Количественное определение белка в сыворотке крови биуретовым методом
Принцип метода. Реакция основана на том, что в щелочной среде в присутствиеи солей меди белки дают фиолетовое окрашивание, обусловленное образованием комплекса ионов меди с пептидной группировкой. Интенсивность окраски комплекса, которая зависит от количества белка в исследуемой пробе, измеряется на фотоэлетроколориметре (ФЭКе).
Ход работы. К 5 мл биуретового реактива, представляющегособойсмесь сульфата меди, сегнетовой соли, йодистого калия и щелочи, добавить 0,1 мл исследуемого белка. Через 30 минут пробу колориметрировать на ФЭКе в кювете шириной 10 мм при зеленом светофильтре против контроля, который готовят путем добавления к 5мл биуретового реактива 0,1 мл 0,9% NaCI. Количество белка в растворе определить по калибровочному графику.
Результат.
Вывод.
ПРИЛОЖЕНИЕ ДЛЯ ЛЕЧЕБНОГО И МЕДИКО-ПРОФИЛАКТИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА
Причины развития гипопротеинемий:
- Недостаточное поступление белка с пищей (недоедание, голодание, опухоли, сужение пищевода, нарушение пищеварения и всасывания белка в ЖКТ. Это алиментарная гипопротеинемия.
- Понижение процессов биосинтеза белка (различные заболевания, лечение, приводящее к нарушению белоксинтезирующей функции).
- Потеря белков при острых и хронических кровопотерях, при увеличении проницаемости, при кровоизлияниях, отеках.
- Дефектопротеинемия, т.е. иногда встречающееся у больных, как правило, наследственные, нарушения синтеза отдельных белков. Например, врожденное отсутствие или недостаточное образование церулоплазмина в крови при болезни Вильсона.
- Потеря белка с мочой при патологии почек.
Причины развития гиперпротеинемий:
Следует заметить, что гиперпротеинемия – явление сравнительно редкое. Кратковременная относительная гиперпротеинемия наблюдается при сгущении крови из-за значительных потерь жидкости (профузные поносы, неукротимая рвота, усиленное потоотделение).
Незначительная абсолютная гиперпротеинемия наблюдается при токсических отравлениях РЭС, в клетках которой синтезируются глобулины. Стойкая гиперпротеинемия до 120 г/л и выше встречается при миеломной болезни, когда в плоских костях черепа появляются дополнительные очаги образования «ненормальных», патологических белков-парапротеинов.
ПРИЛОЖЕНИЕ ДЛЯ ПЕДИАТРИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА
Содержание белка в сыворотке в норме у новорожденных (52 – 72 г/л) и грудных детей (36 – 65 г/л).
1. Острые инфекционые заболевания сопровождаются увеличением α1- и α2-глобулинов при нормальном или слегка увеличенном количестве γ- глобулинов. Альбумины обычно немного уменьшены, а общий белок нормален.
2. Хронические воспалительные процессы, в отличие от острых, характеризуются увеличением γ- глобулинов и нормальным или слегка увеличенным количеством α1- и α2-глобулинов. Количество альбуминов немного уменьшено, общий белок – в пределах нормы. Таким образом, для острого воспалительного процесса характерна гиперальфаглобулинемия, а для хронического – гипергаммаглобулинемия.
3. Среди относительных гиперпротеинемий главное место занимает гиперпротеинемия при обезвоживании в раннем детском возрасте (недостаточный прием жидкости, токсикозы, понос, рвота).
4. При токсикозах изменения общего количества белка в сыворотке похожи на изменения при обыкновенном обезвоживании.
5. Среди заболеваний почек острые и хронические нефриты протекают по типу острых и хронических воспалительных процессов. Однако в этом случае степень увеличения α - глобулинов зависит не только от остроты процесса, но и от степени нефротического компонента.
Характерны изменения протеинограммы, наступающие при чистых нефрозах. Количество альбуминов резко уменьшено, в то время как α2-глобулины сильно увеличены. Количество
α1-глобулинов обычно уменьшено. Общий белок резко снижен.
6. При поражениях печеночных клеток они не могут участвовать в образовании достаточного количества альбумина и фибриногена, вследствие чего уровень последних в крови уменьшается. Поражение паренхимы печени сопровождается реактивным раздражением ретикуло-эндотелиальной системы, что приводит к увеличению β и γ- -глобулинов в плазме.
7. При острых заболеваниях печени (острых гепатитах, желтухах и др.) снижение альбуминов незначительно и компенсируется увеличением β- и γ- глобулинов, так что общее количество белков в плазме значительно не снижается.
8. При хроническом заболевании печеночной ткани (циррозах) гипоальбуминемия ярко выражена и не может быть компенсирована существующей в то же время гиперглобулинемией; таким образом, налицо значительное уменьшение общего количества белка в плазме (гипопротеинемия).
9. Ряд хронических заболеваний желудочно-кишечного тракта, которые протекают с продолжительными поносами (врожденный инфантилизм кишечника, хронические энтериты и др,) сопровождаются гипопротеинемией. Продолжительная потеря белков, попадающих из воспалительной слизистой оболочки в испражнения, приводит к уменьшению протеинов в крови, причем это происходит за счет альбуминов.
10. Из заболеваний крови следует отметить острые лейкозы. При этом заболевании картина не типична. Чаще встречается увеличение α2- и γ-глобулинов. Лимфогрануломатоз протекает по типу воспалительных процессов.
11. Анальбуминемия Бенгольда представляет собой врожденное наследственное заболевание, характеризующееся полным отсутствием альбуминов.
Подобным заболеванием является и так называемая конституциональная афибриногенемия – врожденное заболевание, напоминающее гемофилию, при котором в крови полностью отсутствует фибриноген. Кровь такого ребенка не свертывается. Среди этой группы наибольший интерес представляют агамма- и гипогаммаглобулинемия. Отсутствие γ-глобулинов связано с отсутствием иммунных тел, этим объясняется уменьшение сопротивляемости организма различным инфекциям и ряд других симптомов этого заболевания.
Описаны и другие формы агамма- или гипогаммаглобулинемии, как например, идиопатическая форма у подростков и взрослых, симптоматическая форма при различных заболеваниях (нефрозах, лейкозах, миеломе и др.), транзиторная форма у грудных детей и пр.
Следует отметить, что грудной ребенок более склонен к гипогаммаглобулинемии, чем взрослый. Гипоглобулинемия грудного возраста встречается у недоношенных детей, при водянке головного мозга, менингите, воспалении среднего уха и др.
12. В грудном возрасте на первом месте стоит гипопротеинемия недоношенного ребенка. Кривая протеинемии у него движется параллельно кривой его веса.
13. Гипопротеинемия наблюдается также при хронических гнойных процессах и дерматозах, при обширных ожогах, во время шока и коллапса, при недоедании в раннем детском возрасте, эскудативном дерматозе, атрофии, при некоторых формах спазмофилии, при фиброзном кистозном панкреатите.
Домашнее задание