Методичні вказівки до виконання роботи.
Методика мікроскопічних досліджень
Мета заняття:актуалізувати знання про принципи роботи оптичних приладів, отримані в загальноосвітній школі; вивчити будову біологічного мікроскопу марки МБР або БІОЛАМ, бінокулярного мікроскопу; засвоїти правила роботи з мікроскопом; ознайомитися з методикою приготування постійних та тимчасових мікропрепаратів з рослинних об’єктів, навчитися виготовляти тимчасові мікропрепарати.
Матеріали та обладнання:мікроскопи, набір постійних мікропрепаратів з анатомії рослин, канадський бальзам, набір хімічних реактивів, предметні і накривні скельця, препарувальні голки, пилок квітів лаватери (Lavatera).
Питання для контролю (конспект).
1. Що таке роздільна здатність мікроскопа?
2. Що таке робоча відстань об’єктиву?
3. Принцип роботи світлового мікроскопа.
4. Від яких частин оптичної системи залежить виявлення дрібних деталей структури об'єкту (корисне збільшення)?
5. Чи існують межі для безмежного збільшення?
6. Для чого потрібне накривне скло?
7. В чому відмінність детального малюнку від схематичного?
Методичні вказівки до виконання роботи.
1. Вивчення будови світлового мікроскопу.
Користуючись малюнком „Будова мікроскопу” та лабораторним мікроскопом, вивчити його будову.
Біологічний мікроскоп — оптичний прилад, з допомогою якого можна розглядати клітини і тканини рослинного організму. Будова мікроскопу досить проста, однак невміле користування призводить до його псування. Ось чому необхідно добре засвоїти будову мікроскопу і основні правила роботи з ним.
В мікроскопі будь-якої марки виділяють наступні системи: оптичну, освітлювальну і механічну. До оптичної належать об'єктиви і окуляри. Об'єктиви служать для збільшення зображення об'єкту і складаються з системи лінз. Ступінь збільшення об'єктива знаходиться в прямій залежності від числа лінз. Об'єктив з великим збільшенням має 8-10 лінз. Першу лінзу, звернену до препарату, називають фронтальною. Збільшення об'єктиву позначено на ньому цифрами: 8х, 40х. 90х Розрізняють робочу відстань об'єктиву, тобто відстань від накривного скельця до фронтальної лінзи. Робоча відстань при об'єктиві 8х дорівнює 13,8 мм; при 40х-0,6 і при об'єктиві 90х — 0,12 мм.
Окуляр служить для збільшення зображення, яке йде від об'єктиву. Він складається з 2-3 лінз, вмонтованих в металічний циліндр — тубус. При заміні окулярів можна одержати збільшення: 7х, 10х, 15х. Для визначення загального збільшення мікроскопу слід перемножити збільшення об'єктиву на збільшення окуляру. За допомогою мікроскопів МБР і БЮЛАМ можна одержати збільшення від 56 до 1350 разів.
Освітлювальна система складається із дзеркала і конденсора з ірисовою діафрагмою, які призначені для освітлення об'єкта пучком світла. Дзеркало служить для збирання і спрямування променів світла на об'єкт і має дві поверхні: увігнуту і плоску. В навчальних лабораторіях частіше користуються увігнутою частиною дзеркала.
Конденсор складається з 2-3 лінз, вставлених в металічний циліндр і призначених для конденсації чи розсіювання світла, яке падає із дзеркала на об'єкт. Ірисова діафрагма розміщена між дзеркалом і конденсором, складається з тонких металевих пластинок. Діафрагма служить для регулювання світлового потоку, спрямованого дзеркалом через конденсор на об'єктив.
Механічна система мікроскопу складається із підставки, мікро- і макрогвинтів, тубусотримача, револьвера і предметного столика. Мікрометричний гвинт служить для незначного переміщення тубусотримача і об'єктиву, на відстань, що вимірюється мікрометрами (мкм). Повний оберт мікрогвинта пересуває тубусотримач на 100 мкм, оберт на одну поділку — приблизно на 2 мкм. Макрогвинт використовують для значного переміщення тубусотримача. Ним користуються для фіксування об'єкту на малому збільшенні. В тубус — циліндр - зверху вставляють окуляри різного збільшення. Револьвер служить для швидкої зміни окулярів, які вгвинчуються в його гнізда. Предметний столик служить для розміщення на ньому препарату, який фіксується за допомогою двох зажимів.
Правила роботи з мікроскопом.
· М'якою тканиною протирають оптичну частину мікроскопу.
