Основные серологические реакции
Реакция агглютинации (РА) представляет собой один из способов выявления антигена/антител по принципу нахождения известного по неизвестному. В случае нерастворимости антигена (его корпускулярности) при добавлении к нему специфичных антител происходит формирование комплекса "антиген-антитело" в виде белкового агломерата. Этот феномен получил название агглютинации. Основное преимущество реакции агглютинации - возможность визуального учета и простота постановки. С другой стороны в сравнении с более современными способами выявления антиген/антитела чувствительность реакции агглютинации невысока.
Существуют различные варианты РА:
1) пробирочные и на стекле,
2) объемные и капельные,
3) количественные и качественные,
4) обычные, ускоренные и экспресс-реакции
Основные области применения РА связаны с необходимостью индентификации микробных культур, антигенов клеток крови (А,В,0), а также с определением наличия и титра антител или антигенов в сыворотке крови в практике инфекционных болезней.
Компоненты РА: 1) диагностический компонент - антиген в виде суспензии в случае поиска антител, т.е. диагностикум, или раствор антител при необходимости идентификации антигена, т.е. диагностическая сыворотка.В случае РА чаще диагностикум называют агглютиногеном, а диагностическую сыворотку - агглютинином;
2) исследуемый материал - микробная культура в виде суспензии или выросшей на скошенном агаре, клетки крови (эритроциты при определении антигенов по системе А,В,0), сыворотка крови пациента при диагностике инфекционного заболевания или сыворотка крови лабораторного животного при постановке биологического/иммунологического эксперимента;
3) раствор электролита в качестве среды для разведения ингредиентов реакции и в качестве среды для постановки реакции. Обычно используют 0,15 М (0,85%) раствор хлорида натрия, реже - другие прописи.
Лабораторная посуда и необходимое оборудование. Как правило для постановки РА необходим ограниченный перечень оборудования: 1) пробирки или предметные стекла для самой реакции (иногда нужны особые блюдца или другие предметы, например, для определения группы крови), 2) пипетки стеклянные или автоматические дозаторы с наконечниками, 3) термостат или холодильник, т.к. разные варианты РА проводятся при разных температурных режимах, 3) источник света и черная поверхность для лучшей визуализации результата РА.
Схема постановки РА: 1) приготовление разведений исследуемого образца, 2) внесение разведений в пробирки или нанесение их на стекло, 3) добавление диагностического компонента, 4) инкубация при необходимых температурных условиях, 5) регистрация результатов.
Регистрация результатов РА проводится по системе 4+ в процессе визуального осмотра.
Реакция пассивной (непрямой) гемагглютинации (РПГА). Название реакции означает, что феномен агглютинации формируется при участии вспомогательных частиц, т.е. пассивно или непрямым способом. Реакция пассивной (непрямой) агглютинации проводится для регистрации взаимодействия антиген-антитело в том случае, когда антиген водорастворим и при его связывании со специфическими антителами не происходит образования крупных видимых глазом агломератов. Но если такой водорастворимый антиген неспецифически сорбировать на каких-либо частицах, то проводимая реакция приобретает все характерные для реакции агглютинации черты. Чаще всего для постановки РПА (РНА) применяют эритроциты барана или частицы латекса диаметром 3-5 мкм. При использовании эритроцитов барана в качестве носителя диагностического компонента реакцию называют реакцией пассивной гемааглютинации или реакцией непрямой гемагглютинации - РПГА или, соответственно, РНГА. При использовании частиц латекса реакцию пассивной агглютинации называют реакцией латекс агглютинации - РЛА
Основные области применения РПА : определение эффективности поствакцинального иммунитета (определение уровня специфических антител после вакцинации), диагностика инфекционных болезней (определение титра антител или присутствия в биологических средах пациента антигенов микроорганизма, являющегося причиной заболевания), диагностика аутоиммунных заболеваний (например, определение ревматоидного фактора).
Компоненты РПА: 1) диагностический компонент. Диагностикум, представляющий собой антиген, сорбированный на эритроцитах барана, в этом случае называется эритроцитарным диагностикумом. А если для сорбции антигена используют частицы латекса, то диагностикум называют латексным. В случае определения антигена по известным антителам на частицах (эритроцитах или латексе) необходимо сорбировать диагностические антитела, тогда диагностическая сыворотка называется эритроцитарным (латексным) антительным диагностикумом;
2) исследуемый материал - сыворотка крови пациента при диагностике инфекционных или аутоиммунных заболеваний или сыворотка крови лабораторного животного при постановке биологического/иммунологического эксперимента;
3) раствор электролита в качестве среды для разведения ингредиентов реакции и в качестве среды для постановки реакции. Обычно используют 0,15 М (0,85%) раствор хлорида натрия, реже - другие прописи.
Лабораторная посуда и необходимое оборудование. Как правило для постановки РПА необходимы то же оборудование, что и для постановки РА.
Схема постановки и учета РПА аналогичны РА.