САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ АУДИТОРНАЯ РАБОТА. Задания для самостоятельной работы:

ПО ТЕМЕ «ОБМЕН И ФУНКЦИИ УГЛЕВОДОВ»

Задания для самостоятельной работы:

1. Составить метаболическую карту углеводного обмена.

2. На карте отметить:

2.1. Диагностически значимые субстраты (глюкоза, пируват, лактат, гликоген печени и мышц, галактоза, фруктоза).

2.2. Ферменты, исследуемые с целью диагностики (глюкозо-6-фосфатаза, фруктозо-1,6-дифосфатальдолаза, ЛДГ, гликогенфосфорилаза, глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа).

2.3. Регуляторные ферменты гликолиза, метаболизма гликогена, глюконеогенеза, пентозофосфатного пути.

2.4. Витаминзависимые ферменты.

3. Решение и обсуждение ситуационных задач.

Дата: _________________

ЗАНЯТИЕ № 24

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТРИГЛИЦЕРИДОВ

В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

ПРИНЦИП МЕТОДА. Освободившийся в процессе расщепления триглицеридов глицерол превращается в глицерол-3-фосфат под действием глицеролкиназы. Глицерол-3-фосфат окисляется глицерофосфатоксидазой до диоксиацетонфосфата с образованием Н₂О₂. Далее Н₂О₂ расщепляется пероксидазой на воду и атомарный кислород, который и окисляет хинониминовый краситель. Оптическая плотность образующегося окрашенного соединения определяется фотометрически.

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки – опыт, стандарт и контроль

Реагенты	Опыт	Стандарт	Контроль
Сыворотка крови Стандарт (2,5 ммоль/л) Н₂О Рабочий реагент (буфер, смесь ферментов и краситель)	0,02 мл - - 2,0 мл	- 0,02 мл - 2,0 мл	- - 0,02 мл 2,0 мл
Перемешать, инкубация в термостате 10 минут при 37ºС.
ФЭК, l = 490-500 нм, колориметрия опыта и стандарта против контрольной пробы, кювета - 5 мм.

РЕЗУЛЬТАТ: Е_ст = ; Е_оп = ; С_ст = 2,5 ммоль/л

_·

Конечный результат рассчитывают по формуле:

Е_ст

Из рассчитанной концентрации триглицеридов вычесть 0,11 ммоль/л (это концентрация свободного глицерина в сыворотке).

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Нормальное содержание триглицеридов в сыворотке крови у взрослых составляет: 0,40 – 1,54 ммоль/л у женщин и 0,45 – 1,82 ммоль/л у мужчин. У новорожденных содержание триглицеридов в крови составляет 0,1 – 0,98 г/л, у детей 2-14 лет – 0,31 – 1,38 г/л.

Гипертриглицеридемияможет быть обусловлена:

- алиментарными причинами (развивается после приема жирной пищи),

- патологическими состояниями – ожирение, голодание, кровопотери, тяжелая анемия, сахарный диабет, панкреатит, вирусный гепатит, алкогольный цирроз печени, острая перемежающаяся порфирия, гликогеноз I, III, IV типов.

Гипотриглицеридемияотмечается при абеталипопротеинемиях и гипобеталипопротеинемиях, что чаще всего связано с угнетением синтеза в печени апопротеина В.

ВЫВОД:

Дата: __________

ЗАНЯТИЕ № 25

РАБОТА № 1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО ХОЛЕСТЕРИНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ

(энзиматический метод)

ОБОСНОВАНИЕ ВЫПОЛНЕНИЯ РАБОТЫ. В организм человека холестерин поступает с пищевыми продуктами (0,3 - 0,5 г) и постоянно синтезируется в печени, почках, надпочечниках, слизистой оболочке тонкого кишечника, стенке артерий, коже. Содержание холестерина в крови увеличивается при нарушении липидного обмена.

ХИМИЧЕСКИЙ МЕХАНИЗМ МЕТОДА:

пероксидаза

Хинониминовый краситель (окисленный) окрашенный

Хинониминовый краситель (восстановленный) бесцветный

Н₂О₂ +

+ 2Н₂О.

Интенсивность окраски красителя прямо пропорциональна концентрации холестерина в пробе.

ХОД РАБОТЫ: взять три пробирки.

Проба Отмерить	Опыт	Стандарт	Контроль
Сыворотка крови	0,02 мл	-	-
Стандарт	-	0.02 мл	-
Дистил. вода	-	-	0,02 мл
Рабочий реактив	2,0 мл	2,0 мл	2,0 мл

Пробы перемешать и инкубировать 15 минут при температуре
20 – 25°С или 10 минут при 37°С.

Фотометрия против контроля при l = 490-520 нм, кювета 5 мм.

РЕЗУЛЬТАТ: Е_о =

Е_ст=

С_ст = 5,17 ммоль/л

_·

Е_ст

РАСЧЁТ:

КЛИНИКО-ДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ.

Содержание общего холестерина в крови у взрослых составляет 3,1 - 5,2 ммоль/л, у новорожденных 1,3 – 2,6 ммоль/л, у детей 2-14 лет 3,11 – 5,18 ммоль/л.

Повышение концентрации холестерина в крови (гиперхолестеринемия) наблюдается при атеросклерозе, сахарном диабете, механической желтухе, нефрозе, гипотиреозе, гиперлипопротеинемии II-IV типов. Понижение холестерина в крови (гипохолестеринемия) наблюдается при гипертиреозе, голодании, анемии, туберкулезе, раковой кахексии, лихорадочных состояниях, паренхиматозной желтухе, циррозе печени.