· Ставлять мікроскоп біля краю столу зліва від себе так, щоб окуляр знаходився напроти лівого ока дослідника і мікроскоп підчас роботи не пересувався. Робочий зошит і всі необхідні предмети розміщують справа від мікроскопу.
· Повністю відкривають діафрагму. Конденсор ставлять в напівопущене положення. Встановлюють револьвер в робоче положення на збільшення 8х.
· За допомогою дзеркала спрямовують потік світу в систему лінз конденсора. При цьому лінза конденсора, що знаходиться під отвором предметного столика, повинна бути яскраво освітлена.
· Переводять мікроскоп при малому збільшенні (8х) в робоче положення — установлюють об'єктив на відстані 1 см від предметного столика і, дивлячись в окуляр, перевіряють освітлення поля зору. Воно повинно бути яскраво освітлене.
· На предметний столик поміщають досліджуваний об'єкт і повільно піднімають тубус мікроскопу до появи чіткого зображення. Вивчають мікропрепарат при малому збільшенні.
· Для вивчення будь-якої ділянки об'єкту при великому збільшенні cпочатку поміщають цю ділянку в центр поля зору об'єктиву малого збільшення. Після цього повертають револьвер так, щоб об'єктив 40х зайняв робоче положення. За допомогою мікрогвинта добиваються чіткого зображення об'єкту. Різкість зображення регулюють за допомогою діафрагми.
· Після закінчення роботи переводять мікроскоп з великого на мале збільшення. Знімають з предметного столика об'єкт і переводять мікроскоп в неробоче положення. Накривають мікроскоп марлевою серветкою.
НЕОБХІДНО ПАМ’ЯТАТИ:
· Забороняється торкатися руками до оптичних частин мікроскопу.
· Щоб попередити пошкодження фронтальної лінзи наводку необхідно здійснювати шляхом зворотнього руху: після установки мікропрепарату, дивлячись збоку на об’єктив, приблизити тубусортимач на відстань трохи менше нормативного, а потім відсувати тубусотримач від мікропрепарата.
· Необхідно дуже акуратно і обережно користуватися об'єктивами великого збільшення, щоб не пошкодити фронтальну лінзу. При великому збільшенні користуватися тільки мікрометричним гвинтом.
· Щоб уникнути псування мікрометричного механізму, дозволяється обертати мікрометричний гвинт в один бік не більше чим на половину оберту.
2. Ознайомитися з технологією виготовлення постійних та тимчасових мікропрепаратів. Роздивитися колекцію постійних мікропрепаратів та набір реактивів.
3. Приготувати тимчасовий мікропрепарат пилку лаватери. Виконати малюнок при великому збільшенні (рис. 1.1).
· М'якою тканиною протерти скельця перед роботою.
· Виготовити суспензію свіжого пилку в 5-8% розчині сахарози (сухого пилку – в краплі підігрітого гліцерину).
· На середину предметного скельця піпеткою наносять краплю рідини із пилковими зернами.
· Закривають краплину накривним скельцем так, щоб під скельце не потрапило повітря. Залишки води видалити фільтрувальним папером.
· Препарат поміщають на предметний столик і розглядають спочатку при малому, а потім при великому збільшенні.
6. Приготувати забарвлений тимчасовий мікропрепарат епідерми соковитої луски цибулі. Замалювати при малому та великому збільшенні (рис. 1.2).
· Підготувати предметне та покривне скельця до роботи та нанести краплю дистильованої води.
· Пінцетом або препарувальною голкою зняти шматочок (менш ніж 0,5 см2) епідерми з ввігнутої поверхні луски.
· Занурити шматочок епідерми в краплю води на предметному склі, розправити препарувальною голкою, закрити накривним скельцем. Видалити залишки води.
· Забарвити мікропрепарат розчином йоду в йодистому калії: краплю реактиву нанести на предметне скло біля покривного скельця, з іншого боку покласти фільтрувальний папір.
· Помістити мікропрепарат на предметний столик. Мікроскопувати спочатку при малому збільшенні, а потім переводять на велике.
Використання розчину йоду в йодистому калії робить чітко помітною границю між цитоплазмою і вакуолями. Даний реактив також є реактивом на білок, тому в результаті реакції білки цитоплазми набувають жовтого кольору, білки ядра - темно-жовтого, вакуолі - більш світлого кольору, клітинна оболонка залишається безбарвною.
Завдання для самостійної роботи (виконуються письмово).
1.Заповнити таблицю „ Частини мікроскопу”:
| Системи мікроскопу | Частини систем | Функції частин |
| Механічна система Оптична система Освітлювальна система |
2. Вивчити правила роботи з мікроскопом. Підготуватися до тесту на допуск до роботи з мікроскопом.
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 2.