Коррекция исходного уровня.
Преподаватель в процессе совместного со студентами разбора материала темы занятия выясняет механизм действия ферментов, уточняет понятие энергии активации (энергетического барьера реакции) и способность ферментов уменьшать энергию активации, кинетику ферментативной реакции, теорию Михаэлиса-Ментен. Останавливается на вопросах номенклатуры и классификации ферментов. При рассмотрении классификации ферментов указать на три характерные особенности класса оксидоредуктаз, разобрать примеры (уравнения) подклассов фосфотрансфераз (гексокиназ), гликозилтрансфераз (фосфорилаза), аминотрансфераз (аланинаминотрансфераза) и ацетилтрансфераз (холинацетилтрансфераза) класса трансфераз; подклассов эстераз (липаза), гликозидаз (мальтаза), пептидгидролаз и амидогидролаз (аспарагиназа) класса гидролаз; подклассов С-С-лиаз (пируватдекарбоксилаза), С-О-лиаз (фумаратгидратаза) и С-N-лиаз (аспартат-аммиак-лиаза) класса лиаз; подклассов изомераз (триозофосфатизомераза) и мутаз (фосфоглицератмутаза) класса изомераз; подкласса С-О-лигаз (аминоацил-тРНК-синтетаза) класса лигаз (синтетаз).
Организация самостоятельной работы студентов.
В качестве ориентировочной основы действия используется «Практикум по биологической химии» (Строев Е.А., Макарова В.Г., 1986, работа 80, с.180-181) и Методические указания для студентов 2-го курса к лабораторным занятиям по биохимии.
Выполняемая работа.
1. Определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови амилокластическим методом.
Объяснение содержания лабораторной работы и формы
отчетности.
Работа выполняется студентами индивидуально в соответствии с ее описанием в практикуме. Протокол оформляется в виде нижеприводимой таблицы (см. рабочую тетрадь для студентов 2-го курса).
Самостоятельная работа студентов
Определение активности фермента проводится студентами попарно (один студент определяет активность в опытной пробе, другой – в контрольной). Студенты используют в качестве ориентировочной основы действия изложенное в практикуме описание методики определения активности фермента. Самостоятельно проводят расчеты и оформляют протокол. В процессе выполнения студентами лабораторной работы преподаватель контролирует и корректирует действия студентов, чтобы научить их необходимым практическим навыкам.
Итоговый контроль усвоения материала занятия.
Контроль усвоения материала занятия может осуществляться в форме индивидуальной беседы со студентами в процессе проверки протоколов. Для проведения контроля рекомендуется использовать следующие вопросы:
1. Принцип метода определения альфа-амилаза и ход определения.
2. Практическое значение количественного определения альфа - амилазы.
3. Каким образом проводится постановка опытной пробы?
4. Каким образом проводится постановка контрольной пробы?
5. Какие условия необходимо создать для определения активности альфа-амилазы?
6. Почему оптическая плотность опытного раствора ниже, чем контроля?
7. Каким образом рассчитывается активность альфа – амилазы?
8. В каких единицах выражается активность альфа – амилазы? Что они обозначают?
9. При каких заболеваниях наблюдается повышенная активность альфа – амилазы в крови?
10. Какова активность альфа-амилазы в крови в норме?
11. Какая реакция используется для окрашивания крахмала? Как зависит оптическая плотность от интенсивности окрашивания?
12. Укажите при каких условиях Вы проводили измерение оптической плотности на приборе?
Критерии достижения цели занятия.
1. Правильные ответы на поставленные вопросы.
2. Умение провести количественное определение альфа-амилазы.
