Для определения индолообразования
В случае отсутствия среды 6.10. используется для теста на индол.
Для приготовления бульона основной перевар Хоттингера разводят дистиллированной водой (или водопроводной) до содержания аминного азота 120 - 130 мг%, добавляют хлористый натрий в концентрации 0,5%, K2HPO4 - 0,1%. Устанавливают рН 7,4 - 7,6 и кипятят 15 - 20 мин. Приготовленный бульон фильтруют через ватно-марлевый фильтр, разливают в пробирки по 5 - 8 мл. Стерилизуют при 1 атм. 20 мин.
Индикаторная бумажка на индол
Спирт этиловый 96° - 50 мл
парадиметиламинобензальдегид - 2,5 - 3,0 г
фосфорная кислота (конц.) - 10 мл
Добавленные в спирт ингредиенты смешать до полного растворения. Полученной желтоватой жидкостью смочить край, приблизительной на 1/3, полоски фильтровальной бумаги. Цвет смоченного конца полоски бумаги должен быть желтым. При образовании индола изучаемой культурой цвет бумажки меняется от сиренево-розового до интенсивно-малинового.
Среда Кларка
Пептон - 5 - 7 г
Глюкоза - 5 г
K2HPO4 - 5 г
дистиллированная вода - 1000 мл
Растворить ингредиенты, довести рН до 6,9 и профильтровать. Стерилизовать 20 мин при 115°С.
Раствор метилового красного для теста с метил-рот
Растворить 0,1 г метилового красного в 300 мл 90% этилового спирта. Развести до 500 мл стерильной водой, хранить при Т +4°С.
Реактивы для реакции Фогеса-Проскауэра
5% альфа-нафтол: растворить 5 г альфа-нафтола в 100 мл абсолютного этилового спирта. Хранить при Т +4°С.
40% КОН: растворить 40,0 г КОН (гранулы) приблизительно в 60 мл дистиллированной воды. Разбавить до 100 мл дистиллированной водой. Хранить при Т +4°С.
Цитратная среда Козера
Na(NH4)HPO4 - 1,5 г
K2HPO4 - 1 г
MgSO4 - 0,2 г
натрия цитрат трехзамещенный - 3 г
дистиллированная вода - 1000 мл
Растворить ингредиенты в 950 мл дистиллированной воды, добавить 10 мл 0,5% спиртового раствора бромтимолового синего. Установить рН 6,8, проверяя значение рН на потенциометре. Довести объем дистиллированной водой до 1 л. Разлить в пробирки по 10 мл, стерилизовать в течение 15 мин при 121°С.
Среда Симмонса
Среда готовится аналогично среде Козера (6.15.), но после измерения рН в нее добавляют 20 г +- 0,1 г агар-агара на 1 л. Прогревают на водяной бане до растапливания агара, стерилизуют в течение 15 мин при 121°С. Разливают в стерильные чашки Петри или пробирки.
Среда Ресселя с мочевиной из сухих питательных сред
К 100 мл горячей стерильной дистиллированной воды добавляют 4 г сухого препарата с индикатором ВР и лактозой, 0,1 г глюкозы и 1 г мочевины. Полученную среду разливают в стерильные пробирки по 5 - 6 мл и стерилизуют при 0,5 атм 20 мин., или текучим паром 2 дня подряд по 15 - 20 мин.
Тресахарный агар с мочевиной по Олькеницкому
К 100 мл стерильного питательного агара добавляют 1 г лактозы, 0,02 г соли Мора, 0,3 г гипосульфита, 1 г сахарозы, 0,1 г глюкозы, 1 г мочевины, 0,4% раствора фенолового красного 0,4 мл. Предварительно растворяют соль Мора с гипосульфитом в одной пробирке с небольшим количеством воды, а в другой - мочевину с углеводами. После растворения все смешивают с агаром и фильтруют через стерильную марлю. Стерилизуют текучим паром 3 дня подряд по 20 мин. Горячую среду скашивают в пробирках. Незасеянная среда имеет бледно-розовый цвет.
Солевой бульон
К 100 мл МПБ с рН 7,0 добавляют 6,5 г хлористого натрия. Разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 1 атм 20 мин.
Сахарный бульон
К 100 мл стерильного бульона Хоттингера с рН 7,2 - 7,4 и содержанием 130 - 150 мг% аминного азота, добавляют глюкозу в количестве 1,0 г. После растворения среду разливают в пробирки по 5 мл и стерилизуют при 0,5 атм в течение 20 мин.
Стерильное молоко
Стерильное молоко готовят из обезжиренного молока (кислотность 16 - 18°Т), которое разливают в пробирки по 10 мл. Стерилизуют при 0,75 атм 15 мин. Обезжиренное молоко получают путем центрифугирования или кипячения с последующим отстаиванием в цилиндре в холодильнике в течение 2-х дней.
Молочно-солевой агар
К 100 мл расплавленного и остуженного до 45°С 2% питательного агара с концентрацией 6,5% хлористого натрия добавляют в количестве 10 мл стерильное обезжиренное молоко. Среду тщательно перемешивают и разливают по чашкам.
Желточно-солевой агар
Желточно-солевой агар может быть приготовлен на основе сухого питательного агара, мясо-пептонного бульона или бульона Хоттингера.
При использовании МПБ к последнему добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия. При использовании бульона Хоттингера содержание аминного азота в нем должно составлять 150 мг%, для получения солевого агара добавляют 2% агар-агара и 6,5% хлористого натрия.
В случае использования сухого питательного агара к последнему добавляют 6,5% хлористого натрия.
Солевой агар разливают во флаконы по 200 мл и стерилизуют при 1 атм 30 мин.
Приготовление рабочего раствора желтка:
На дно стерильной чашки помещают яйцо, которое тщательно протирают ватой, смоченной спиртом. Пинцетом пробивают с двух противоположных сторон яйца 2 отверстия. Через одно из этих отверстий из яйца полностью удаляют белок, а затем, несколько увеличив отверстие, выливают желток в стерильную банку с 5 - 6 бусинами. К желтку постепенно добавляют частями по 20 - 30 мл 180 - 200 мл стерильного изотонического раствора NaCl. Затем содержимое тщательно встряхивают.
Приготовление чашек:
На 100 мл расплавленного и остуженного до 45°С солевого агара добавляют 20 мл рабочего раствора желтка. После полного размешивания агар в условиях бокса разливают в чашки по 15 - 17 мл. Чашки можно хранить в холодильнике до 1,5 - 2 недель.
Молочный агар
К 100 мл 2%-го расплавленного и остуженного до 45°С питательного агара добавляют 10 мл стерильного снятого молока. После тщательного перемешивания агар выливают в чашки по 12 - 15 мл.
Цитратная плазма кролика
Цитратная плазма кролика для реакции плазмокоагуляции выпускается в сухом виде. Готовят непосредственно перед употреблением согласно прописи, прилагаемой в наставлении.