Определение желатиназы по методу Ле-Минора

Принцип. Метод основан на способности протеолитического фермента желатиназы гидролизовать желатину до водорастворимых соединений.

Реактивы: засвеченная и проявленная фото- и кинопленки, калий фосфорнокислый однозамещенный 1/15 моль/л, натрий фосфорнокислый двузамещенный 1/15 моль/л (высушенный на воздухе в течение 12-14 дней).

Приготовление растворов:

Раствор А. Растворяют 9,078 г КН2РО4 в 1 л дистиллированной воды.

Раствор Б. Растворяют 11,876 г Na2НРО4 в 1 л дистиллированной воды.

Для получения фосфатного буфера, 1/15 моль/л, рН 7,1 берут 33,4 мл раствора А и 66,6 мл раствора Б и смешивают.

Ход исследований.

Используют фото- и кинопленку, предварительно засвеченную, проявленную и фиксированную. Пленку нарезают на квадраты размером 5х5 мм, стерилизуют в чашках Петри в автоклаве при 0,5 атм. (115 град. С) 30 минут (для предупреждения слипания пленок их помещают между прокладками фильтровальной бумаги). Стерильную пленку помещают в пробирки со взвесью 18-20 часовой агаровой культуры микробов в 1/15 моль/л растворе фосфатного буфера рН 7,1. Просветление 3/4 или всей поверхности пленки считается положительным результатом. Срок наблюдений - 1-5 дней.

 

ГЛАВА 17

МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ МИКРООРГАНИЗМОВ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae.

Семейство кишечных энтеробактерий (Enterobacteriaceae) объединяет грамотрицательные анаэробные и факультативно анаэробные бактерии, не образующие спор, капсульные и бескапсульные, подвижные или неподвижные, хорошо растущие на обычных питательных средах.

Облигатным признаком его представителей является ферментация глюкозы с образованием кислых или кислых и газообразных продуктов. Отношение к другим углеводам может у энтеробактерий варьировать.

Для энтеробактерий характерна способность восстанавливать нитраты, проявлять каталазную активность. Энтеробактерии не имеют фермента цитохромоксидазы.

Для дифференциации энтеробактерий от других семейств грамотрицательных бактерий основными тестами являются: тест на цитохромоксидазу, восстановление нитратов в нитриты, тест на каталазную активность и OF-тест (окислительно - ферментативный тест Хью-Лейфсона) для определения биохимических реакций с углеводами.

Наибольшее признание нашла в настоящее время классификация семейства Enterobacteriaceae, представленная в "Кратком определителе бактерий Берги", М., 1980 г. (см. таблицу 12).

Таблица 12

Классификация семейства Enterobacteriaceae

(Определитель бактерий Берджи, 1997 г.)

 

Род Вид Род Вид
Escherichia E.coli Salmonella S.choleraesuis
E.adecarboxylata S.hischfeldii
E.blattae S.typhi
E.hermanii S.paratyphi
E.vulneris S.schottmuelleri
E.fergusonii S.typhimurium
Edwardsiella E.tarda S.enteritidis
E.istaluri S.gallinarum
E. hoshinae S.salamae
Citrobacter C.freundii S.arizonae
C.diversus S.houtenae
C.amalonaticus S.bongori
Shigella S.dysenteriae S.ficaria
S.flexneri Proteus P.vulgaris
S.boydii P.mirabilis
S.sonnei P.myxofaciens
Klebsiella K. pneumoniae subspation (далее- subsp.) pneumoniae P.pennori
Providencia P.alcalifaciens
K. pneumoniae subsp. ozaenae P.stuartii
P.rettgeri
K. pneumoniae subsp. rhinoscleromatis P.rustigianii
P.heimbachae
K.oxitoca Morganella M.morganii
K.planticola Yersinia Y.pseudotuberculosis
K.terrigena Y.pestis
Enterobacter E.cloacae Y.enterocolitica
E.aerogenes Y.rohdei
E.taylorae Y.mollaretii
E.gergoviae Y.ruckeri
E.dissolvens Y.intermedia
E.amnigenus Y.frederiksenii
  E.hormaechei   Y.bercovieri
E.sacazaki Y.kristenii
E.intermedium Y.aldovae
E.asburiae Rahnella R.aquatilis
Hafnia H.alvei Xenorhabdus X.nematophilus
Serratia S.marcescens X.luminescens
S.liquefaciens Cedecea C.davisae
S.rubidaea C.lapagei
S.plymutica Tatumella T.ptyseos
S.proteamaculans Arsenophonus A.nasoniae
S.odorifera Budvicia B.agrestis
S.fonticola Ewingella E.americana
Erwinia E.amylovora Leclercia L.adecarboxylata
E.ananas Leminorella L.grimontii
E.salicis L.richardii
E.casticida Moellerella M.wisconsensis
E.tracheiphila Pantoea P.agglomeranc
E.chrysantemii P.dispersa
E.nigrifluens Pragia P.fontium
E.quercina Yokenella Y.regensburgei
E.rubrifaciens
E.stewartii
E.persicinas
E.uredovora
E.psidii
E.cypripedii
E.rhapontici
E.caratovora
E.mallotivora
Obssumbac- terium O.proteus
Kluyvera K.ascorbata
K.creyoerescens

В отличие от прежних представлений теперь считают, что практически любой представитель семейства энтеробактерий может быть причастен, при определенных обстоятельствах, к возникновению инфекционного процесса различной локализации.