Клинико-диагностическое значение определения активности амилазы

⇐ Назад

Амилаза -фермент, осуществляющий расщеплении крахмала и гликогена. наиболее богаты им поджелудочная и слюнные железы. Содержание амилазы в сыворотке крови связано с приемом пищи: днем активность выше, чем ночью.

Активность амилазы в сыворотке крови повышается (гиперамилаземия) при:

· Остром панкреатите (в 10-30 раз, приходя к норме на 6-7 сутки, если активность сохраняется увеличенной более 5 суток, это говорит о развитии хронического процесса);

· Обострении хронического панкреатита;

· Паротите (воспалении слюнных желез);

· Почечной недостаточности;

· Может быть вызвана приемом алкоголя, адреналина, наркотических веществ.

Снижение активности амилазы в сыворотке крови (гипоамилаземия) наблюдается при:

· Заболеваниях печени (гепатитах, механической желтухе, циррозе);

· Сахарном диабете;

· Гипотереозе;

Повышениеактивности в моче (гиперамилазурия) наблюдается при:

· Остром панкреатите (имеет большее диагностическое значение, чем определение в сыворотке, так как держится более 7 суток);

· Паротите;

Снижение активности фермента в моче (гипоамилазурия) наблюдается при:

· почечной недостаточности.

Ответьте на вопросы:

1. Назовите место локализации, оптимальное рН и биологическое значение амилазы.

2. Напишите реакцию, которую катализирует амилаза.

3. К какому классу ферментов относится амилаза?

4. *Назовите основные заболевания, характеризующиеся повышением активности амилазы. Объясните причину.

5. *Расскажите о причинах, видах, лабораторной диагностике и профилактике панкреатита.

Практическая работа

«Определение активности аминотрансфераз в сыворотке крови».

Цели практической работы:

· изучить клинико-диагностическое значение определения аминотрансфераз в сыворотке крови;

· научиться определять активность аминотрансфераз в сыворотке крови.

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Принцип:

В результате переаминирования, происходящего под действием АсАТ и АлАТ, образуются щавеливоуксусная и пировиноградные кислоты. При добавлении раствора 2,4-динитрофенилгидразина ферментативный процесс останавливается, и возникают гидразоны пировиноградной кислоты. В щелочной среде они дают окрашивание, интенсивность которого пропорциональна количеству образовавшейся пировиноградной кислоте.

Реактивы: 1. Эталонный раствор натрий пировинограднокислый – 2 ммоль/л. 2. 2,4 – динитрофенилгидразин – 1 ммоль/л. 3. Гидрооксид натрия - 0,4 н.. 4. Субстрат АсАТ/АлАТ. 5. Сыворотка. 6.Физиологический раствор.

Оборудование: 1. Термостат. 2. ФЭК, кюветы на 1 см. 3. 2 пробирки. 4. Штатив для пробирок. 5. Пипетки на 1 и 5 мл. 6. Дозатор на 0.05 мл.

Ход определения:

Проведите исследование активности аминотрансфераз в сыворотке крови согласно таблице.

Реактивы.	Опытная проба, мл.	Контроль, мл.
Субстрат.	0.25	0.25
Физ. Раствор.	-	0.05
Прогреть 5 минут в термостате при 37^оС.
Сыворотка.	0.05	-
Инкубировать в термостате на 30 минут при 37^оС.
Динитрофенилгидразин.	0.25	0.25
Оставить стоять при комнатной температуре 20 минут.
Гидрооксид натрия.	2.5	2.5
Оставить стоять при комнатной температуре 5 минут

Оптическую плотность измеряем на ФЭКе при длине волны 500-530 нм (зеленый светофильтр), в кювете на 1 см.

Расчет проводим по калибровочному графику.

Норма активности аминотрансферазв сыворотке крови:

АсАТ = 0.1 – 0.75 мкмоль/л*ч,

АлАТ = 0.1 – 0.68 мкмоль/л*ч.

Клинико-диагностическое значение

⇐ Назад