Тема: Обмен нуклеиновых кислот
ЦЕЛЬ: Рассмотреть особенности обмена нуклеиновых кислот и ознакомиться с методом количественного определения мочевой кислоты.
ТЕОРЕТИЧЕСКИЕ ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ.
1. Типы нуклеиновых кислот, их локализация в клетке. Компоненты нуклеиновых кислот.
2. Строение и уровни организации нуклеиновых кислот. Первичная структура ДНК и РНК. Представление об укладке ДНК в хроматине и хромосомах. Вторичная структура РНК (м-РНК, т-РНК, р-РНК).
3. Распад нуклеопротеидов в пищеварительном тракте. Нуклеопротеидный пул клеток, пути его пополнения и расходования.
4. Биосинтез пуриновых нуклеотидов: начальные стадии от рибозо-5-фосфата до 5-фосфорибозиламина, происхождение атомов пуринового ядра.
5. Распад пуриновых нуклеотидов. Концентрация мочевой кислоты в крови. Гиперурикемия. Подагра. Синдром Леша-Нихана.
6. Биосинтез и катаболизм пиримидиновых нуклеотидов. Биосинтез дезоксирибонуклеотидов. Регуляция этих процессов.
7. Соедините водородными связями комплементарные части дезоксиаденозина и тимидина; цитидина и гуанозина.
8. Напишите распад гуаниловой кислоты, включая образование мочевой кислоты.
9. Напишите распад цитидиловой кислоты, включая образование b-аланина.
10. У больного с мочой за сутки выделяется 1,5 г мочевой кислоты ( норма до 0,7 г), повышено ее содержание и в крови. Врач назначил лечебный препарат гипоксантин (аллопуринол), рекомендовал ограничить мясную пищу. Какую болезнь Вы диагностируете? Принцип действия гипоксантина (аллопуринола).
Лабораторная работа.
Определение мочевой кислоты в моче
Клинико-диагностическое значение метода.
В норме у человека с мочой выделяется 1,6-3,54 ммоль/сут мочевой кислоты (270-600мг/сут), как конечного продукта обмена пуриновых оснований.
Гипоурикурия отмечается при подагре (обострение), нефрите, почечной недостаточности.
Гиперурикурия отмечается при подагре, усиленном распаде нуклеопротеидов, при большом поступлении нуклеопротеидов в организм с пищей. У детей выделяется относительно больше мочевой кислоты, чем у взрослых. При подагре соли мочевой кислоты (ураты) откладываются в хрящах, мышцах, суставах. Содержание мочевой кислоты в крови может быть повышено, а с мочой выделяться меньше, чем в норме.
Принцип метода. Метод основан на способности мочевой кислоты восстанавливать фосфорно-вольфрамовый реактив в фосфорно-вольфрамовую синюю, интенсивность окраски которой пропорциональна содержанию мочевой кислоты. Количество фосфорно-вольфрамовой синей определяется путем титрования красной кровяной солью. При действии последней синее окрашивание исчезает.
ХОД РАБОТЫ: В колбу к 1,5 мл мочи прибавить 1 мл 20% раствора карбоната натрия и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива Фолина, перемешать и титровать 0,01Н раствором красной кровяной соли до исчезновения синего окрашивания. Для расчета содержания мочевой кислоты в моче необходимо знать, какое количество мочевой кислоты соответствует 1 мл K3[Fe(CN)6]. Например, на титрование стандартной пробы, где к 1,5 мл прибавили 1 мл 20% раствора Na2CO3 и 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, содержащего 0,5 мг мочевой кислоты в 1 мл, или 0,75 мг в 1,5 мл, пошло 0,81 мл феррицианида калия. Тогда 1 мл феррицианида калия (k) соответствует:
мг мочевой кислоты
|
, где
х – содержание мочевой кислоты;
0,8 мг мочевой кислоты соответствует 1 мл красной кровяной соли;
а – количество красной кровяной соли, пошедшее на титрование (мл);
в – суточный диурез в мл.
ЛИТЕРАТУРА ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ. Основная:
1. Берёзов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия: Учебник. – 3-е изд., перераб. и доп. - М.: Медицина, 2002, с. 469-478, 498-503.
2. Биохимия: Учебник/Под ред. Е.С. Северина. –М.: ГЭОТАР-МЕД, 2003, (Серия XXI век), с. 521-544.
3. Николаев А.Я. Биологическая химия. М.: Медицинское информационное агенство, 2001, с. 339-350.
4. Северин Е.С., Алейникова Т.Л., Осипов Е.В. Биохимия: Учебник. –М.: Медицина, 2000, с. 151-154.
5. Лекционный материал.
Дополнительная литература:
1. Биохимия. Краткий курс с упражнениями и задачами /Под ред. Члена-корренспондента РАН, проф. Е.С. Северина, проф. А.Я. Николаева. М.: ГЭОТАР-МЕД. 2001. -448 с.: ил. – (XXI век).
2. Марри Р. и соавтор. ‘‘Биохимия человека’’ М.: Мир, 1993, т. 2.