Количественный метод
Мокрота. Берут 1 мл мокроты, добавляют 9 мл питательного бульона или 2% пептонной воды (разведение 1:9, т.е. 101) и гомогенизируют в банке со стеклянными бусами 20 мин. Гомогенизацию можно проводить в ступке, растирая мокроту со стерильным кварцевым песком, добавляя питательный бульон до конечного разведения 1:9. Из полученной эмульсии мокроты (1:9) готовят серийные разведения в бульоне (0,5 мл мокроты + 4,5 мл бульона) до 107, каждый разменяя пипетки. Посев осуществляют в обратном порядке с большего разведения. Засевают по 0,1 мл из разведений мокроты 10-7, 10-5 , 10-3,10-1 на чашку с 5% кровяным агаром и агаром с гретой кровью. Параллельный посев из указанных разведений на кровяном агаре помещают в эксикатор с горящей свечой. Посев на желточно – солевой агар, среду Эндо и Сабуро делают из исходного разведения 1:9. Инкубируют в течение суток при 370С. На 2-ые сутки чашки просматривают и подсчитывают каждый вид микроорганизма. Количество микроорганизмов определяют в максимальном разведении мокроты, в котором еще удалось обнаружить данный вид бактерий. Например: на кровяном агаре выросли 3 колонии пневмококка при посеве 0,1 мл мокроты с разведения 10-5 , следовательно, в 1 мл мокроты содержится 3х10 и умноженное на 105 (степень разведения) = 3000000 пневмококков или 3х106 . Диагностически значимым является обнаружение пневмококка и гемофильной палочки (до антибактериальной терапии) в 1 мл мокроты в концентрации 106 и выше. Аналогичные концентрации значимы и для условно – патогенных микроорганизмов в случае 2-3 кратного обнаружения с интервалом 3-5 дней.
Содержимое бронхов. При количественном подсчете бактерий бронхиальные смывы, представляющие собой гомогенную взвесь, условно принимают за разведение 1:9. Диагностически значимым является обнаружение пневмококков и гемофильной палочки (до антибактериальной терапии) в концентрации 104 . Аналогичные концентрации значимы и для условно - патогенных микроорганизмов в случае 2-3 кратного обнаружения с интервалом 3-5 дней.
Мазки из гортани и зева. При количественном исследовании тампоны тщательно суспендируют в 1 мл бульона и условно принимают за разведение 1:9.
Дальнейшее исследование этих материалов проводят как количественное определение мокроты.
Оценка результатов.
При воспалительных процессах дыхательных путей, когда высеваются условно - патогенные микроорганизмы, интерпретация полученных результатов представляет определенные трудности. Следует учитывать, что наличие или отсутствие в исследуемом материале микроорганизмов не может иметь решающего значения для диагноза.
Особое значение принадлежит количественной оценке роста различных видов микроорганизмов, выросших при первичном посеве на плотных питательных средах. Для ориентировочной оценки количественного роста микроорганизмов в ассоциации следует пользоваться следующими критериями: I - очень скудный рост - рост единичных колоний (до 10); II - скудный рост - рост 10-25 колоний; III - умеренный рост - рост множества сосчитываемых колоний (не менее 50); IV - обильный рост - сплошной рост несосчитываемых колоний.
III и IV степени роста обычно свидетельствуют об этиологической роли данного микроорганизма, I и II степени - о носительстве или контаминации.
О возбудителе необходимо судить на основании комплекса исследований: данных микроскопии первичных мазков, результатов посева на плотные питательные среды (количественная оценка роста различных видов микроорганизмов, однородность популяции при посеве на плотные питательные среды), учета анамнеза, клинических проявлений заболевания и результатов комплексной терапии.
Количественный метод обеспечивает выделение чистых культур микроорганизмов и дает возможность судить более точно об этиологической значимости выделенных микроорганизмов.
Следует подчеркнуть достаточную информативность и высокую корреляцию качественного и количественного методов посева при правильном их выполнении.
ГЛАВА 7
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ОТКРЫТЫХ ИНФИЦИРОВАННЫХ РАН
При появлении гнойно - воспалительного процесса в ране раневое отделяемое, гной, кусочки инфицированных тканей (грануляции, мышцы и др.) подвергают микробиологическому исследованию.
Возбудителями гнойно - воспалительных процессов могут быть представители различных родов, подавляющее большинство которых относят к так называемой "условно - патогенной" микрофлоре (аэробной, микроаэрофильной и анаэробной). Среди них чаще встречаются виды родов: Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, Escherichia, Proteus, Citrobacter, Klebsiella, Enterobacter, Hafnia, Serratia, Aeromonas, Alcaligenes, Acetobacter, Haemophilus, Peptococcus, Bacillus, Clostridium, Corynebacterium, Propionobacterium, Bacteroides, Nocardia, Listeria, Fusobacterium, Neisseria, Mycrococcus, Mycoplasma. Реже - Yersinia, Ervinia, Salmonella, Acinetobacter, Moraxella, Brucella, Candida, Actinomyces.
Микроорганизмы могут вызывать и поддерживать гнойный процесс как в монокультуре, так и в ассоциации.
Взятие исследуемого материала.
Взятие материала производит лечащий врач при соблюдении правил асептики. При взятии материала из раны стерильным ватным тампоном кожу вокруг раны предварительно обрабатывают спиртом или другим антисептиком, некротические массы, детрит и гной удаляют стерильной салфеткой. Взятие материала стерильным тампоном производят круговыми вращательными движениями от центра к периферии поверхности раны. Материал берут двумя тампонами, один из которых используют для микроскопии, а другой - для посева.
При наличии в ране дренажей для активной аспирации отделяемого, последнее отсасывают шприцем и в количестве 1-2 мл помещают в стерильную пробирку. Кусочки тканей, гной, промывную жидкость из дренажа также берут в стерильные пробирки при соблюдении всех правил асептики.
Не более чем через 1 час после взятия весь материал доставляют в микробиологическую лабораторию для немедленного посева. При невозможности доставить материал в течение этого времени, он должен храниться в холодильнике, но не более двух часов.