Определение изоэлектрической точки белков
*Определение изоэлектрической точки желатина по минимуму набухания
1. В три пробирки вносят по 0.2 г порошка желатина.
2. В первую пробирку наливают 1 мл буферного раствора с рН 1.0, во вторую – с рН 4.7, а в третью – с рН 9.0.
3. Пробирки осторожно встряхивают и оставляют на 1 ч.
4. Затем определяют высоту геля в пробирках.
5. Зарисовывают результаты, делают вывод о численном значении изоэлектрической точки желатина.
*Определение изоэлектрической точки желатина по мутности (по коагуляции)
1. В три пробирки наливают по 0.5 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.
2. Затем в пробирки добавляют по 0.5 мл 0.5% раствора желатина.
3. Далее во все пробирки приливают по 1 мл этилового спирта.
4. Наблюдают коагуляцию желатина (образование мутности) в одной из пробирок.
5. Записывают и объясняют результаты.
*Определение изоэлектрической точки казеина по мутности (по коагуляции)
1. В три пробирки наливают по 1 мл буферных растворов с рН 3.7, 4.7, 5.7.
2. Затем в пробирки добавляют по 1 мл золя казеина.
3. Через 10 мин наблюдают максимальную коагуляцию казеина (наибольшее помутнение) в одной из пробирок.
4. Сравнивают полученные результаты с изоэлектрической точкой желатина.
5. Делают вывод о факторах, обеспечивающих устойчивость казеина.
Реакции осаждения белков
*Осаждение белков при нагревании
1. В пять пробирок наливают по 2 мл 1% раствора яичного белка.
2. Содержимое 1-ой пробирки нагревают.
3. Во 2-ую пробирку добавляют каплю 1% CH3COOH и нагревают.
4. В 3-ю пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH3COOH и нагревают.
5. В 4-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% CH3COOH, несколько капель насыщенного раствора NaCl и нагревают.
6. В 5-ую пробирку добавляют 0,5 мл 10% раствора NaOH и нагревают.
7. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
*Осаждение белков концентрированными минеральными кислотами
1. В три сухие пробирки наливают по 2 мл концентрированных азотной, соляной и серной кислот.
2. Наклонив каждую пробирку, осторожно по стенке приливают в нее по 0,5 мл 1% раствора яичного белка так, чтобы он не смешивался с кислотой.
3. Наблюдают появление белого аморфного осадка на границе двух жидкостей.
4. Все пробирки встряхивают.
5. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
*Осаждение белков органическими кислотами
1. В пробирку наливают 2 мл раствора белка и добавляют несколько капель 5% раствора трихлоруксусной кислоты (ТХУ).
2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.
*Осаждение белков спиртом
1. В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют 2 мл C2H5OH и взбалтывают.
2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.
*Осаждение белков ацетоном
1. В пробирку наливают 1 мл раствора белка, добавляют осторожно по стенке пробирки 0.5 мл ацетона.
2. Наблюдают, записывают и объясняют результат.
*Осаждение белков фенолом и формалином
1. В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
2. Далее в первую пробирку добавляют 1 мл насыщенного водного раствора фенола, а во вторую – 1 мл формалина.
3. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
*Осаждение белков солями тяжелых металлов
1. В две пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
2. Далее в первую пробирку медленно, по каплям при встряхивании добавляют раствор сульфата меди, а во вторую – раствор ацетата свинца.
3. Наблюдают появление осадков.
4. Затем в каждую пробирку добавляют соответствующий раствор в избытке.
5. Наблюдают, записывают и объясняют результаты.
*Осаждение белков реактивами на алкалоиды
1. В три пробирки наливают по 1 мл раствора белка.
2. Растворы подкисляют 2 каплями 1% раствора уксусной кислоты (в каждую пробирку).
3. В первую пробирку добавляют 5 капли насыщенного раствора пикриновой кислоты.
4. Во вторую – 5 капли 10% раствора таннина.
5. В третью – 3 капли 5% раствора HCl, а затем 5 капель 5% раствора гексацианоферриата калия, взбалтывая после добавления каждой капли.