирогенным действием, определяют антигенную специфичность бактерий, форму колоний, в больших дозах угнетают фагоцитоз, вызывают эндотоксический шок.
5. E. сoli могут иметь и другие плазмиды:Сol-плазмиды, ответственные за синтез колицинов, угнетающие размножение других бактерий; R-плазмиды, обеспечивающие устойчивость к антибиотикам; F- половые, кодируют образование sex-пилей; Hlу – обеспечивают способность синтеза гемолизинов.
Энтеротоксигенные E. сoli включают 70 серогрупп. Эти возбудители имеют факторы патогенности (пили или фимбрии), способствующие адгезии и колонизации нижних отделов тонкого кишечника, имеют энтеротоксины, синтез которых кодируется плазмидными генами. Они вызывают нарушение водно-солевого обмена. Заболевание протекает по типу