Количественное определение пепсина в желудочном соке (по Пятницкому).

Принцип: створаживание молочно – ацетатной смеси при рН 5 и температуре 25°С происходит строго параллельно его переваривающей способности.

Исследуемый Материал Реактивы Время створаживания в секундах Расчет количества единиц пепсина в 1 мл желудочного сока
Желудочный сок 0,1 мл при 25˚С Молочно – ацетатная смесь, 5 мл при 25°С 15 сек. Х= 60 сек * 15=4 ед. в 0,1 мл желудочного сока, а в 1 мл сока = 4*10= 40 ед или 40*0,01 мг кристаллического пепсина = 0,4 мг кристаллического пепсина

Вывод: в соке содержится 40 ед ( или 0,4 мг кристаллического) пепсина, что соответствует норме.


Таблица 2 Определение кислотных компонентов желудочного сока. Принцип метода определения кислотности желудочного сока:основан на определении кислотных веществ желудочного сока путем титрования их раствором гидроксида натрия с использованием индикатора. Принцип метода определения молочной кислоты: основан на способности молочной кислоты в присутствии фенолята железа (III), образовывать соль лактата железа желто – зеленого цвета   Проба Уфельмана на молочную кислту: 20 кап. р-ра фенола + 1 кап. р-ра FeCl3,+ желудочный сок№3 по каплям до изменения окраски Фиолетовое окрашивание (нормальный желудочный сок) Желто – зеленое окрашивание .(патологический желудочный сок ВЫВОД: В желудочном соке №1 общая кислотность – 50 ед, свободная НСl – 30 ед, связанная НСl – 10 ед, что Соответствует нормаль ным показателям кислотности желудочного сокма, а в соке №2 – соответственно 70 ед, 50 ед, 30 ед, что выше нормы. В соке №3 присутствует молочная кислота.
Единицы кислотности (ммоль/мл) на 100 мл желудочного сока Общая кислотность норма 40-60ЕД   Д1=Z1*100   Д2=Z2*100
Связанная HСl норма 5-20ЕД   С1=В1-А1   С2=В2-А2
Общая HСl Y1+Z1 *100 B1= 2 .   Y2+Z2 *100 B2= 2 .  
Свободная HСl Норма 20-40 ЕД   А1=Х1*100   А2=Х2*100
Количество мл NaOH (0,1 М р-р), пошедшего на титрование 5 мл желудочного сока До III пункта -розовое окрашивание Z1=?мл Z2=?мл
До II пункта лимонно – желтое окрашивание Y1=?мл Y2=?мл
до I пункта оранжевое окрашивание Х1=?мл Х2=?мл
Материал Жел.сок №1-5 мл +1-2кап. пара-диметиламиноазобензола +2кап. фенолфталеина Жел.сок №2-5 мл +1-2кап. пара-диметиламиноазобензола +2кап. фенолфталеина

ЗАНЯТИЕ №13

ТЕМА: Биологическое окисление. Количественное определение каталазной активности крови. Обнаружение дегидрогеназ лимоннокислого цикла.

Работа на занятии.

Цели занятия.

Студенты должны уметь:

- провести количественное определение каталазы крови по Баху и Зубковой;

- объяснить диагностическое значение определения активности каталазы крови;

- обнаружить активность дегидрогеназ лимоннокислого цикла в мышцах по обесцвечиванию метиленовой сини;

- проанализировать результаты определений, оформить протокол, сформулировать выводы.

Цели самоподготовки.

Студенты должны знать:

- что такое биологическое окисление, аэробное и анаэробное окисление;

- что такое редокс – потенциал и каково его значение в биологических окислительно-восстановительных системах;

- характеристику стадий биологического окисления и центральных путей метаболизма;

- что такое первичные субстраты биологического окисления и как они образуются;

- реакции превращения пировиноградной кислоты в процессе окислительного декорбоксилирования;

- характеристику реакций лимоннокислого цикла;

- реакции дегидрирования лимоннокислого цикла и их энергетический выход.

 

Хронокарта занятия.

Этапы занятия Время (мин.) Дидактическая система
1. Организационные вопросы 2 мин Классическая
2.Контроль исходного уровня знаний студентов и его коррекция 28 мин. Репетитор (хороший)
3. Организация самостоятельной работы студентов 10 мин. Технические средства общегрупповые
4. Самостоятельная работа студентов 80 мин. «Малая группа»
5. Итоговый контроль усвоения материала занятия 15 мин. Репетитор (хороший)

Оснащение занятия.

1.Оборудование: штативы с пробирками; шпатели, термостат или водяная баня на 37˚С; конические колбочки или стаканчики; мерная колба на 100 мл; микропипетка на 0,1 мл; пипетки на 1, 2 и10 мл; микробюретка для титрования.

2. Реактивы:перекись водорода, 1 % раствор; серная кислота, 10 % раствор; перманганат калия, 0,1 Н раствор; цитрат натрия, 3 % раствор нейтрализованный по лакмусу; сукцинат натрия, 3 % раствор, нейтрализованный по лакмусу; сульфосалициловая кислота, 20 % раствор; метиленовая синь, 0,002% раствор; вазелиновое масло или керосин.

3. Материалы для исследования: кровь, разведенная в 1000 раз; мышечная кашица.

 

Организационные вопросы.

Преподаватель выясняет, есть ли отсутствующие, обращает внимание на форму одежды студентов, сообщает цели занятия.

 

Контроль исходного уровня знаний.

Контроль проводится в виде устного разбора вопросов с последующим письменным контролем с помощью билетов исходного контроля знаний студентов (см. методические указания для самоконтроля знаний). Оценки выставляются в кафедральном журнале.

Вопросы для обсуждения.

1. Что такое биологическое окисление, аэробное и анаэробное окисление?

2. Что такое редокс – потенциал и каково его значение в биологических окислительно-восстановительных системах?

3. Охарактеризуйте стадии биологического окисления.

4. Охарактеризуйте центральные пути метаболизма.

5. Назовите первичные субстраты биологического окисления и объясните их образование.

6. Напишите реакции окислительного декарбоксилирования пировиноградной кислоты.

7. Напишите реакции лимоннокислого цикла и охарактеризуйте их.

8. Напишите реакции дегидрирования лимоннокислого цикла и рассчитайте их энергетический выход.