3. Правильное оформление протокола и умение сделать расчет и сформулировать вывод.
| Таблица. | Определение активности альфа-амилазы в сыворотке крови унифицированным методом. | Принцип: метод основан на фотометрическом определении убыли крахмала в ходе реакции гидролиза его алифа-амилазой сыворотки крови. | Расчет (Ек - Е оп)0,01*2*1000 Х= Ек *0,1 = ? г/ч*л | В норме 15-30 г/ч л ВЫВОД: ? |
| ФЭК красный светофильтр, 1см, против воды | Ек=? | Еоп=? | ||
| Дистиллированная вода | до 50 мл | до 50 мл | ||
| Р-р йода в К I | 0,5 мл | 0,5 мл | ||
| Дистиллированная вода | 40,0 мл | 40,0 мл | ||
| Содержимое пробирки | 0,2 мл | 0,2 мл | ||
| № колбы | №1 контроль | №2 опыт | ||
| НСl 1М Р-р | - | 0,1 мл | ||
| термостат | 37°С 30 мин. | 37°С 30 мин. | ||
| Сыворотка крови | 0,1 мл | - | ||
| НCl 1М Р-р | 0,1 мл | - | ||
| Сыворотка крови | - | 0,1 мл | ||
| термостат | 37°С 10 мин. | 37°С 10 мин. | ||
| NaCl 30 г/л Р-р | 0,1 мл | 0,1 мл | ||
| Фосфатный буфер 0,1М рН=7,2 | 0,3 мл | 0,3 мл | ||
| Крахмал, 20 г/л раствор | 0,5 мл | 0,5 мл | ||
| № пробирки | №1 контроль | №2 опыт |
ЗАНЯТИЕ №11
Итоговое занятие по теме «Ферменты и витамины как их кофакторы». Итоговое тестирование по разделу. Контроль практических умений и навыков.
Работа на занятии.
Цели занятия.
- проверка и закрепление теоретических знаний;
- контроль усвоения практических навыков и умений по разделу.
Цели самоподготовки.
Для контроля навыков и умений
Студенты должны уметь:
- доказать зависимость активности фермента от температуры, рН среды, концентрации фермента и субстрата, наличия активаторов и ингибиторов ферментов;
- доказать специфичность действия ферментов.
Студенты должны знать:
- химическое строение ферментов-протеидов и ферментов-протеинов;
- строение и функции коферментов;
- биологическую роль витаминов, авитаминоз, гиповитаминоз, гипервитаминоз;
- строение и функции витаминов и их коферментных форм;
- понятие об активном, субстратном, аллостерическом центрах ферментов;
- свойства ферментов;
- механизм действия ферментов;
- номенклатуру и классификацию ферментов;
- характеристику классов и подклассов ферментов;
- ферментотерапию и ферментодиагностику;
- ответы на тестовые задания по разделу.
Хронокарта занятия.
| Этапы занятия | Время (мин.) | Дидактическая система |
| 1.Организационные вопросы | 2 мин. | Классическая |
| 2. Контроль уровня знаний по разделу и его коррекция | 90 мин. | Репетитор (хороший) |
| 3. Итоговый контроль усвоения материала раздела: а) тестирование; б) сдача студентами практических навыков и умений оформление протокола, проверка посещаемости лекций и их записей | 43 мин. | Программное управление |
Оснащение занятия.
1. Оборудование: пробирки, пипетки, склянки.
2. Реактивы: сульфаниловая кислота, 1% раствор; нитрит натрия, 5% раствор; бикарбонат натрия, 10% раствор; хлорное железо, 1% раствор; натриевая соль 2,6 дихлорфенолиндофенола, 0,001Н раствор.
3. Материал: контрольные пробы: с субстратом (крахмал) и ферментом (альфа – амилазой слюны).
4. Таблицы: «Классификация витаминов», «Классификация ферментов», «Схема активирования и ингибирования действия ферментов», «Схема строения молекул некоторых ферментов», «Пространственная модель альфа-химотрипсина».
Организационные вопросы.
Преподаватель выясняет, есть ли отсутствующие, обращает внимание на форму одежды студентов, сообщает цель занятия, предлагает подготовить для проверки записи лекций, проверяет посещаемость лекций.