Проведение анализа образцов крови
· В микроколонку внести 5,0 мл рабочего буферного раствора 1 и дать жидкости стечь.
· После полного стекания жидкости в микроколонку влить 0,1 мл цельной крови.
· Выдержать 1 -2 мин.
· Затем в микроколонку внести 0,1 мл рабочего буферного раствора 1 и выдержать 5-10 мин.
· Затем внести в микроколонку 5,0 мл рабочего буферного раствора 1 и дать жидкости стечь.
· Микроколонку перенести пробирку Б и внести 4,0 мл рабочего буферного раствора 2.
· Дать жидкости стечь.
· Вынуть микроколонки из пробирок.
· Растворы в пробирках А (фракция А) и Б (фракция Б) перемешать.
· Измерить оптическую плотность растворов из пробирок А и Б при длине волны 414 нм в кювете на 1 см, используя в качестве контроля дистиллированную воду.
Расчет содержания гликозилированного гемоглобина в процентах рассчитать по формуле:
% GHb = (ЕБ*100) / (ЕБ + 2,55*ЕА)
где:
ЕБ - оптическая плотность фракции Б;
ЕА - оптическая плотность фракции А;
2,55 - пересчетный коэффициент оптической плотности фракции А;
100 - пересчетный коэффициент для вычисления процентного содержания.
Норма гликизированного гемоглобина в крови здоровых людей4,4 - 8 %.
Клинико-диагностическое значение определение гликозилированного гемоглобина.
Определение гликозилированного гемоглобина проводят для ранней диагностики сахарного диабета, особенно при массовых обследованиях населения на скрытые формы диабета, а также для ретроспективной оценки степени декомпенсации данного заболевания за последние три месяца для улучшения контроля за эффективностью лечения сахарного диабета.
Ответьте на вопросы:
1. Перечислите основные лабораторные исследования при сахарном диабете.
2. Чем опасна длительная гипергликемия?
3. Почему при длительной гипергликемии количество гликозилированного гемоглобина возрастает?
4. Чем опасно для организма человека увеличесние количества гликозилированного гемоглобина?
5. На клетках каких тканей имеются белки-рецепторы для взаимодействия:
а) с инсулином; б) с глюкагоном; в) адреналином; б) йодтиронинами?
6. *Напишите схематично образование гликированных белков в крови.
7. *Каково влияние инсулина и адреналина на ферменты: а) гликолиза? б) биосинтеза и распада гликогена? в) глюконеогенеза? г) ЦТК?
Практическая работа
«Глюкозотолерантный тест».
Цели практической работы:
· закрепить знания о причинах, осложнениях и диагностике сахарного диабета;
· научиться строить гликемическую кривую и определять её тип при ГТТ;
· научиться решать ситуационные задачи.
Задания для самостоятельной работы:
1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения ГТТ.
2. Зарисуйте схематично гликемические кривые в норме, при латентном и явном сахарном диабете.
3. Решите предложенные преподавателем задачи.
4. Ответьте на дополнительные вопросы.
Принцип.
В ответ на поступление в организм углеводов, вырабатывается инсулин, который ограничивает повышение уровня глюкозы в крови. Если степень гипергликемии превосходит обычную, то говорят о снижении толерантности организма к глюкозе.
Методика проведения ГТТ с однократной нагрузкой.
1. Натощак берут кровь из пальца и определяют в ней содержание глюкозы унифицированным методом.
2. Затем дают выпить раствор 75 грамм глюкозы на 200 мл воды (1,75 г глюкозы на 1 кг веса), подкисленный лимонной кислотой.
3. Через 30, 60, 120, 180 минут после приема сахара определяют уровень глюкозы в крови.
4. Результаты вносят в таблицу и на их основании строят гликемические кривые, откладывая на оси абсцисс время забора крови, а на оси ординат – найденное содержание сахара в крови в ммоль/л.
5. При анализе гликемических кривых обращают внимание на следующие параметры:
· Начальное содержание глюкозы в крови.
· Быстроту и высоту подъема гликемической кривой.
· Продолжительность гипергликемии и характер её снижения.