Дифференциация энтерококков внутри группы
Внутри группы энтерококки делятся по ферментативным, редуцирующим и гемолитическим свойствам на ряд видов и подвидов. Дифференциация культур энтерококка внутри группы ведется по схеме, представленной в таблице 5.
Первый день. Бульонные культуры энтерококков для установления их видовой принадлежности высевают параллельно на 3 среды: а) на энтерококковую дифференциально - диагностическую среду (далее-ЭДДС) для определения гемолитической, протеолитической активности и способности редуцировать ТТХ; б) на сахарно - дрожжевой агар для испытания резистентности исследуемой культуры к теллуриту калия, в) в столбик с 0,2% агаром для определения подвижности энтерококков.
Таблица 5
Дифференциация энтерококков внутри группы
| Виды и подвиды | Резистент-ность к теллуриту калия | Энтерококковая дифференци- ально-диагностическая среда | Подвижность | ||
| Редук-ция ТТХ | Гемо-лиз | Проте-олиз | |||
| S. faecalis | + | + | - | - | - |
| S.faecalis subsp zymogenes | + | + | + | +- | - |
| S.faecalis subsp liquefaciens | + | + | - | + | - |
| S. faecium | - | - | + - | - | - |
| Подвижные энтерококки | + | + | +- | - | + |
Второй день. 1. Через 15-18 часов предварительно учитывают гемолитическую активность энтерококков, ввиду того, что при инкубации в термостате многие штаммы энтерококков вырабатывают кислые продукты метаболизма со снижением рН питательной среды до 3,8-4,2, разрушением гемоглобина и появлением вокруг колоний зон бурого цвета.
При учете ферментативной (гемолитической и протеолитической) активности определяется 4 возможных варианта изменения ЭДДС: гемолитически активные штаммы энтерококков образуют вокруг колоний белые зоны, соответствующие цвету молочного агара; у протеолитически активных штаммов появляются четко выраженные темно - красные или бурые зоны вокруг колоний; при наличии обоих (гемолитического и протеолитического) ферментов среда вокруг колоний просветляется, приобретая вид обычного питательного агара; штаммы энтерококков, не продуцирующие этих ферментов, сред не изменяют.
В конце первых суток инкубации учитывают на этой же среде способность исследуемых культур к редукции 2,3,5-трифенилтетразолия хлорида (ТТХ). S. faecalis и его варианты (S. faecalis subsp. zymogenes, S. faecalis subsp. liquefaciens), восстанавливающие ТТХ, растут в виде вишнево - красных колоний с белыми ободками.
Вид S. faecium не восстанавливает ТТХ - колонии его бесцветны или окрашены в слабо - розовый цвет.
Подвижные формы энтерококков, обладая слабой редуцирующей активностью, образуют (особенно в первичном посеве материала) карликовые колонии розовых оттенков разной интенсивности.
На сахарно - дрожжевом агаре с теллуритом калия (0,07%) растут только штаммы вида S. faecalis, устойчивые к высоким концентрациям теллурита калия. В процессе роста они восстанавливают теллурит калия, образуя при этом черные колонии, окруженные узким бесцветным ободком.
В полужидком (0,2%) агаре, засеянном уколом, подвижные формы энтерококков вызывают диффузное помутнение всего столбика среды, тогда как неподвижные виды (S. faecium, S. faecalis и его разновидности) растут только по ходу прокола.
Таким образом, основными тестами дифференциации видов S. faecalis, S. faecium являются редукция ТТХ и устойчивость к теллуриту калия.
S. faecalis и его варианты: S. faecalis zymogenes, S. faecalis liquefaciens различаются по образованию гемолитического и протеолитического ферментов.
Основным диагностическим признаком подвижных энтерококков, позволяющим дифференцировать их от всех остальных видов этой группы, является подвижность.