Методы и один из способов определения сахара в моче

Унифицированный метод определения с помощью индикаторных полосок
Метод основан на специфическом окислении глюкозы с помощью фермента глюкозооксидазы; образовавшаяся при этом перекись водорода разлагается пероксидазой и окисляет краситель. Изменение окраски красителя при окислении свидетельствует о присутствии глюкозы в моче.

Реактивная бумага “Глюкотест” представляет собой полоски бумаги 0,5 ґ 5 см, имеющие поперечную полосу светло-желтого цвета, пропитанную раствором ферментов и красителя. С помощью бумаги “Глюкотест” можно обнаружить глюкозу в моче и ориентировочно определить ее концентрацию.

Ход исследования
Индикаторную бумагу погружают в исследуемую мочу так, чтобы желтая полоса с реактивами оказалась смоченной, после этого ее немедленно извлекают из мочи и на 2 мин оставляют на пластмассовой пластинке. По истечении 2 мин сразу же сравнивают изменившуюся окраску цветной полосы на бумаге со шкалой, имеющейся в комплекте.

Содержание глюкозы в моче определяют по наиболее совпадающему со шкалой цвету полоски.

Полоски хранят при температуре от +8 до +18 °С, избегая попадания на них прямых солнечных лучей; не рекомендуется дотрагиваться рукой до цветной шкалы полоски. Исследуют свежесобранную мочу; при содержании в моче глюкозы более 20 г/л интенсивность окраски цветной полосы становится предельной (соответствует 2% по шкале) и далее не меняется.

Унифицированные методы обнаружения глюкозы в моче. Проба Гайнеса
Можно использовать готовый набор реактивов.

Метод основан на способности глюкозы восстанавливать в щелочной среде при нагревании гидрат окиси меди (синего цвета) в гидрат закиси меди (желтого цвета) и закись меди (красного цвета). Для того чтобы из гидрата окиси меди при нагревании не образовался черный осадок окиси меди, к реактиву добавляют глицерин, гидроксильные группы которого связывают гидрат окиси меди.

Необходимые реактивы
1. Реактив Гайнеса: 13,3 г кристаллического сульфата меди (СuSO4 ґ 5Н2О) растворяют в 400 мл дистиллированной воды.

2. 50 г едкого натра растворяют в 400 мл дистиллированной воды.

3. 15 г глицерина растворяют в 200 мл дистиллированной воды. Далее первый и второй растворы смешивают и тотчас же приливают третий раствор. Реактив стоек.

Ход исследования
К 6—8 мл мочи прибавляют 20 капель реактива до появления голубоватой окраски, смешивают и нагревают верхнюю часть пробирки до начала кипения. Нижняя часть пробирки — контроль. При наличии глюкозы в моче появляется желтая окраска в верхней части пробирки.

При бактериурии глюкоза мочи быстро разлагается.

Проба Бенедикта
Реакция основана на свойстве глюкозы восстанавливать гидрат окиси меди в щелочной среде в гидрат закиси меди (желтый цвет) или закись меди (красный цвет).

Необходимые реактивы
1. В однолитровую мерную колбу наливают 700 мл воды, добавляют 173 г цитрата натрия, 100 г безводного (или 200 г кристаллического) карбоната натрия. Нагревают до растворения.

2. Отдельно растворяют 17,3 г сульфата меди в 100 мл воды.

Смешивают оба раствора, непрерывно взбалтывая, после охлаждения доливают водой до 1 л.

Ход исследования
В пробирку наливают 5 мл реактива и прибавляют 8—10 капель мочи. Пробу нагревают в течение 2 мин на пламени или 5 мин в кипящей водяной бане. Дают пробирке остыть в течение 5—7 мин. При наличии сахара появляется зеленая, желтая или красная окраска жидкости с осадком. При зеленой окраске без наличия осадка проба считается отрицательной.

Проба Бенедикта является самой надежной, так как при большом разведении мочи (8—10 капель мочи на 5 мл реактива) восстанавливающее действие других редуцирующих веществ мочи выражено слабо.

Проба Нилендера
Проба основана на восстановлении глюкозой нитрата висмута в металлический.


Унифицированный поляриметрический метод определения содержания глюкозы
Метод основан на использовании свойства раствора глюкозы вращать плоскость поляризованного луча вправо. Угол вращения пропорционален концентрации глюкозы в растворе.
Точность поляриметра проверяют, исследуя стандартный раствор глюкозы, но этот раствор годен для работы только через 24 ч после его приготовления.
Определению могут мешать β-оксимасляная кислота, препараты тетрациклинового ряда, стрептомицин.