Для определения СРБ используется антисыворотка, которая в присутствии СРБ образует преципитат

Реактивы: 1. Антисыворотка к СРБ. 2.Исследуемая сыворотка или серозная жидкость. Оборудование: 1. Капилляры Панченкова. 2. Штатив (брусок пластилина).

Ход определения:

· Капилляр Панченкова опустить в флакон с антисывороткой к СРБ и заполнить на 1/3 высоты.

· Протереть конец капилляра ватой.

· Опустить капилляр в исследуемый материал и заполнить на 1/3 высоты (между реагентами не должно быть воздуха).

· Тщательно перемешать содержимое капилляра, покачивая его 10-12 раз и перемещая жидкость из одного конца к другому.

· Погрузить конец капилляра в штатив (брусок пластилина) таким образом, чтобы конец капилляра был на 10-15 мм свободен от жидкости. Погружать следует, осторожно поддерживая капилляр в горизонтальном положении, а штатив – вертикально.

· Оставляют стоять штатив при комнатной температуре.

· Предварительный учет результатов проводят через 4 часа, окончательно учитывая через 24 ч.

 

Учет результатов:

1. Выпадение преципитата (хлопьев, осадок) в капилляре указывает на наличие СРБ в исследуемом материале.

2. Преципитат высотой 1 мм оценивается как (+) – реакция слабо положительная; 2 мм (++) и 3 мм (+++) – реакция положительная; 4 мм и более (++++) – реакция резко положительная.

3. Количество преципитата учитывают по всему капилляру.

4. Реакция не специфична, но может служить признаком активности воспалительного процесса.

 

Клинико-диагностическое значение определения С-реактивного белка.

СРБ в сыворотке здоровых людей обычными методами не обнаруживается. Проба на СРБ становиться положительной в остром периоде многих воспалительных заболеваний, при злокачественных новообразованиях. Так положительные результаты наблюдаются при инфаркте миокарда, ревматизме, системной красной волчанке, инфекционном неспецифическом полиартрите, нефрите, лимфогранулематозе.

 

Ответьте на вопросы:

1. Какие белки относятся к белкам острой фазы?

2. Почему белки острой фазы так называются?

3. В чем заключается клинико-диагностическое значение белков острой фазы?

4. На каком принципе основано определение СРБ в сыворотке крови?

 

Практическая работа

«Определение мочевины в биологических жидкостях».

Цели практической работы:

· закрепить знания о превращениях и конечных продуктах распада белков в организме;

· получить представления об азотистом балансе, остаточном азоте, азотемии;

· научиться исследовать содержание мочевины в биологических жидкостях.

 

Задания для самостоятельной работы:

1. Перепишите в тетрадь принцип и методику проведения практической работы.

2. Оборудуйте рабочее место для практической работы.

3. Выполните практическую работу.

4. Сделайте необходимые расчеты.

5. Заполните бланк анализа. Оцените полученные результаты.

6. Сделайте вывод по работе и рисунки.

7. Ответьте на дополнительные вопросы.

Опыт № 1. Определение мочевины в биологических жидкостях неферментативным методом.

Принцип метода.

Метод основан на том, что мочевина образует с диацетилмоноксимом в сильнокислой среде в присутствии тиосемикарбазида и ионов трехвалентного железа красный комплекс, который фотометрируют.

 

Реактивы. 1.Эталон мочевины. 2.Диацетилмоноксим (яд!) Состав реакционной смеси: -диацетилмоноксим 5,0 ммоль/л; -тиосемикарбазид 0,9 ммоль/л; -кислота серная 0,9 ммоль/л; -соль железа трехвалентного 25,0 мкмоль/л. 3.Дистиллированная вода. 4.Сыворотка крови. Оборудование. 1. Пробирки - 3шт. 2. Пипетки на 0,01 мл и 2,00 мл. 3. Фольга. 4. Кювета на 1 см. 5. ФЭК. 6. Водяная баня.  

Ход определения:

· В пробирки вносят необходимые реактивы в следующих соотношениях.

Реактивы. Проба, мл. Эталон, мл. Контрольный раствор, мл.
1. Сыворотка или разведенная моча. 0,01 - -
2. Реактив 1. - 0,01 -
3. Дист. вода. - - 0,01
4. Реактив 2. 2,00 2,00 2,00

· Смеси перемешивают.

· Отверстие пробирки закрываю алюминиевой фольгой, и нагревают на кипящей водяной бане точно 10 минут.

· Содержимое пробирок быстро охлаждают в токе холодной воды.

· До 15 минут измеряют оптическую плотность пробы (А1) и эталона (А2) против контрольного раствора. Измерения проводят при длине волны 490-540 нм в кювете 1 см.

 

Расчетколичества мочевины проводят по формуле:

С мочевина = 16,65 * А1 / А2 (ммоль/л)